研發(fā)部崗前培訓(xùn)細(xì)胞培養(yǎng)(參考版)
2025-01-22 13:33本頁面
【正文】 培養(yǎng)基內(nèi)青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升 100單位 慶大霉素：每毫升 100單位，方便、廣譜、穩(wěn)定 謝 謝！ 。目前已設(shè)計(jì)出許多種培養(yǎng)基，如TC19 MEM、 RPMI16 DMEM等 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì) 優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定。成分復(fù)雜， 影響對某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析 。 CO2培養(yǎng)箱 ? CO2培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為 37 ℃ ， 5％ CO2 ? 使用 CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)注意的問題： ① 用螺旋口瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，需將瓶蓋微 松，以保證通氣 ② 保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈。 主要用干玻璃器皿消毒 濾 器：過濾除菌 ， 大多數(shù)培養(yǎng)用液 ， 如人工合成培養(yǎng)基 、 血清 、 酶液等均采用濾過法除菌 超凈工作臺：為細(xì)胞操作提供無菌環(huán)境 紫外燈：紫外線消毒 。細(xì)胞株潛伏期一般為 6～ 24小時(shí) 對數(shù)生長期： 細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間變化成倍增長，活力最佳，最適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究 停止期（平臺期）： 細(xì)胞長滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂 機(jī)制：接觸抑制、密度依賴性 細(xì)胞的生長過程 （三）氣體環(huán)境與 pH值 多數(shù)細(xì)胞生長需要 O2，閉合式單層細(xì)胞培養(yǎng)氧分壓1995 9975Pa 開放培養(yǎng)時(shí)（碟皿或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)），一般將細(xì)胞置于 95%空氣加 5%CO2混合氣體環(huán)境中 CO2的主要作用在于維持培養(yǎng)基的 pH 值，多數(shù)細(xì)胞的適宜 pH值為 – 原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對 pH的變動(dòng)耐受差；永生細(xì)胞和惡性腫瘤細(xì)胞耐受力強(qiáng) 總的說來，培養(yǎng)細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些 （四）體外培養(yǎng)細(xì)胞生存所需基本物質(zhì) 六碳糖是主要的能源（葡萄糖、半乳糖） 1. 糖 2. 氨基酸 所有的細(xì)胞都需要谷氨酰胺，其所含的氨是核酸中嘌呤和嘧啶的來源；其它還有精氨酸、胱氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、組氨酸、酪氨酸等 培養(yǎng)細(xì)胞也需要維生素，如生物素、葉酸、泛酸、核黃素、硫胺素、胭酰胺等 3. 促生長因子 EGF, FGF, NGF, PDGF, EDGF等 激素：胰島素 ——促進(jìn)細(xì)胞利用葡萄 糖和氨基酸 氫考 ——促進(jìn)上皮細(xì)胞生長 4. 其它物質(zhì) 基本元素：鉀、鈉、鈣、鎂、氮和磷 微量元素：鐵、鋅、硒等 （五）滲透壓 人血漿滲透壓約 290mOsm/kg，可視為培養(yǎng)細(xì)胞的理想滲透壓 鼠細(xì)胞滲透壓約 320mOsm/kg 大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞的滲透壓在 260 mOsm/kg 320 mOsm/kg （六）培養(yǎng)基 按物質(zhì)狀態(tài)：半固體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基 按其來源： （ 1）合成培養(yǎng)基：根據(jù)已知細(xì)胞所需物質(zhì) 的種類和數(shù)量嚴(yán)格配制而 （ 2）天然培養(yǎng)基：成分尚未搞清楚，如血清、 血漿等 （ 3）無血清培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基＋促生長物質(zhì) （七）附著底物 除少數(shù)懸浮型細(xì)胞外，絕大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞需要合適的底物以附著其上
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