酶學(xué)與酶工程第五章酶分子修飾學(xué)生-全文預(yù)覽
【正文】 ? 正常情況下， N糖基化酶（ung），它可以去除攙入到 DNA中的尿嘧啶。College of Life Sciences1．編碼基因的專一性位點(diǎn)突變 專一性位點(diǎn)突變又稱特異性位點(diǎn)突變。如果要將外源 DNA導(dǎo)人宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增成表達(dá)，就需要外源 DNA與某種能在宿主細(xì)胞中進(jìn)行自主復(fù)制和表達(dá)的 DNA重組，并由其攜帶進(jìn)入宿主細(xì)胞。College of Life Sciences? 例如：? 首先用鹽酸胍使胰蛋白酶的原有空間構(gòu)象被破壞，通過透析除去變性劑后，在不同的溫度條件下，使酶重新構(gòu)建新的空間構(gòu)象。? 通過酶分子的物理修飾，可以了解在不同物理?xiàng)l件下特別是在高溫、高壓、高鹽、低溫、真空、失重、極端 pH、有毒等極端環(huán)境下，由于酶分子空間構(gòu)象的改變而引起酶的特性和功能的變化情況。2 仍維持活性中心的完整構(gòu)象，保持酶活力。 College of Life Sciences? 聚乙二醇是線性分子具有良好的生物相容性和水溶性，在體內(nèi)無毒性、無殘留、無免疫原性，并可消除酶的抗原性，使其末端活化后可以與酶產(chǎn)生交聯(lián)，因而，它被廣泛用于酶的修飾。 (均相反應(yīng) ,無毒害 )? 修飾劑的活化 ：作為修飾劑中含有的基團(tuán)往往不能直接與酶分子的基團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)而結(jié)合在一起。? 例如：用聚乙二醇修飾超氧物歧化酶 ，不僅可以 降低或消除酶的抗原性 ，而且提高了 抗蛋白酶的能力 ，延長了酶在體內(nèi)的 半衰期 從而提高了酶藥效。? 一些添加物，如多元醇、多糖、多聚氨基酸、多胺等能通過調(diào)節(jié)酶的微環(huán)境來保護(hù)酶的活力。College of Life Sciences? 二、金屬離子置換修飾? 把酶分子中的金屬離子換成另一種金屬離子，使酶的特性和功能發(fā)生改變的修飾方法成為金屬離子置換修飾。College of Life Sciences? 選擇修飾劑時要考慮幾點(diǎn)：? ① 修飾劑的相對分子質(zhì)量、修飾劑鏈的長度對蛋白質(zhì)的吸附性；? ② 修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)的數(shù)目及位置；? ③ 修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)的活化方法與條件。College of Life Sciences? 通過各種方法使酶分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變酶的某些特性和功能的技術(shù)過程稱為酶分子修飾。College of Life Sciences? ① 能選擇性地與一個氨基酸殘基反應(yīng)；? ② 反應(yīng)在保證酶蛋白不變性的條件下進(jìn)行；? ③ 被標(biāo)記的殘基在酶中穩(wěn)定，容易通過降解分離出來并鑒定；? ④ 反應(yīng)程度能用簡單的技術(shù)測定。? 5．分離? 需要通過不同的方法進(jìn)行分離，將具有不同修飾度的酶分子分開，從中獲得具有較好修飾效果的修飾酶。College of Life Sciences? 使用一些能與酶非共價地相互作用而又能有效地保護(hù)酶的一些添加物，如聚乙二醇、右旋糖苷等，它們既能通過 氫鍵 固定在酶分子表面，也能通過 氫鍵 有效地與外部水相連，從而保護(hù)酶的活力。非共價修飾College of Life Sciences? 用可溶性大分子，如聚乙二醇、右旋糖苷、肝素等，通過 共價鍵 連接于酶分子的表面，形成一層覆蓋層。要根據(jù)酶分子的結(jié)構(gòu)和修飾劑的特性選擇適宜的水
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