【正文】 色譜（高壓） 液固吸附色譜 液液分配色譜（鍵合相色譜） 離子交換色譜 空間排阻色譜根據(jù)固定相和流動(dòng)相相對極性有兩種操作 方式： 正相色譜：固定相流動(dòng)相 反相色譜：固定相流動(dòng)相2 高效液相色譜儀器及操作HPLC由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。內(nèi)標(biāo)法：在試樣中加入能與所有組分完全分離的已知量的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，用校正因子校正待測組分的峰值，并與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰值進(jìn)行比較，求出待測組分含量的方法。定量分析： 定量分析就是根據(jù)色譜峰的峰高或峰面積來計(jì)算樣品中各組分的含量。n 影響靈敏度的因素： 加在銣珠上的電壓：電壓越大，靈敏度越高，但銣珠壽命會(huì)降低。 磷濾光片的波長是526nm，呈黃綠色。對含硫或磷的化合物具有較高的選擇性和靈敏度，檢出限可達(dá) 1012g（對P）或1011g（對S）。常用檢測器：火焰離子化檢測器（FID）火焰光度檢測器（FPD）電子捕獲檢測器（ECD）氮磷檢測器（NPD）火焰離子化檢測器（FID）n 特點(diǎn)： 能檢測大多數(shù)含碳有機(jī)化合物，結(jié)構(gòu)簡單，性能穩(wěn)定，靈敏度較高，線性范圍寬。n 靈敏度：單位時(shí)間或單位體積載氣內(nèi)一定量的物質(zhì)通過檢測器時(shí)所產(chǎn)生的信號(hào)的大小。n 每次開機(jī)前都應(yīng)先開載氣，再開儀器、工作站，再設(shè)定方法；關(guān)機(jī)前都應(yīng)將柱箱溫度降到50℃以下，然后再關(guān)電源和載氣。n 接頭不要擰得太緊，以免將色譜柱壓裂或壓碎。毛細(xì)管色譜柱毛細(xì)管的特點(diǎn)：柱效能高、柱滲透率大、柱容量小，分辨能力、靈敏度、分析速度以及色譜柱的相對惰性都優(yōu)于填充柱。色譜柱是色譜分離的心臟。 熱聚焦：初始柱溫低于待測分析樣品的沸點(diǎn)150 ℃。進(jìn)樣口和操作參數(shù)的選擇應(yīng)注意的問題：n 樣品的穩(wěn)定性：在保證樣品有效汽化的前提下，進(jìn)樣口溫度應(yīng)盡可能的低一些。n 程序升溫進(jìn)樣口：將分流/不分流進(jìn)樣和冷柱上進(jìn)樣結(jié)合起來，功能多，適用范圍廣，是較為理想的GC進(jìn)樣口。分流進(jìn)樣最為普遍，操作簡單，但有分流歧視和樣品可能分解的問題，不分流進(jìn)樣雖然操作復(fù)雜一些，但分析靈敏度高，常用于痕量分析。 幾項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)：n 操作溫度范圍：350~420℃n 載氣壓力和流量設(shè)定范圍：0~100psi，0~200ml/min。 3800GC 美國瓦里安 電子氣流控制(EFC)也可選擇手動(dòng)控制 可同時(shí)配置三個(gè)進(jìn)樣口可同時(shí)配置三個(gè)檢測器 可全部由工作站控制，也可用積分儀控制；主機(jī)有控制鍵盤。 2. 改變柱溫（程序升溫） 3. 改變固定相，即更換色譜柱 4. 利用化學(xué)作用，如通過衍生化反應(yīng)改變待 測物的結(jié)構(gòu)。所以較高的載氣流速和黏度大的流動(dòng)相（或在較低柱溫下）有利于抑制縱向擴(kuò)散。 H=A+B/μ+Cμ 式中A為渦流擴(kuò)散項(xiàng)，B/μ為分子擴(kuò)散項(xiàng)，Cμ為傳質(zhì)阻力項(xiàng)，μ為載氣線速度。 當(dāng)n50時(shí)，就可以得到對稱的峰形曲線。塔板理論假設(shè)：n 在柱內(nèi)一小段長度H內(nèi)，組分可以在兩相間迅速達(dá)到平衡，這一小段柱長稱為理論塔板高度H。 k=ms/mm，是衡量色譜柱對被分離組分保留能力的重要參數(shù)，k值越大，保留時(shí)間越長。R值越大，分離越好。15. 選擇因子、分離度 選擇因子α：也稱相對保留值，是固定液對兩個(gè)相鄰組分的調(diào)整保留值之比。峰高：色譜峰最高點(diǎn)到峰底的距離。死時(shí)間t0：不被固定相溶解或吸附的組分的保留時(shí)間（即組分在流動(dòng)相中所消耗的時(shí)間），或流動(dòng)相充滿柱內(nèi)空隙體積占據(jù)的空間所需要的時(shí)間，又稱流動(dòng)相保留時(shí)間。（穩(wěn)定—平直直線）噪音：儀器本身所固有的，以噪音 帶表示。? 自動(dòng)化操作且能與其他色譜儀器聯(lián)用。常用改進(jìn)劑為NHNO2，加入量不超過10%。 流程： SFC影響因素 壓力：影響溶解能力。SFE就是利用壓力、溫度的變化來實(shí)現(xiàn)提取和分離過程的。 優(yōu)點(diǎn)： 溶劑用量少、快速、提取效率高 缺點(diǎn)： 選擇性不高，萃取液多采用固相萃取、凝膠滲透色譜等加以凈化后再進(jìn)儀器檢測。 特點(diǎn)：所需溶劑少(約15ml/10g)，快速(20min)，提取效率高。 優(yōu)點(diǎn)： v 自動(dòng)化程度高 v 凈化效率高 v 回收率高 v 柱子可以重復(fù)使用 缺點(diǎn)： 小分子的干擾物會(huì)與目標(biāo)化合物一起流出，有時(shí)須再增加凈化步驟。其原理是根據(jù)多孔凝膠對不同大小分子的排阻效應(yīng)進(jìn)行分離，樣品中的大分子先被洗脫出來，小分子后被洗脫出來。 v 反相吸附劑，如C8，C18，主要用來分離親脂性物質(zhì) v 正相吸附劑，用于分離極性較大的農(nóng)藥 優(yōu)點(diǎn)： v 樣品分析時(shí)間短 v 溶劑用量少 v 避免了樣品均化、轉(zhuǎn)溶、乳化等帶來的損失 缺點(diǎn)： v 取樣量小造成檢測限較高 v 雜質(zhì)凈化方面不如其他提取技術(shù)理想 4 QuEChERS 法v QuEChERS法是利用固相分散材料與樣品或樣品提取液充分接觸，吸附其中的雜質(zhì)而得到凈化的目的，或者是利用固相吸附劑吸附目標(biāo)分析物，再進(jìn)行解析而凈化。v 溫度：有利于縮短平衡時(shí)間，但會(huì)減少吸附量。固相微萃取流程v 吸附：萃取過程中應(yīng)用磁力攪拌、超聲振蕩等方式，可縮短達(dá)到平衡的時(shí)間。它是利用固相提取的方法實(shí)現(xiàn)對樣品的分離和凈化，但所用的固相材料和分離機(jī)制不同。 影響萃取效率的因素 吸附劑選擇：盡量選擇與目標(biāo)化合物極性相似的吸附劑。v 活化吸附劑：萃取樣品前用適當(dāng)?shù)娜軇┝芟垂滔嘀?。如C1C8等。v 只能分離性質(zhì)差別較大的物質(zhì)。v 特點(diǎn)是可有效減少濃縮過程中農(nóng)藥的損失，且能直接定容測定，無需轉(zhuǎn)移樣品。3 樣品濃縮技術(shù)樣品濃縮的目的是使檢測溶液中待測物達(dá)到分析儀器靈敏度以上的濃度?；钚蕴刻亢趯χ参锷赜泻軓?qiáng)的吸附能力，對脂肪、蠟質(zhì)吸附不強(qiáng)常與弗羅里硅土或氧化鋁按一定比例配合使用。使用前再于130 ℃活化12h。主要干擾雜質(zhì)及性質(zhì)類別化合物及其性質(zhì)脂類色素蠟質(zhì)肽、氨基酸碳水化合物木質(zhì)素脂肪、油脂（動(dòng)物樣品），不溶于水，溶于多少有機(jī)溶劑葉綠素、葉黃素、胡蘿卜素等（植物樣品），不溶于水，能溶于乙醇、丙酮和石油醚蠟質(zhì)（許多蔬菜），易溶于有機(jī)溶劑含氮，對NPD、FPD檢測器有干擾糖、淀粉等，對低揮發(fā)性和高水溶性農(nóng)藥有干擾酚類及其衍生物，影響氨基甲酸酯類和苯氧羧酸類農(nóng)藥酚類代謝物的分析常用凈化方法v 柱層析法v 濃硫酸處理法（水解脂類和色素，如凈化含有機(jī)氯類樣品）v 低溫冷凍（80℃）法（凈化動(dòng)物樣品，除去脂肪和某些色素）柱層析法 柱層析法是應(yīng)用最普遍的傳統(tǒng)凈化方法。v 影響提取效率的因素： 1. 提取溶劑的選擇 2. 水相的鹽濃度 3. 水相的PH值有機(jī)相、水相、乳化物和外力是乳化形成的主要因素。將一種溶劑加入被測溶液中，利用被測組分在兩相中的分配不同而進(jìn)入有機(jī)相，其他組分仍留在原液中而達(dá)到分離的目的。v 提取效率高，但耗時(shí)長8h以上）v 適用于勻漿法等難提取樣品中殘留農(nóng)藥的提取或是作為其他提取方法提取效率的參照標(biāo)準(zhǔn)。v 適用于蔬菜、水果等新鮮動(dòng)植物組織樣品中農(nóng)藥的提取。它是將樣品粉碎后置于具塞三角瓶中，加入一定量的提取溶劑，用振蕩器振蕩1~3次，~1h，過濾出溶劑后，再用溶劑洗滌濾渣一次或數(shù)次，合并提取液后進(jìn)行濃縮凈化。 1. 溶劑的極性（“相似相溶”原理） 2. 溶劑的純度（分析純以上） 3. 溶劑的沸點(diǎn)（45~80℃之間）。 農(nóng)藥的水溶性還受溫度、含鹽量、有機(jī)質(zhì)、PH值的影響。 農(nóng)藥的極性和溶解性是選擇提取和凈化條件的重要依據(jù)，在殘留農(nóng)藥的溶劑提取中常采用“相似相溶”原理：使用與農(nóng)藥極性相近的溶劑為提取劑，使殘留農(nóng)藥在溶劑中達(dá)到最大溶解度。 2）提高測試精度。規(guī)范——報(bào)告的編寫格式應(yīng)符合有關(guān)要求。v 土壤樣品以干重計(jì)算，植物樣品以鮮重計(jì)算。最低檢測濃度（LOQ）：指用添加方法能檢測出待測物在樣品中的最低含量(以mg/kg為單位)。樣品需用干凈的、牢固的容器包裝，并盡快保存在 冷凍或冷藏冰箱中。土壤樣品不能風(fēng)干，過1mm篩，最后取200500g樣品保存。 v 樣品處置避免樣品表面殘留農(nóng)藥的損失（采集、包裝、制備）避免樣品損壞及變質(zhì)（采集、運(yùn)輸）避免交叉污染（采集、制備）樣品上粘附的土壤等雜物可用軟刷子或干布處理干凈。要求有效采樣次數(shù)不少于6次，降解率一般應(yīng)達(dá)到90%以上。施藥時(shí)間：作物生長期，一般為作物生長至成熟個(gè)體一半大小時(shí)開始施藥。施藥方法：依據(jù)推薦施藥方法施藥。施藥劑量：設(shè)兩個(gè)施藥劑量（）。，且相對集中，保證足夠的緩沖區(qū)與處理區(qū)。，地勢平整的地塊。，確定試驗(yàn)地點(diǎn)的數(shù)量●三地：水稻、小麥、甘藍(lán)、黃瓜、番茄（辣椒）、柑桔、梨（蘋果）、大豆、茶、花生。分析樣品：按照分析方法要求直接用于分析的樣品。采收間隔期：采收距最后一次施藥的間隔天數(shù)。2 準(zhǔn)則主要內(nèi)容v 術(shù)語和定義v 田間試驗(yàn)部分田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)施；樣品采集和運(yùn)輸、貯藏；田間試驗(yàn)的記錄。v 檢測食品和飼料中農(nóng)藥殘留的種類和水平，以確定其質(zhì)量和安全性。v 1999年，農(nóng)業(yè)部發(fā)布實(shí)施《農(nóng)藥管理?xiàng)l例實(shí)施辦法》 v 2001年，修改了《農(nóng)藥管理?xiàng)l例》。v 聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）1975年設(shè)立了5個(gè)專家組：農(nóng)藥規(guī)格、農(nóng)藥登記資料要求、農(nóng)藥使用標(biāo)準(zhǔn)、食品中農(nóng)藥殘留及環(huán)境中農(nóng)藥殘留。v 提高農(nóng)藥殘留檢測能力和速度。v 運(yùn)輸及儲(chǔ)存過程中由于和農(nóng)藥混放造成的食品污染。農(nóng)藥在生物體間的轉(zhuǎn)移（生物富集、食物鏈）3 農(nóng)藥污染食品的主要途徑v 使用農(nóng)藥防治農(nóng)作物病蟲害，直接污染食用作物。如除草劑、拌種劑v 農(nóng)藥間接進(jìn)入土壤。2 農(nóng)藥進(jìn)入生態(tài)系統(tǒng)的途徑農(nóng)藥進(jìn)入大氣環(huán)境的途徑v 農(nóng)藥噴灑于農(nóng)田時(shí)，逸散到大氣中（50%）。v 生物降解：微生物v 生物富集：生物體從環(huán)境中不斷吸收低濃度的農(nóng)藥，并逐漸在其體內(nèi)積累的能力。v 吸附：主要指農(nóng)藥在環(huán)境中由氣相或液相向固相分配的過程。第一章 緒論一、農(nóng)藥殘留與毒性1 農(nóng)藥：用于預(yù)防、消滅或者控制為害農(nóng)業(yè)、林業(yè)的病、蟲、草和其他有害生物以及有目的地調(diào)節(jié)、控制、影響植物和有害生物代謝、生長、發(fā)育、繁殖過程的化學(xué)合成或者來源于生物、其他天然產(chǎn)物及應(yīng)用生物技術(shù)生產(chǎn)的一種物質(zhì)或者幾種物質(zhì)的混合物及其制劑。v 農(nóng)藥對環(huán)境有益生物的毒性 水生生物：魚類、藻類 陸地環(huán)境生物：鳥類、害蟲天敵、蜜蜂、家蠶、非目標(biāo)植物（藥害）v 農(nóng)藥對人體健康的危害 急性毒性：甲胺磷、水胺硫磷等高毒農(nóng)藥 慢性毒性：致突變性、干擾內(nèi)分泌活動(dòng) 慢性神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)(遲發(fā)性神經(jīng)毒性)：有機(jī)磷農(nóng)藥特有的干擾免疫系統(tǒng)對兒童腦發(fā)育的遠(yuǎn)期影響二、農(nóng)藥的環(huán)境行為1 農(nóng)藥的環(huán)境行為：農(nóng)藥進(jìn)入環(huán)境后，在環(huán)境中有著復(fù)雜的遷移轉(zhuǎn)化過程，包括揮發(fā)、沉積、吸附、分解等表現(xiàn)。最重要的是光解和水解。同時(shí)，也在此過程中進(jìn)入生態(tài)系統(tǒng)中的不同有機(jī)生命體，進(jìn)一步對生態(tài)系統(tǒng)平衡產(chǎn)生影響。農(nóng)藥進(jìn)入土壤環(huán)境的途徑v 農(nóng)藥直接施入土壤。v 土壤中農(nóng)藥隨地面徑流或經(jīng)滲濾液通過土層至地下水v 農(nóng)藥廠和其他農(nóng)藥化學(xué)品生產(chǎn)廠的污水排放。v 經(jīng)食物鏈和生物富集作用污染食品。v 加大在新型、低毒、高效農(nóng)藥研制和推廣方面的投入。 ADI=NOAEL/安全系數(shù)（100） MRL=ADI60/（某種食品所占比例）3 農(nóng)藥殘留法規(guī)與管理v 最早制定農(nóng)藥管理法的是法國（1905年），之后是美國（1910年）、加拿大（1927年）等。v 1997年，國務(wù)院發(fā)布了《中華人民共和國農(nóng)藥管理?xiàng)l例》?！r(nóng)藥環(huán)境行為和環(huán)境毒性試驗(yàn)結(jié)果農(nóng)藥殘留檢測的目的：v 研究農(nóng)藥施用后再農(nóng)作物或環(huán)境介質(zhì)中的代謝、降解和轉(zhuǎn)歸，制定農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)、農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn)。第二章 農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則1 農(nóng)藥殘留試驗(yàn)的目的：了解農(nóng)藥在大田農(nóng)作物施用后的殘留消解動(dòng)態(tài)以及不同施藥水平與農(nóng)藥最終殘留量的關(guān)系；并以此為重要依據(jù)，制定農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)、農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn)及滿足農(nóng)藥登記的要求。推薦劑量：一種農(nóng)藥產(chǎn)品經(jīng)田間藥效試驗(yàn)后，提出的防治某種作物病、蟲、草害的施藥量）或濃度）。實(shí)驗(yàn)室樣品：田間樣品按照樣品縮分原則縮小后的樣品，用于冷凍貯藏、分析取樣和復(fù)檢。依據(jù)：《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》項(xiàng)目：最終殘留量試驗(yàn)、殘留消解動(dòng)態(tài)要素：不同施藥劑量、不同施藥次數(shù)，不同間隔期操作：田間標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)SOP殘留試驗(yàn)背景資料調(diào)查（農(nóng)藥殘留試驗(yàn)背景資料調(diào)查表（SOP FT0501）） 供試農(nóng)藥：有效成份/制劑種類/商品名/通用名供試作物：品種/生育周期農(nóng)藥應(yīng)用情況：防治對象/適用期/推薦使用劑量/施用次數(shù)/施藥間隔/安全間隔期 理化性質(zhì)：化學(xué)名稱/分子式/理化性/溶解度/穩(wěn)定性農(nóng)藥相關(guān)數(shù)據(jù)：LD50/ADI/MRL 農(nóng)藥代謝：有毒代謝產(chǎn)物殘留分析方法：方法原理/相關(guān)介質(zhì)中的方法 試驗(yàn)地的選擇（試驗(yàn)地點(diǎn)）。（試驗(yàn)地點(diǎn)）內(nèi)，選擇有代表性的試驗(yàn)地。 如：單獨(dú)灌溉、不可串灌、渠水流向等。最終殘留量測定試驗(yàn)檢測對象：一般為作物的可食部位和種植地土壤。設(shè)兩個(gè)以上采收間隔期，第二年做相應(yīng)調(diào)整。施藥劑量：。通常采樣間隔可設(shè)計(jì)為0,1,3,7,10,14,21,30,45d等?？瞻讓φ招^(qū)保護(hù)行：設(shè)置保護(hù)行或田?。ň彌_、漂移、串流）田間施藥v 供試農(nóng)藥的接收、貯存、使用和處置v 施藥前做好前期準(zhǔn)備工作v 避免對人員、試驗(yàn)樣品的污染v 施藥器械的清