基因工程工具酶簡化版-全文預覽
【正文】 類，以 RNA作為聚合模板 根據(jù)模板和作用方式的不同分為三類： 二、大腸桿菌 DNA聚合酶 I（ 全酶） 性質(zhì) : ① 5’ → 3’ DNA聚合酶活性 ② 3’ → 5’ 外切核酸酶活性 ③ 5’ → 3’ 外切核酸酶活性 三、大腸桿菌 DNA聚合酶 I大片段 （ Klenow片段） 性質(zhì) 它具有 5’ → 3’ 聚合活性和 3’ → 5’ 外切酶活性 ,失去了 5‘ → 3‘ 的核酸外切酶活性 . 四、 T4噬菌體 DNA聚合酶 性質(zhì) 具有 5’ → 3’ 聚合酶活性及 3’ → 5’ 外切核酸酶活性 。 ? 若兩種限制性核酸內(nèi)切酶的反應系統(tǒng)相差很大 ， 會明顯影響雙酶切結(jié)果 ， 則可以在第一種酶切割后 ， 經(jīng)過凝膠電泳回收需要的 DNA片段 ， 再選用合適的反應系統(tǒng) ， 進行第二種限制性核酸內(nèi)切酶的切割 。 ③分離和抽提 DNA。 ② 第四個字母表示菌株的類型 （ 大小寫均有 ） ， 如 EcoR中的R代表大腸桿菌 R株 。 ?同序同裂酶 (識別及酶切位點相同 ): 同序異裂酶 (識別位點相同但酶切位點不同 ): ?同尾酶 (酶切位點不同但產(chǎn)生相同的粘性末端 ): 酶切位點的計算： 四核苷酸識別序列： 44 = 256 六核苷酸識別序列： 46 = 4096 2個假設(shè)： a 隨機排列； b GC含量 50% 如： 用 BglⅡ(A/GATC/T) 酶切 λ DNA49Kb） : 理論上的切點數(shù)： 49000/4096=12個 實際情況？ 三、限制性核酸內(nèi)切酶的命名 1973年 ① 每一種酶都由產(chǎn)生并純化生出該酶的細菌的種屬名中的三個英文字母合起來代表： ? 第一個字母采用細菌屬名的第一個字母大寫； ? 第二和第三個字母小寫 ， 采用細菌種名的前兩個字母； 如大腸桿菌 （ Escherichia coli） 用 Eco表示 ， 代表從大腸桿菌中分離出的限制性內(nèi)切酶 。 ② 裂解細胞 。 ? 如果兩種限制性核酸內(nèi)切酶的最適反應溫度不同 ， 則應先用最適反應溫度較低的酶進行切割 ， 升溫后再加入第二種酶進行切割 。 缺刻 (nick)： 某一位置上丟失了一個或幾個核苷酸。 用途 1） 補平或標記限制性內(nèi)切酶消化 DNA后產(chǎn)生的 3’ 凹端 。 2） 通過補平或
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