紅細(xì)胞檢驗(yàn)的基本方法-預(yù)覽頁
【正文】 功能衰竭等。 參考值： 血清葉酸：成年男性 ～ ／ L 女性 ～ ／ L 紅細(xì)胞葉酸：成人 340～ 1020nmol／ L紅細(xì)胞 臨床評價(jià)： 紅細(xì)胞與血清中的葉酸濃度相差幾十倍，當(dāng) 未發(fā)生巨幼細(xì)胞貧血時(shí)，紅細(xì)胞葉酸測定對 判斷葉酸缺乏尤其有價(jià)值。 參考值： 成人 148～ 660pmol／ L 臨床評價(jià) ： 降低： 增高： 白血病患者 真性紅細(xì)胞增多癥 惡性腫瘤和肝細(xì)胞損傷 巨幼細(xì)胞貧血。 參考值： 陰性：正常人，比值 ≤ 177。 參考值： 半壽期為 25～ 32天 臨床評價(jià)： 紅細(xì)胞壽命縮短： （ 1）溶血性貧血，約為 14天。 plasma and serum 四、血漿高鐵血紅素白蛋白檢測 高鐵血紅素白蛋白 +硫化銨 銨血色原 用光譜儀在綠光區(qū) 558nm 處有一最佳吸收區(qū)帶。 參考值： 電泳法 － 臨床評價(jià)： ：常見于各種溶血，尤其是血管內(nèi)溶血。 參考值： 正常人呈陰性 臨床評價(jià)： ① 增加：先天性紅細(xì)胞生成性卟啉病、遲發(fā)性皮膚型卟啉病、肝紅細(xì)胞生成型卟啉病等。尿中含鐵血黃素是不 穩(wěn)定的鐵蛋白聚合體，其中的高鐵離子與亞 鐵氰化鉀作用，在酸性環(huán)境下產(chǎn)生普魯士藍(lán) 色的亞鐵氰化鐵沉淀。 ②溶血初期，雖然有血紅蛋白尿，此時(shí)本試驗(yàn)可呈陰性反應(yīng)。 ②脆性降低：珠蛋白生成障礙性貧血、血紅蛋白 C、 D、 E病，低色素性貧血、肝疾病等。 臨床評價(jià)： ① 遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥自身溶血率增加，加入葡萄糖或 ATP后明顯糾正。 ⑤本試驗(yàn)不夠敏感和特異，僅對遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥有較大診斷價(jià)值 . 二、自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn) 原理： 三、紅細(xì)胞膜三磷酸腺苷活性測定 Na＋ － K＋ － ATP酶、 Ca2＋ － Mg2＋ － ATP酶和 Mg2＋－ ATP 酶都是紅細(xì)胞膜上的 ATP酶。mg 膜蛋白 四、酸化甘油溶血試驗(yàn) 當(dāng)甘油存在于低滲溶液氯化鈉磷酸緩沖液時(shí)， 可阻止其中的水快速進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，使溶血過 程緩慢。自身免疫性溶血性貧血、腎 功能衰竭、妊娠等 AGLT50也可縮短。高滲冷溶血試驗(yàn)（ hyperosmotic cold hemolysis test）即測定紅細(xì)胞在不同濃度的高滲緩沖液中，從 37℃ 水浴立即置于 0℃ 水浴一定時(shí)間的最大溶血率。 原理： 六、紅細(xì)胞膜蛋白電泳分析 原理： 將制備的紅細(xì)胞膜樣品進(jìn)行 SDS－ PAGE(SDS聚丙烯酰胺凝膠 )電泳，根據(jù)樣品中各蛋白相對分子質(zhì)量的不同，分離得到紅細(xì)胞膜蛋白的電泳圖譜，從而可見各膜蛋白組分百分率。某些血紅 蛋白病骨架蛋白等可明顯異常。 中間缺乏（雜合子）為 31％～ 74％，嚴(yán)重缺 乏（半合子或純合子）＜ 30％。但還原型谷胱甘肽缺 乏癥也增高；不穩(wěn)定血紅蛋白病含小體的細(xì) 胞百分率為 75％～ 84％， HbH病和化學(xué)物質(zhì)中 毒時(shí)也增高。 G6PD缺陷者熒光很弱或無熒光；雜合子或某些 G6PD變異者則可能有輕到中度熒光。 參考值： 正常人丙酮酸激酶活性斑點(diǎn)在 25分鐘內(nèi)消失。 原理 ： 五、谷胱甘肽還原酶缺陷檢測 谷胱甘肽還原酶（ GR）催化反應(yīng)中 NADPH轉(zhuǎn)變?yōu)?NADP＋ ，熒光消失，通過在 365nm處觀察熒光斑點(diǎn)消失的時(shí)間（ GR熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)）反映谷胱甘肽還原酶的活性，或直接測定吸光度的變化（ GR活性定量試驗(yàn)）計(jì)算 GR的活性 。 參考值： 正常人＜（ 1％） 臨床評價(jià)： ① 不穩(wěn)定血紅蛋白?。悍跤?1～ 3小時(shí)多數(shù)紅細(xì)胞內(nèi)可出現(xiàn)變性珠蛋白肽鏈沉淀形成的包涵體。 血紅蛋白電泳圖譜 參考值： （ 1） 。 ② HbA2增多，見于 β 珠蛋白生成障礙性貧血，為雜合子的重要實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)。胎兒血紅蛋白（ HbF）抗堿變性作用強(qiáng)， 沒有變性存在于上清液中， HbA變性沉淀，取 上清液于 540nm處測定吸光度，檢測出 HbF的 濃度。 ③ HbF生理性增多見于孕婦和新生兒。 臨床評價(jià)： 著色細(xì)胞增加：珠蛋白合成障礙性貧血 重型患者大多數(shù)紅細(xì)胞染成紅色； 輕型患者可見少數(shù)染成紅色的細(xì)胞； 遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)綜合征紅細(xì)胞均為紅色 。血液中含有 較多 HbF、 HbH、 HbE時(shí)也可出現(xiàn)陽性結(jié)果。 參考值： 正常血紅蛋白 HbA裂解后出現(xiàn) β 、 HbA、 HbA2 和 α 四條帶。 參考值： 正常人 HbA裂解為兩條肽鏈，在 維膜電泳時(shí)，向陽極泳動(dòng)的為 β 鏈，向陰極 泳動(dòng)的為 α 鏈。 原理： 十、血紅蛋白基因 PCR技術(shù)檢測 應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）技術(shù)檢測血紅蛋 白基因序列，一般 PCR產(chǎn)物用 DNA印跡法、酶 切法或直接測序等方法進(jìn)行檢測。 酸化血清溶血試驗(yàn)，也稱 Ham’s test ，即紅細(xì) 胞在酸性（ ～ ）的正常血清中孵育， 補(bǔ)體被激活， PNH紅細(xì)胞破壞而產(chǎn)生溶血。 假陽性：白血病、骨髓硬化。 第八節(jié) 免疫性溶血性貧血的檢驗(yàn) 抗人球蛋白試驗(yàn) 原理： 抗人球蛋白試驗(yàn) 直接 Coombs試驗(yàn)： 間接 Coombs試驗(yàn) : 應(yīng)用抗人球蛋白試劑（抗 IgG/或抗 C3d）與紅細(xì)胞表面的 IgG分子結(jié)合，如紅細(xì)胞表面存在自身抗體，出現(xiàn)凝集反應(yīng)。凝集反應(yīng)的高峰在 0～ 4℃ ，當(dāng)溫度回升到 37℃ 時(shí)凝集消失。 謝謝！
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