8第八章原位雜交組織化學(xué)(文件)
【正文】 脫蠟經(jīng)梯度酒精脫水。 ① PBS洗 2 3min。消化時(shí)間應(yīng)根據(jù)組織的種類，厚度反復(fù)試驗(yàn)調(diào)整。 ⑦ 浸入新鮮配制的 %乙酸酐以封閉非特異性結(jié)合部位。 3）顯示 ① 用緩沖液 Ⅰ 沖洗雜交后的載波片 2 3min。 ⑤ 浸入 BCIP/NBT中，室溫孵育 10～ 30min（或更長時(shí)間，視需要而定）。 ⑥ 將切片浸入緩沖也 Ⅲ 以終止反應(yīng)。 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 11:05:5911:05:5911:05Sunday, March 12, 2023 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 2023年 3月 12日星期日 11時(shí) 5分 59秒 11:05:5912 March 2023 1做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。 :05:5911:05Mar2312Mar23 1世間成事，不求其絕對圓滿，留一份不足，可得無限完美。 2023年 3月 上午 11時(shí) 5分 :05March 12, 2023 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 11:05:5911:05:5911:053/12/2023 11:05:59 AM 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 :05:5911:05:59March 12, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 上午 11時(shí) 5分 59秒 上午 11時(shí) 5分 11:05: MOMODA POWERPOINT Lorem ipsum dolor sit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blanditut cursus. 感謝您的下載觀看 專家告訴 。 2023年 3月 上午 11時(shí) 5分 :05March 12, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 11:05:5911:05:5911:05Sunday, March 12, 2023 1知人者智，自知者明。 上午 11時(shí) 5分 59秒 上午 11時(shí) 5分 11:05: 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 :05:5911:05:59March 12, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 , March 12, 2023 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 2023年 3月 12日星期日 上午 11時(shí) 5分 59秒 11:05: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 11:05:5911:05:5911:053/12/2023 11:05:59 AM 1以我獨(dú)沈久，愧君相見頻。 ⑧ 流水洗 510min，直至水無色為止。定期卻出切片在顯微鏡下檢測反應(yīng)強(qiáng)度，根據(jù)反應(yīng)強(qiáng)度決定延長或終止反應(yīng)。 ③ 加數(shù)滴抗地高辛抗血清，室溫孵育 2h。 2）雜交 以含 cRNA探針（ ）的雜交液，按每張切片 1020ul的量覆蓋切片。 ⑤ 在 4%多聚甲醛 /PBS 3min。其他切片暫放于 PBS內(nèi)。經(jīng)水洗后經(jīng) 37℃ 烤箱 4h或者過夜，然后進(jìn)行雜交前的處理。 地高辛探針的應(yīng)用 基本操作步驟： 1）組織處理 冷凍切片： 切片貼在預(yù)先清潔、高溫處理并涂以粘附劑的載玻片上，先在 37℃ 預(yù)干燥 4h，然后置于 37℃ 烤箱中過夜。為節(jié)省核酸探針的用量，凡使用過的含有 探針的雜交液也可反復(fù)多次使用。 常用的免疫酶學(xué)檢測方法： DigHRP檢測系統(tǒng)： 以 DAB/H2O2為底物，結(jié)果為棕色； 以 4氯 1萘酚 / H2O2為底物，結(jié)果為藍(lán)色。 ⑩ 水洗，復(fù)染，脫水，透明和以甘油 /PBS或 DPX封固。 ⑥ PBS洗 2 3min。 ② 將載玻片浸入 %H2O2，以封閉內(nèi)源性過氧化物酶。 21 20mmol/L EDTA， 。 17 5min。 13 1 SSC， SSC， 37℃ 各漂洗 1030min。 ９ 取 10ul含相應(yīng) 探針 的雜交液滴于標(biāo)本上，如果是 cDNA探 針，則用前將探針于 95℃ 水浴中保溫 10min，馬上冰浴冷 卻，然后再用。 ５ 4%多聚甲醛 PBS固定。 ? 光敏生物素核酸探針原位雜交組化程序如下： １ 石蠟切片脫蠟入水后， PBS洗；冰凍切片直接入 PBS洗。 （ 2）按核酸性質(zhì)分類 ① DNA探針 ② cDNA探針 ③ RNA探針 ④ 寡核苷酸探針 （ 3）按染色體上位置分類： ① 重復(fù)序列探針 ② 涂染探針 ③
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