研發(fā)部崗前培訓(xùn)細(xì)胞培養(yǎng)(文件)
【正文】 胞生長需要 O2，閉合式單層細(xì)胞培養(yǎng)氧分壓1995 9975Pa 開放培養(yǎng)時（碟皿或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)），一般將細(xì)胞置于 95%空氣加 5%CO2混合氣體環(huán)境中 CO2的主要作用在于維持培養(yǎng)基的 pH 值，多數(shù)細(xì)胞的適宜 pH值為 – 原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對 pH的變動耐受差；永生細(xì)胞和惡性腫瘤細(xì)胞耐受力強 總的說來，培養(yǎng)細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些 （四）體外培養(yǎng)細(xì)胞生存所需基本物質(zhì) 六碳糖是主要的能源（葡萄糖、半乳糖） 1. 糖 2. 氨基酸 所有的細(xì)胞都需要谷氨酰胺，其所含的氨是核酸中嘌呤和嘧啶的來源；其它還有精氨酸、胱氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、組氨酸、酪氨酸等 培養(yǎng)細(xì)胞也需要維生素，如生物素、葉酸、泛酸、核黃素、硫胺素、胭酰胺等 3. 促生長因子 EGF, FGF, NGF, PDGF, EDGF等 激素：胰島素 ——促進細(xì)胞利用葡萄 糖和氨基酸 氫考 ——促進上皮細(xì)胞生長 4. 其它物質(zhì) 基本元素：鉀、鈉、鈣、鎂、氮和磷 微量元素：鐵、鋅、硒等 （五）滲透壓 人血漿滲透壓約 290mOsm/kg，可視為培養(yǎng)細(xì)胞的理想滲透壓 鼠細(xì)胞滲透壓約 320mOsm/kg 大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞的滲透壓在 260 mOsm/kg 320 mOsm/kg （六）培養(yǎng)基 按物質(zhì)狀態(tài)：半固體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基 按其來源： （ 1）合成培養(yǎng)基：根據(jù)已知細(xì)胞所需物質(zhì) 的種類和數(shù)量嚴(yán)格配制而 （ 2）天然培養(yǎng)基：成分尚未搞清楚，如血清、 血漿等 （ 3）無血清培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基＋促生長物質(zhì) （七）附著底物 除少數(shù)懸浮型細(xì)胞外，絕大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞需要合適的底物以附著其上 類型： （ 1）玻璃：透明、易觀察、易洗滌、能反復(fù)使用； 缺點：易破碎 （ 2）一次性塑料：常用聚苯乙烯，聚四氟乙烯； 缺點：易產(chǎn)生劃痕，不宜反復(fù)使用 （ 3）微載體：由聚苯乙烯和聚丙烯酰胺制成的小球 體，附著面大，利于大量繁殖細(xì)胞 （ 4）飼細(xì)胞（ Feeder Cells）：也稱滋養(yǎng)細(xì)胞，如 用成纖維細(xì)胞長成單層后，大劑量射 線照射，細(xì)胞失去增殖能力但尚存活 并有代謝活動；再將其它細(xì)胞接種于 其上。C 四、細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù) （一）細(xì)胞分離與原代培養(yǎng) 原代培養(yǎng) （ primary culture） 也稱初代培養(yǎng)，指從供體分離得到所需細(xì)胞后，接種于培養(yǎng)器皿，進行首次培養(yǎng) 培養(yǎng)材料為血液、胸水、腹水和羊水等細(xì)胞懸液時，可采用低速離心分離 培養(yǎng)材料為組織塊時，將組織塊剪切得盡可能細(xì)小，然后用膠原酶或胰蛋白酶進一步消化，以獲得細(xì)胞懸液 細(xì)胞分離與原代培養(yǎng) （二）細(xì)胞的傳代 （ secondary culture） 細(xì)胞由
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