freepeople性欧美熟妇, 色戒完整版无删减158分钟hd, 无码精品国产vα在线观看DVD, 丰满少妇伦精品无码专区在线观看,艾栗栗与纹身男宾馆3p50分钟,国产AV片在线观看,黑人与美女高潮,18岁女RAPPERDISSSUBS,国产手机在机看影片

正文內(nèi)容

8第八章原位雜交組織化學(xué)(已修改)

2025-03-01 11:19 本頁(yè)面
 

【正文】 第八章 原位雜交組織化學(xué) 原位雜交組織化學(xué)( ISHH) 原理: 用標(biāo)記的 DNA或 RNA為探針,在原位檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)特定核酸 序列的方法。 特點(diǎn): 雜交在載玻片上的細(xì)胞進(jìn)行。 分類: 根據(jù)所用探針和靶核苷酸不同 DNADNA雜交、 DNARNA雜交、 RNARNA雜交 根據(jù)探針標(biāo)記物是否直接被檢測(cè) — 直接法、間接法 一 原位雜交的由來(lái)與發(fā)展 (一)核酸分子雜交技術(shù) ? 按其作用方式大致分為液相雜交和固相雜交兩種 ? 液相雜交: 參加反應(yīng)的兩條核酸鏈都游離在溶液中。 液相分子雜交技術(shù)包括: ① 吸附雜交 ② 發(fā)光液相雜交 ③ 液相夾心雜交 ④ 復(fù)性速率液相分子雜交 ? 固相雜交: 是將參加反應(yīng)的一條核酸鏈固定在固體的支持物上常用的有硝酸纖維素濾膜 , 其它如尼龍膜 、 乳膠顆粒和微孔板等 ) , 另一條參加反應(yīng)的核酸鏈游離在溶液中 。 固相雜交技術(shù)包括: ① 菌落原位雜交 ② 斑點(diǎn)雜交法 ③ Southern印跡雜交 ④ Northern印跡雜交 ⑤ 組織原位雜交 (二)原位雜交技術(shù)的發(fā)展 在近 20年飛躍發(fā)展的突出特點(diǎn): ① 由分子遺傳學(xué)研究提供的探針大量增加; ② 探針生產(chǎn)的可靠性和速率大大發(fā)展了; ③ 非放射性標(biāo)記物的發(fā)展使原位雜交技術(shù)成為實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)技術(shù)和臨床日常應(yīng)用的診斷技術(shù)。 ④ 新的非放射性標(biāo)記技術(shù)正在繼續(xù)不斷涌現(xiàn)。 二 原位雜交組織化學(xué)基本技術(shù) ? 原位雜交的基本方法和應(yīng)用原則: ① 雜交前準(zhǔn)備,包括固定、取材、玻片和組織的處理,如何增強(qiáng)核酸探針的穿透性、減低背景染色等; ② 雜交; ③ 雜交后處理; ④ 顯示( visualization): 放射性自顯影顯色、非放射性標(biāo)記顯色 (一)原位雜交的基本要求 1 固定 2 玻片和組織切片的處理 3 雜交 4 雜交后處理 5 顯示 6 對(duì)照實(shí)驗(yàn)和 ISHH結(jié)果的判斷 1 固定 固定劑的應(yīng)用和選擇原則: ① 保持細(xì)胞結(jié)構(gòu); ② 最大限度地保持細(xì)胞內(nèi) DNA或 RNA水平; ③ 使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或組織 。 ? DNA: 比較穩(wěn)定,對(duì)于 DNA的定位來(lái)說(shuō),固定劑的種類和濃度并不十分重要。 ? RNA: 易被降解,在 RNA的定位上,要使 RNA的降解減少到最低限度,固定劑的種類、濃度和固定的時(shí)間十分重要,而且取材后應(yīng)盡快予以冷凍或固定。 ? 固定劑: 多聚甲醛、醋酸 酒精混合液、 Bouin’ s固定劑、 Carnoy’ s液 優(yōu)缺點(diǎn): 沉淀性固定劑: 酒精 /醋酸混合液、 Bouin’ s液、 Carnoy’ s液 能增加核酸探針的穿透性,但不能最大限度地保存 RNA, 且對(duì)組織結(jié)構(gòu)有損傷。 戊二醛: 能較好地保存 RNA和組織形態(tài)結(jié)構(gòu),但由于和蛋白質(zhì) 產(chǎn)生廣泛的交叉連接,從而影響了核酸探針的穿透性。 多聚甲醛: 仍被公認(rèn)為 ISHH較為理想的固定劑。 多聚甲醛 —— mRNA的定位 將組織固定于 4%多聚甲醛磷酸緩沖液中 1~ 2h,在冷凍前浸入 15%蔗糖溶液中,置 4℃ 冰箱過(guò)夜,次日切片或保存在液氮中待恒冷箱切片機(jī)或振蕩切片機(jī)切片。 組織也可在取材后直接置入液氮冷凍,切片后才將其浸入 4%多聚甲醛約 10min,空氣干燥后保存在 70℃ 。如冰箱溫度恒定,在 70℃ 可保存數(shù)月之久不會(huì)影響雜交結(jié)果。 ? 病理學(xué)活檢取材 —— 福爾馬林固定和石蠟包埋,這種標(biāo)本對(duì)檢測(cè) DNA和 mRNA有時(shí)也可獲得雜交信號(hào)。 ? 石蠟包埋切片 —— 由于與蛋白質(zhì)交叉連接的增加,影響核酸探針的穿透,因而雜交信號(hào)常低于冰凍切片,同時(shí),在包埋的過(guò)程中可減低 mRNA的含量。 ? 冷凍切片 —— 應(yīng)用多聚甲醛蒸汽固定干燥后的冷凍切片也可獲得滿意效果。 2 玻片和組織切片的處理 ( 1)玻片的處理 熱肥皂刷洗 自來(lái)水清洗 清潔液中浸泡 24h 清水洗凈 烘干 95%酒精中浸泡 24h 蒸餾水沖洗 烘干 烘箱溫度 > 150℃ 過(guò)夜以去除 RNA酶 蓋玻片硅化處理 錫箔紙包裹無(wú)塵存放 ( 2)增強(qiáng)組織的通透性和核酸探針的穿透性
點(diǎn)擊復(fù)制文檔內(nèi)容
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
文庫(kù)吧 www.dybbs8.com
公安備案圖鄂ICP備17016276號(hào)-1