20xx年醫(yī)學(xué)專題—第四章-細(xì)胞破碎-全文預(yù)覽
【正文】 到靜止的撞擊環(huán)上，被迫改變方向從出口管流出。)破碎法又可分為 勻漿法（homogenization） 珠磨法（bead grinding） 超聲波破碎法（ultrasonication）,43,第四十三頁，共六十八頁。,能分解細(xì)胞壁中的磷脂，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，胞內(nèi)物質(zhì)被釋放出來。圖4.32表示了該表面活性增溶的原理。同樣，這種清潔劑既有親水基團(tuán)又有疏水基團(tuán)。,39,第三十九頁，共六十八頁。o)是烷基胺鹽。nɡ y242。nɡ y242。在硬水中，由于Ca2+與羧酸基團(tuán)形成不可溶的沉淀，而使肥皂失效。n jī)磺酸鈉）是典型的陰離子表面活性劑。,34,第三十四頁，共六十八頁。,方法有效在于表面活性劑的化學(xué)性質(zhì)，化學(xué)性質(zhì)由圖4.31所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)表示(biǎosh236。 非離子型如Triton X100和吐溫（Tween）等 對疏水性物質(zhì)具有很強(qiáng)的親和力，能結(jié)合并溶解磷脂，破壞內(nèi)膜的磷脂雙分子層，使某些胞內(nèi)物質(zhì)釋放出來。n)活性劑能將細(xì)胞壁破碎，制成的懸浮液可用離心分離除去細(xì)胞碎片，再用吸附柱或萃取劑分離制得產(chǎn)品。n)活性劑的增溶法。xu233。 由此可見滲透壓必須很大，才導(dǎo)致了細(xì)胞的破碎。,由該方程知細(xì)胞內(nèi)壓力必須(b236。且x1很小時就有：,28,第二十八頁，共六十八頁。0 H20+VH2oPin+RT ln(1x1) (4.32),27,第二十七頁，共六十八頁。H20 (inside) (4.31),26,第二十六頁，共六十八頁。,25,第二十五頁，共六十八頁。 成本低，反應(yīng)激烈，不具選擇性。堿加入細(xì)胞懸浮液中后和細(xì)胞壁進(jìn)行了多種反應(yīng)，包括使磷脂皂化。nɡ)的酶) 產(chǎn)物抑制的存在。) 能選擇性地釋放產(chǎn)物 胞內(nèi)核酸等泄出量少，細(xì)胞外形較完整,缺點(diǎn)： 溶酶價格高， 溶酶法通用性差（不同(b249。)細(xì)胞壁的組分主要是纖維素、葡聚糖、幾丁質(zhì)等，常用蝸牛酶、纖維素酶、多糖酶等。革蘭氏陽性菌懸浮液中加入溶菌酶，很快就產(chǎn)生溶壁現(xiàn)象。,20,第二十頁，共六十八頁。,外加(w224。ng)溶解細(xì)胞壁的酶處理菌體細(xì)胞，使細(xì)胞壁受到破壞后，再利用(l236。,酶消化法和堿處理法都是細(xì)胞破碎的有效方法(fāngfǎ)，但是也都有各自的缺點(diǎn)。)方法,16,第十六頁，共六十八頁。,表 4.01. 細(xì)胞機(jī)械(jīxi232。,細(xì)胞破碎(p242。nɡ)。,植物(zh237。纖維素是長鏈D葡聚糖，許多這樣的長鏈形成微纖絲。)細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu),對于已生長結(jié)束的植物細(xì)胞壁可分為初生壁和次生壁兩部分。nɡ)和結(jié)構(gòu),細(xì)胞壁的組成(zǔ ch233。i)三種聚合物 最外層(a)是α和β葡聚糖的混合物， 第2層(b)是糖蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 第3層(c)主要是蛋白質(zhì)， 最內(nèi)層(d)主要是幾丁質(zhì)。 與酵母和細(xì)菌的細(xì)胞壁一樣，真菌細(xì)胞壁的強(qiáng)度和聚合物的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有關(guān)，不僅如此，它還含有幾丁質(zhì)或纖維素的纖維狀結(jié)構(gòu)，所以強(qiáng)度有所提高。,8,第八頁，共六十八頁。omǔ)細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)示意圖,最里層是由葡聚糖的細(xì)纖維組成，它構(gòu)成了細(xì)胞壁的剛性骨架，使細(xì)胞具有一定的形狀， 上面的是一層糖蛋白， 最外層是甘露聚糖，由1,6磷酸二酯鍵連接成網(wǎng)狀。 革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與革蘭氏陽性菌有很大不同。,細(xì)菌(x236。,細(xì)菌(x236。 通常細(xì)胞壁較堅(jiān)韌，細(xì)胞膜脆弱，易受滲透壓沖擊而破碎，因此細(xì)胞破碎的阻力主要來自于細(xì)胞壁。,4,第四頁，共六十八頁。,概 述,細(xì)胞破碎（cell rupture）技術(shù)是指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)包括目的產(chǎn)物成分釋放出來的技術(shù)。 脂類物質(zhì)(w249。i sh249。y第四章 細(xì) 胞 破 碎,1,第一頁，共六十八頁。),不同類型的細(xì)胞分泌目標(biāo)產(chǎn)物的類型： 動物細(xì)胞多分泌到細(xì)胞外培養(yǎng)液 植物細(xì)胞多為胞內(nèi)產(chǎn)物 微生物（細(xì)菌/酵母/真菌）胞內(nèi)、胞外 對于(du236。,概述(ɡ224。 尤其是由基因工程菌產(chǎn)生的大多數(shù)蛋白質(zhì)是在細(xì)胞內(nèi)沉積。,3,第三頁，共六十八頁。 gāo)其破碎率，有必要了解各種微生物細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)。u),微生物細(xì)胞和植物細(xì)胞外層均為細(xì)胞壁，細(xì)胞壁里面是細(xì)胞膜，動物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁，僅有細(xì)胞膜。,5,第五頁，共六十八頁。,6,第六頁，共六十八頁。n)的數(shù)量和其交聯(lián)的程度。,酵母(ji224。)程度和它的厚度。)含纖維素。nz224。,細(xì)胞壁的組成(zǔ ch233。w249。 由多糖和蛋白質(zhì)構(gòu)成，多糖主要成分為纖維素、半纖維素和果膠類物質(zhì)。,12,第十二頁，共六十八頁。次生壁一般較厚(4μm以上)，常有三層組成(zǔ ch233。,13,第十三頁，共六十八頁。bāo)化學(xué)破碎法,14,第十四頁，共六十八頁。xu233。,17,第十七頁，共六十八頁。y242。 1）外加酶法,19,第十九頁，共六十八頁
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