動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(文件)
【正文】 將長(zhǎng)成單層的原代培養(yǎng)組織塊從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出，在超凈工作臺(tái)中倒掉瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液，加入少許消化液――%胰蛋白酶溶液。在倒置鏡下觀(guān)察被消化的細(xì)胞，如果細(xì)胞變園，相互之間不再連接成片，這時(shí)應(yīng)立即在超凈工作臺(tái)中將消化液倒掉，加入2mL（三）組織培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)檢查營(yíng)養(yǎng)液(2)PH次，每次換半量或細(xì)菌污染大多數(shù)可以改變培養(yǎng)液用青霉素、鏈霉素可以預(yù)防細(xì)菌污染有效。合成，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等。液無(wú)菌離心管 100(2)DHanksHanksHanks次。塊左右的小塊，用清洗用眼科剪反復(fù)剪切成20~30min?；蛴梦苋コ锨逡海尤氤恋砹?0min，用吸管吹打組織塊，以分離細(xì)胞，然后，加入完全培養(yǎng)液約500~800r/min7min，吸除上清液。液漂吸15mL接種(1)培養(yǎng)液，再接種持瓶左右、上下輕輕搖晃，移入1EDTA（2）收集消化下來(lái)的細(xì)胞，歸入前離心管中，500~800r/min5min，去除上清液。恒溫箱培養(yǎng)。1~2min后，加入約DHanks細(xì)胞懸液，充分混勻，然后，將混合液放置在顯微鏡個(gè)大方格中的細(xì)胞。用雙蒸水和每個(gè)方格的積為細(xì)胞濃度細(xì)胞懸液量。(4)CO2著色細(xì)胞數(shù)）247。正常細(xì)胞不被染色。(2)結(jié)果分析：(1)500倍放大用計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)用吸管吸取少量混合液，注入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板小室。Hanks培養(yǎng)液，用吸管沖洗細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。在5~8min，需終止消化（加基礎(chǔ)培養(yǎng)液（二）傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟取原代培養(yǎng)物，吸除原瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，將細(xì)胞振入培養(yǎng)液內(nèi)，將懸浮在培養(yǎng)液中的細(xì)胞移入離心管中。恒溫箱培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，每隔細(xì)胞懸液。培養(yǎng)瓶中先加入5105(3)用制備單細(xì)胞懸液(1)倍的液沖洗，移入離心管中（蓋好蓋子，請(qǐng)注意無(wú)菌操作），低速離心（500~800r/min）7min。無(wú)菌培養(yǎng)皿中的小組織塊用mm3次，吸去多余的液體?；?qū)⑿氖壹≈糜跓o(wú)菌培養(yǎng)皿中，剪成DHanks液沖洗DHanks(3)Hanks取一只鵪鶉，斷頸處死，用二、實(shí)驗(yàn)器材與用品鵪鶉的心臟 平衡鹽（BSS）液（各組自己配的）100mL細(xì)胞培養(yǎng)瓶（每人一個(gè)） 完全培養(yǎng)液 滅菌培養(yǎng)皿1（3）支原體污染對(duì)細(xì)胞影響及污染物的檢測(cè)支原體污染后，因?yàn)樗鼈儾粫?huì)使細(xì)胞死亡可以與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細(xì)胞無(wú)明顯變化，外觀(guān)上給人以正常感覺(jué)，實(shí)則細(xì)胞受到多方面潛在影響，如引起細(xì)胞變形，6影響用相差顯微鏡觀(guān)察，可見(jiàn)滿(mǎn)視野都是點(diǎn)狀的細(xì)菌顆粒。量。一般情況下，每周換液(3)值的檢查(1)3mL新鮮培養(yǎng)液，吹打，制成細(xì)胞懸液。5～1037℃溫箱培養(yǎng)，24~48用吸管吸取小塊肝組織于培養(yǎng)瓶底部，均勻，間距離或20~30min）。HanksHanks組織塊原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)及生物學(xué)檢測(cè)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆战M織塊原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)的基
教學(xué)教案相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1