20xx年醫(yī)學(xué)專題—第四章-細(xì)胞破碎(參考版)
2024-11-16 00:59本頁面
【正文】 67,第六十八頁，共六十八頁。含有包含體的基因工程菌（因包含體堅(jiān)硬，易損傷勻漿閥）。n)又有疏水基團(tuán)(jī tu225。若包內(nèi)物為稀溶液，其偏摩爾體積等于純水的摩爾體積。VH2o——水的偏摩爾體積。181。微生物（細(xì)菌/酵母/真菌）胞內(nèi)、胞外。ir243。)細(xì)胞破碎方法時(shí)需要考慮哪些因素？,67,第六十七頁，共六十八頁。,66,第六十六頁，共六十八頁。ng)。當(dāng)目標(biāo)產(chǎn)物存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)時(shí)，則需采用強(qiáng)烈的機(jī)械破碎法． 當(dāng)目標(biāo)產(chǎn)物處于與細(xì)胞膜或細(xì)胞壁結(jié)合的狀態(tài)時(shí)，調(diào)節(jié)溶液PH值，離子強(qiáng)度或添加與目標(biāo)產(chǎn)物具有親和性的試劑如：螯合劑、表面活性劑等，使目標(biāo)產(chǎn)物容易溶解釋放(sh236。,選擇性釋放目標(biāo)(m249。)方法的依據(jù)：,細(xì)胞處理量； 細(xì)胞壁強(qiáng)度和結(jié)構(gòu)(高聚物交聯(lián)程度、種類和壁厚度)； 目標(biāo)產(chǎn)物(chǎnw249。,選擇破碎(p242。o)法,63,第六十三頁，共六十八頁。 氣流干燥主要適用于酵母菌，一般在2530℃的氣流中吹干； 真空干燥多用于細(xì)菌。當(dāng)采用丙酮、丁醇或緩沖液等對干燥細(xì)胞(x236。bāo)結(jié)合水分喪失，從而改變細(xì)胞(x236。,62,第六十二頁，共六十八頁。 一方面能使細(xì)胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂，從而增加細(xì)胞的親水性能， 另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶，形成冰晶粒，引起細(xì)胞膨脹而破裂。nh242。ngji233。,61,第六十一頁，共六十八頁。 自溶作用：改變其生長環(huán)境（溫度、ｐＨ、緩沖液），可以誘發(fā)產(chǎn)生過剩的這種酶或激發(fā)產(chǎn)生其它的自溶酶，以達(dá)到自溶目的。ng),自溶作用是酶解的另一種方法，利用生物體自身產(chǎn)生的酶來溶胞，而不需外加其他的酶。,1）.自溶作用(zu242。y242。,3 其它(q237。,58,第五十八頁，共六十八頁。 但超聲波產(chǎn)生的化學(xué)自由基團(tuán)能使某些敏感性活性物質(zhì)失活。)微生物的破碎。 su236。,57,第五十七頁，共六十八頁。)。bāo)粉碎機(jī),一般認(rèn)為在超聲波作用下液體發(fā)生空化作用（cavitation), 液體中局部空穴的形成、增大和閉合產(chǎn)生極大的沖擊波和剪切力，引起的粘滯性旋渦在細(xì)胞上造成了剪切力，使細(xì)胞內(nèi)液體發(fā)生流動(dòng)，從而使細(xì)胞破碎(p242。 su236。,56,第五十六頁，共六十八頁。 超聲波振蕩器以可分為槽式和探頭直接插入介質(zhì)兩種型式，一般破碎效果后者比前者好。 su236。 su236。,55,第五十五頁，共六十八頁。,珠磨法的破碎率一般控制在80%以下(yǐxi224。jiān)的一級反應(yīng)速度過程，符合下列公式： ln[1/(1R)]=Kt 45 R — 破碎率；K一 一級反應(yīng)速度常數(shù)；t一 時(shí)間。 su236。,54,第五十四頁，共六十八頁。yǒu)冷卻夾套的圓筒形磨室 B具有冷卻裝置的攪拌軸和圓盤 C環(huán)形震動(dòng)俠縫分離器 D變速馬達(dá) 1和2料液進(jìn)出口 3和4 攪拌冷卻劑進(jìn)出口 5和6磨室冷卻劑進(jìn)出口,園盤以兩種位置交錯(cuò)地安裝在軸上， 一種處于徑向，一種與軸傾斜， 徑向盤使磨料沿徑向運(yùn)動(dòng)，傾斜盤則產(chǎn)生(chǎnshēng)軸向運(yùn)動(dòng)。,Netzsch LM20型珠磨機(jī)(m243。 由于操作過程中會產(chǎn)生熱量， 故磨室還裝有冷卻夾套，以冷 卻細(xì)胞懸浮液和玻離小珠。nɡ zhu224。,高速珠磨機(jī)工作(gōngzu242。nn233。)攪拌或研磨，研磨劑、珠子與細(xì)胞之間的互相剪切、碰撞，使細(xì)胞破碎，釋放出內(nèi)含物。,2）珠磨法 bead mill,珠磨是常用的方法 細(xì)胞懸浮液與極細(xì)的玻璃小珠、石英砂、氧化鋁等研磨劑（直徑小于1mm）一起快速(ku224。 優(yōu)點(diǎn)是適用的范圍廣，破碎率高，細(xì)胞碎片的粉碎程度低以及活性的保留率高 對冷凍一融解敏感(mǐngǎn)的生化物質(zhì)不適用。 細(xì)胞破碎是由于冰晶體在受壓時(shí)的相變，包埋在冰中的細(xì)胞變形所引起的。,高壓勻漿(y,影響高壓勻漿器細(xì)胞(x236。 ch225。 在工業(yè)生產(chǎn)中，通常采用的壓力為55－70Mpa。,升高壓力有利于破碎， 減少細(xì)胞的循環(huán)次數(shù)，甚至一次通過勻漿閥就可達(dá)到幾乎完全的破碎，這樣就可避免細(xì)胞碎片不至過小。)； P － 操作壓力，MPa； ɑ－ 與微生物種類有關(guān)的常數(shù)。bāo)破碎因素,被破碎的細(xì)胞分率符合如下公式： ln[1/(1R)]=KNPɑ (44) 式中 R — 破碎率，為N次循環(huán)后，蛋白質(zhì)的釋放量Rn與最大釋放量Rm之比； K － 與溫度有關(guān)的速度常數(shù)(ch225。 易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌， 較小的革蘭氏陽性菌， 含有包含體的基因工程菌（因包含體堅(jiān)硬，易損傷勻漿閥）,48,第四十八頁，共六十八頁。ng)的范圍,—大規(guī)模細(xì)胞破碎的常用方法 高壓勻漿法適用的范圍： 酵母和大多數(shù)細(xì)菌細(xì)胞的破碎； 料液細(xì)胞濃度可以(kěyǐ)很高，20%左右。,高壓勻漿法適用(sh2
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