酶學(xué)與酶工程第六章酶的固定化-全文預(yù)覽
【正文】 化酶 (細(xì)胞 )的活力下降為最初活力一半所經(jīng)歷的連續(xù)工作時(shí)間，以 t1/2表示。 ? 五、固定化細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)酶的特點(diǎn) ? 1．提高產(chǎn)酶率 ? 2．可以反復(fù)使用或連續(xù)使用較長(zhǎng)時(shí)間 ? 3．基因工程菌的質(zhì)粒穩(wěn)定不易丟失 ? 4．發(fā)酵穩(wěn)定性好 ? 5．縮短發(fā)酵周期，提高設(shè)備利用率 ? 6．產(chǎn)品容易分離純化 ? 7．適用于胞外酶等胞外產(chǎn)物的生產(chǎn) 。 ? 被限制或定位于特定空間位置的細(xì)胞稱為固定化細(xì)胞。 ? 固定化酶 (細(xì)胞 )的單位可定義為：每毫克干重固定化酶 (細(xì)胞 )每分鐘轉(zhuǎn)化底物 (或生產(chǎn)產(chǎn)物 )的量， ? 測(cè)定方法分為間歇測(cè)定和連續(xù)測(cè)定兩種 ? 1)間歇測(cè)定 在攪拌或振蕩反應(yīng)器中，與溶液酶同樣測(cè)定條件下 (如均勻懸浮于保溫的介質(zhì)中 )進(jìn)行，然后間隔一定時(shí)間取樣，過(guò)濾后按常規(guī)酶活測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。 ? 酶蛋白的功能團(tuán)有 N末端的 — 氨基、賴氨酸的 ε 氨基、酪氨酸的酚基、半胱氨酸的巰基和組氨酸的咪唑基等 ? 雙功能和多功能試劑根據(jù)它們的功能基團(tuán)相同與不同可分為“同型”和“雜型”兩類其中員常用的交聯(lián)劑是戊二醛。 ? 疊氮反應(yīng)：適用于含羥基、羧甲基等的載體，如 CM— 纖維素、葡聚糖、聚氨基酸、乙烯－順丁烯二酸酐共聚物等。 ? 載體有：天然高分子衍生物，如纖維素、葡聚糖凝膠、瓊脂糖等；人工合成的高聚物，如聚丙烯酰膠、多聚氨基酸、乙烯與順丁烯二酸酐的共聚物、聚苯乙烯、尼龍等 ? 酶和載體的偶聯(lián)反應(yīng)有多種，取決于載體上的功能基團(tuán)與酶分子上的非必需側(cè)鏈基團(tuán)。 ? 1）離子鍵結(jié)合法 ? 在適宜的 pH和離子強(qiáng)度條件下，酶通過(guò)離子鍵結(jié)合于具有離子交換基的水不溶性載體的固定化方法，因而也稱離子交換吸附法。包埋法一般不需要與酶蛋白的氨基酸殘基進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)，因此可以應(yīng)用于許多酶、微生物的固定化。 ? ? 利用各種固體吸附劑將酶或含酶菌體吸附在其表面上，而使酶固定化的方法稱為物理吸附法，簡(jiǎn)稱吸附法。 ? 固定化酶的缺點(diǎn)： ? 由于多一步固定化操作
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