生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制(文件)
【正文】 價 測定 組成測定 定量 限度 準(zhǔn)確性 + + + 精確性 + + + 耐用性 + + + + + 直線性和 測定范圍 + + + 選擇性或 特異性 + + + + + 測定限度 + + 測量限度 + 生物測定的特殊性 由于生物測定的持續(xù)性、復(fù)雜性、以及參考品和樣品貯存時間較長的特性，除了上述驗證參數(shù)外，對于生物測定有另外幾個參數(shù)也非常重要，包括： 試驗順序（ fronttoback test）的影響：它是測定在一個較復(fù)雜的試驗中，先測和后測對試驗參數(shù)的影響。 生物技術(shù)藥物生物學(xué)活性 測定方法的驗證 生物學(xué)活性測定驗證應(yīng)考慮的問題： 生物學(xué)活性是相對活性，須用標(biāo)準(zhǔn)品或 參比品作對照； 樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線必須是平 行的； 應(yīng)對方法的變異性進行統(tǒng)計學(xué)分析，確 定生物學(xué)活性可接受的范圍； 應(yīng)對引起系統(tǒng)偏差的某些因素進行綜合 分析。 % 裝量檢查每支裝量不得低于標(biāo)示量的 93% PH值 ～ 效價測定 80%～ 150% 效價測定 80%～ 150% 效價測定 80%～ 150% 細菌 ≤ 100個 /克 細菌 ≤ 100個 /克 無菌試驗 霉菌 ≤ 10個 /克 霉菌 ≤ 10個 /克 裝量檢查每支裝量不低于標(biāo)示量的 93% 銅綠假單胞菌不得檢出 銅綠假單胞菌不得檢出 鑒別試驗 金黃色葡萄球菌不得檢出 金黃色葡萄球菌不得檢出 栓劑融變時限＜ 60分鐘 鑒別試驗 鑒別試驗 幾種生物技術(shù)藥物檢驗項目表 重組人生長激素原液 重組人生長激素粉針劑 外觀性狀 外觀性狀 含量及高分子蛋白 ≤ % PH值 ～ 總相關(guān)蛋白含量 ≤ % 總相關(guān)蛋白含量 ≤ % 無菌試驗 無菌試驗 泳遷移率 電泳遷移率 肽 圖 水分 ≤ % 細菌內(nèi)毒素含量 ≤ 5Eu/ mg 細菌內(nèi)毒素含量 ≤ 5Eu/ mg 含量及高分子蛋白含量 %～% ；高分子蛋白 ≤ % 。 10% 殘留外源性 DNA ≤10ng/ 劑量 HPLC純度 ≥ % 1殘留抗生素活性 紫外光譜掃描應(yīng)為 278nm177。 生物測定的特殊性 2)凍融穩(wěn)定性的影響：將樣品反復(fù)凍融，以確定對測定結(jié)果的影響。參數(shù)的改變可以是室溫或培養(yǎng)溫度，或濕度、或改變培養(yǎng)時間，或?qū)υ噭┑?pH進行較小范圍的調(diào)整等。該量并不一定要定量測出其準(zhǔn)確的含量或濃度， LOD是檢查限度實驗中最重要的一個參數(shù)。精密性分幾種：一種是實驗內(nèi)的精密性（即 重復(fù)性 ），它是在同一次試驗內(nèi)同一個樣品多次測定結(jié)果間的變異系數(shù)。準(zhǔn)確性一般表示為偏差或測定值與真值之間的錯誤率（回收率）（即測定值 /真實值 100%）。 測量范圍（ Range） 是指當(dāng)準(zhǔn)確性和精密性都能達到要求時所能測得的樣品中待檢物的最高和最低濃度范圍，它就是測定直線性的上下限，如果劑量和反應(yīng)間的關(guān)系不成直線，測量范圍可以通過校正曲線來測得。 驗證中需測定的參數(shù) ?專屬性 /特異性 （ selectivity/specificity） 是指當(dāng)檢測方法對測試樣品中含有制品中應(yīng)有的其他化合物時，測定 待測物 的能力。 ? 根據(jù)不同產(chǎn)品原液與成品、凍干與液體制劑的不同要求， 可選擇在－ 20℃ 、－ 80℃ 、4℃ 和常溫條件下保存。 宿主細胞 DNA ?測定方法：采用 DNA雜交實驗，用固相斑點雜交法，以地高辛標(biāo)記檢測試劑盒或者用同位素標(biāo)記 DNA探針進行測定，必須提供相應(yīng)宿主細胞 DNA標(biāo)準(zhǔn)品。 殘余雜質(zhì)檢測 殘余雜質(zhì)分類 a、外來污染物：微生物、熱原、細胞成分（蛋白質(zhì)、 DNA等）、培養(yǎng)基成分、純化步驟引入的成分（親和柱中的抗體、增溶用的 SDS）等； b、與產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì)：突變物、錯誤裂解物，二硫化物異構(gòu)體、二聚體和多聚體；化學(xué)修飾形態(tài)（脫酰氨基或氧化形式、其他降解產(chǎn)物） 殘余雜質(zhì)檢測內(nèi)容 ?宿主細胞蛋白含量 ?宿主細胞 DNA ?鼠源型 IgG含量（ 10ng/劑量） ?蛋白 A含量 ?小牛血清殘留量 ?殘余抗生素（氨芐西林） ?內(nèi)毒素含量（ LAL） ?產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì) ?其他雜質(zhì)（加入的離子、 SDS、甲醛等） 宿主細胞蛋白含量 ?以雙抗體夾心 ELISA為宜，盡量不用斑點免疫。 五、蛋白質(zhì)的二硫鍵分析 ?二硫鍵和巰基與蛋白質(zhì)的生物活性密切相關(guān)，發(fā)生錯誤配對，不但活性降低而且會引起抗原性增加。 ?重組產(chǎn)品一級結(jié)構(gòu)不含芳香族氨基酸，可不做紫外吸收光譜測定。 ? 蛋白質(zhì)一般經(jīng)化學(xué)裂解法及蛋白酶裂解后用HPLC、 SDSPAGE電泳法、質(zhì)譜法測定。 ? 凝膠過濾（分子篩）法：根據(jù)蛋白分子大小和性狀進行測定。 可根據(jù)物理化學(xué)性質(zhì)采用 Folin酚試劑法（ Lowry法 ） 、 染色法（ Bradford法 ） 、雙縮脲法、 紫外吸收法、 HPLC法和凱氏定氮等方法。 HPLC法：分子篩、反相層析，離子交換層析，盡量采用與 SDSPAGE原理不同的反相或離子交換層析，不主張用分子篩分析。 純度的檢查通常是在 原液 中進行。 不同生物活性測定方法的規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)表 測定方法 規(guī)定標(biāo)準(zhǔn) 動物基礎(chǔ)的生物活性測定 70%～ 130%標(biāo)示量 細胞基礎(chǔ)的生物活性測定 80%～ 120%標(biāo)示量 體外酶法的生物活性測定 85%～ 115%標(biāo)示量 受體結(jié)合的生物活性測定 85%～ 115%標(biāo)示量 生物學(xué)活性效價測定過程中 標(biāo)準(zhǔn)品的作用 生物學(xué)活性測定變異范圍大，同樣制品在不同實驗室測定結(jié)果差異很大，必須有一個統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。 比活性可反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定情況，可比較不同表達體系、不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)同一產(chǎn)品時的質(zhì)量情況。
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