生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制-全文預(yù)覽
【正文】 幾種細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定方法比較 3Hthymidine BrdU MTT Alamar Blue 靶向物 DNA合成系統(tǒng) 線粒體電子傳遞系統(tǒng) 檢出細(xì)胞的狀態(tài) 增殖 增殖、生存 檢出法 放射活性 色素、熒光 色素 色素、熒光 抽出的必要性 + + + 其他試劑的必要性 + ++ + 成本（以 MTT為 1時(shí)） 60 80100（試劑盒） 1 2 缺點(diǎn) 使用同位素 不適合 檢出大量未增殖 檢出未增 浮游細(xì)胞 細(xì)胞，處理時(shí)費(fèi)力 殖活細(xì)胞 生物學(xué)活性測(cè)定分析方法 用能誘導(dǎo) 50%最大反應(yīng)的待測(cè)樣品最高稀釋度作為參考效價(jià)（或滴度），或以此稀釋度中所含樣品的量為 1單位，即以此稀釋度的倒數(shù)為待測(cè)樣品所含的單位數(shù)。 BrdU：首先用 BrdU做標(biāo)記，固定細(xì) 胞，用核苷酸酶處理后使過氧化物酶結(jié)合抗 BrdU抗 體發(fā)生反應(yīng)。 b、體外測(cè)定：可使用分離的器官或組織、原代細(xì)胞或傳代細(xì)胞系，目前最常用方法是連續(xù)生長(zhǎng)、因子依賴的、克隆化的細(xì)胞系的方法，其測(cè)定結(jié)果比較準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、經(jīng)濟(jì)、容易使用和便于統(tǒng)計(jì)分析。mL )加入重組人腦利鈉肽對(duì)照品，記錄血管的張力變化。L1 NaOH 溶液調(diào) pH 至 )的麥?zhǔn)显〔壑?，加?fù)荷 1g，穩(wěn)定 1h，期間每 20min換 1次臺(tái)氏液： 連接多導(dǎo)記錄儀，調(diào)節(jié)靈敏度，記錄血管的張力變化。 生物學(xué)活性測(cè)定方法分類 1）體外細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定法 a、促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)作用（ GCSF:NFS60） b、抑制細(xì)胞生長(zhǎng)作用 (TNF:L929) c、間接保護(hù)細(xì)胞作用 (IFN:VISH。 生物技術(shù)藥物的質(zhì)量控制 質(zhì)量控制包括兩個(gè)方面： 生產(chǎn)過程中質(zhì)量控制 GMP（硬件、軟件） 最終目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量控制（方法學(xué)研究） 質(zhì)量控制方法學(xué)研究具體內(nèi)容 一、生物學(xué)活性測(cè)定和比活性 二、蛋白質(zhì)純度檢查 三、蛋白質(zhì)含量測(cè)定 四、蛋白質(zhì)藥物理化性質(zhì)的鑒定 五、蛋白質(zhì)的二硫鍵分析 六、對(duì)糖蛋白的特殊要求 七、殘余雜質(zhì)檢查 八、安全性及其他檢測(cè)項(xiàng)目 九、生物技術(shù)藥物待測(cè)樣品保存 一、生物學(xué)活性測(cè)定和比活性 意義： 1）基因工程產(chǎn)品的化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)、多肽，其活性由產(chǎn)品的氨基酸序列或其空間結(jié)構(gòu)所形成 的活性中心所決定的，與其絕對(duì) 質(zhì)量 不一致。 二、參考世界衛(wèi)生組織（ WHO）和美國(guó) FDA頒布的指南、 ICH文件和 《 歐洲藥典 》 。 我國(guó)生物技術(shù)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究現(xiàn)狀 ? 現(xiàn)代醫(yī)藥生物技術(shù)的發(fā)展以及人類基因組計(jì)劃的完成和遺傳病基因的不斷發(fā)現(xiàn)，對(duì)醫(yī)藥領(lǐng)域產(chǎn)生了巨大影響。 ?生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)和管理按生物制品的要求進(jìn)行，不僅對(duì)最終產(chǎn)品的質(zhì)量實(shí)施有效控制，而且特別重視對(duì)生產(chǎn)工藝的全過程進(jìn)行質(zhì)量控制 ,其中包括對(duì)每個(gè)生產(chǎn)步驟的驗(yàn)證、質(zhì)量檢定（ QC）、質(zhì)量保證部（ QA）對(duì)生產(chǎn)和質(zhì)量檢定的全過程進(jìn)行嚴(yán)格的管理。生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 李平生 概 述 ? 利用人體內(nèi)的天然物質(zhì)治療人類的疾病或達(dá)到某種醫(yī)學(xué)效果一直是醫(yī)學(xué)上的一個(gè)重要研究領(lǐng)域。 ? 據(jù)報(bào)道，國(guó)外 6500萬人接受重組乙肝疫苗、 100萬人接受 tPA治療，超過 50萬人使用 EPO，每天約有 1000萬人接受重組人胰島素的治療。 重組 DNA藥物包括： ?寡核苷酸藥物：反義核酸等； ?基因藥物：腺病毒 IL腺相關(guān)病毒 凝血 Ⅸ 因子；腺病毒 P53 ?細(xì)胞治療制劑：抗原致敏的人樹突狀細(xì)胞 ?DNA疫苗：治療乙型肝炎、愛滋病的核酸疫苗等 。 生物技術(shù)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的依據(jù) 一、主要依照 《 重組 DNA產(chǎn)品質(zhì)量控制要點(diǎn) 》 、《 中國(guó)生物制品規(guī)程 》 、 《 中國(guó)藥典 》 等要求進(jìn)行。 我國(guó)基因工程產(chǎn)品安全管理 法規(guī)和技術(shù)指南 《 傳代細(xì)胞系生產(chǎn)生物制品的規(guī)程 》 《 人用鼠源性單克隆抗體質(zhì)量控制要點(diǎn) 》 《 預(yù)防用新生物制品臨床研究的技術(shù)要求 》 《 人用重組 DNA制品質(zhì)量控制要點(diǎn) 》 《 人的體細(xì)胞治療申報(bào)臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則 》 《 人基因治療申報(bào)臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則 》 《 藥理毒理檢查指導(dǎo)原則 》 《 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理辦法 》 《 藥品注冊(cè)管理辦法 》 生物技術(shù)藥物的質(zhì)量控制 生物技術(shù)藥物的特點(diǎn)： 來源：活的生物體（細(xì)菌或細(xì)胞）； 結(jié)構(gòu)：復(fù)雜（包括組成、空間結(jié)構(gòu)）； 生產(chǎn)：涉及生物材料和生物學(xué)過程（發(fā) 酵、細(xì)胞培養(yǎng)，分離純化等）， 有其固有的易變性。 效價(jià)測(cè)定一般原則 國(guó)際通用方法； 測(cè)定結(jié)果須用國(guó)際或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品校 正，以國(guó)際單位表示。7H2O 、 NaHCO3 g、 Glucose 1 000 mL的溶液， 置于玻璃或塑料瓶中，用 1 molmL1 ，曲線升高至最高并穩(wěn)定后，開始按累計(jì)濃度
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