【正文】 CCT T T CA T C AG C GG C TGGA CAA AA C AA A T CC TT T 1 0 1 T CTG C A C TT T T C GCTTT TGG AG A T T C AA T A C T AG A T A C TG GT AA C AA T AA 1 5 1 T CGT C TT CTT A CT C T ACT C A AG GG AA A TT T T TGGC CA T A T GG TT GG AA C T 2 0 1 A TGA C T A T AA G A T A C C GA C G GG C AG A T TT G GA AA TGGA AG AG TT TT C A CC 2 5 1 G A T A TGGT TG C T C AA GA GTT GG GG GTGA AA AG A GTT GT A C CC G C TT A T C G 3 0 1 CA GG TT G C GT C G C A TCAAG C CC GA C GA CC T T AA AA C TGG C GTTT GTT T C G 3 5 1 CA T C AG GTGG T T C AG GA A T T GA CCA T C TT A C A T CC AG AA C ACTGG GA GTT 4 0 1 T TGT CC A C AG G C GA C CAA A T AG GA GA TT T C AA AA AA T A T T TGAA GA AA C T 4 5 1 A AA GA A TGC G A C GA AA AA T A AG AA AG AA A T GA A AA AA A T A A T TT C AA AC G 5 0 1 CA GTGTTT CT T A TT T C TGAA GG AA A T AA C G A T A TT GG A T A C T T C GTGA C T 5 5 1 CCCG CT C GT C T AC GA TT A C G A T CC A T AG A T A C A T ACA C AA GTGA CA TGGT 6 0 1 T T TT TGGA C A AA AG C A T TCC T A C AA GA TT T A T A TG A T C T T GG AG C GA GA A 6 5 1 A A TT C G C GG T G A TGG GA GTG A TT CC GG T AG GA TGCTT G CC TT T CC A T C GC 7 0 1 T T CC T A TT TG GTGG AG T A T T C G C A TGGTGT AA CTT CA TGA TGAA T AG AA T 7 5 1 T T C GG AA GA C TT C AA CA C AA AA TT A C AG AA AG C TCT T A TT GG T T AC GA AG 8 0 1 T AG AA AA AA G T TT T AA AG GT G C AA AG TT TG T TT ACG T C GA C A TG T A C GG C 8 5 1 T CT A TT A TGG A T C TT A T C AA CC A T CCT AA G G CC T A TGGG T TT A C AG AA GC 9 0 1 G AA AA GA TC G TGTT GTTGT A TGGTGA C A T C GA T AA T A CC A TG CC GA AA CC 9 5 1 CG GA TGAG T A C GT A TT C T A T GA C TT C G C T C A CCCC A CC A T GA AA ACC T A T 1 0 0 1 G AA GT AA T A T CT AA A CCT CT TGT CT A T C AG A TGAG GA AA G G CC T TGCA TG 1 0 5 1 A TT T AG TT CC T TGTT TCT T A CCA T 圖 5 BFAPG 基因 的全長序列 陰影為與原片段同源區(qū)域，紅色以為為開放閱讀框 BFAPG 基因 表達(dá)片段 功能 分析 全長序列提交 (NCBI) （ ） 數(shù)據(jù)庫用 TBLASTX和BLASTN進(jìn)行序列相似性搜 索， 以 閾值 ，同源性 70%以上的見 表 3。 acyltransferase/ carboxylesterase/ lipase (EXL4) mRNA, plete cds 91% 1 Arabidopsis thaliana family II lipase EXL3 (EXL3) mRNA, plete cds 67% 1 NM_001084 Arabidopsis thaliana family II extracellular lipase 2 (EXL2) (AT1G75890) mRNA, plete cds 68% 1 Brassica rapa subsp. pekinensis cultivar Huangya14 antherspecific proline rich protein mRNA, plete cds 66% 1 Brassica oleracea antherspecific prolinerich protein (APG1) mRNA, plete cds 66% 1 Brassica juncea cultivar Tongnong4 antherspecific proline rich protein mRNA, plete cds 66% 1 Brassica napus antherspecific proline rich protein mRNA, plete cds 66% 1 NM_001157 Zea mays antherspecific prolinerich protein APG (LOC100284537), mRNA gb| 72% 1 BFAPG 基因 在白菜不同部位的時序 表達(dá)分析 分別取 不育與可育 植株的須根、根、莖、葉、花蕾 為材料進(jìn)行研究 , 采用 RTPCR方法調(diào)查了 BFAPG基因的表達(dá)差異變化。 M， DL20xx Marker。 圖 7 BFAPG 與 ACTIN 基因在不育及可育植株 不同等級花蕾中 的表達(dá)。 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 500bp 250bp 500bp 250bp 500bp 250bp 500bp 250bp BFAPG ACTIN BFAPG ACTIN M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 500bp 250bp 500bp 250bp BFAPG ACTIN 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位畢業(yè)論文 17 圖 7 BFAPG 與 ACTIN 基因在 花器官不同部位 中 的表達(dá)。質(zhì)量較好的 RNA 應(yīng) 有明顯的 285 和 185 兩 條帶， A260/A28。(3)操作 時保持低溫 。(7)在去RNase 水中用吸管尖吹打，并可將樣品置于 55 一 60℃下溫育 10min，使 RNA 顆粒溶解完全 。 A260為 1相 當(dāng)于 RNA的濃度為 40μg/ml。因此推斷出此基因可能與脂肪酶基因有關(guān)，沈齊（ 20xx 貴州大學(xué)）曾在油菜上轉(zhuǎn)化脂肪酸脫飽和酶基因，在 F2 代產(chǎn)生了約 25%不育株，且花蕾細(xì)長，柱頭顯著長于對照，雄蕊退化完全。這一現(xiàn)象在小麥、玉米、高梁、洋蔥 ,番茄 ,辣椒和水稻等植物中普遍存在 (Zhang 和 Croes,1983)。表明該基因為大白菜花蕾發(fā)育調(diào)控基因，它對育性控制發(fā)生在花 蕾發(fā)生初期就已起作用。葉片中生育前期不育系的游離脯氨酸含量和相應(yīng)保持系之間基本上沒有大的差異 ,僅在生育后期存在一定的差異 ,但這些差 異變化無規(guī)律性。 3． 2 小結(jié) (一 )以大白菜甲型兩用系 “ AB01“ 不育與可育花蕾為材料，通過抑制差減雜交找到一育性相關(guān)基因 ， RTPCR 驗證表明該基因僅在可育花蕾中表達(dá)。 （三） 須根、根、莖、葉、蕾中的 RTPCR 時序表達(dá)結(jié)果顯示，該基因除在可育花蕾中表達(dá)外，可育植株的其它部位及不育植株中均沒有表達(dá)。 參考文獻(xiàn) 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位畢業(yè)論文 19 [1]何啟偉 .十字花科蔬菜優(yōu)勢育種 [M].北京 :農(nóng)業(yè)出版社 ,1981. 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