發(fā)酵工程原理與技術(shù)第二章(文件)
【正文】 長中的細(xì)菌或真菌 ， 在基本培養(yǎng)基上加抗生素 ， 將野生型細(xì)菌殺死 ， 營養(yǎng)缺陷型不死 ， 從而來濃縮營養(yǎng)缺陷型 細(xì)菌 通常 青霉素 （抑制細(xì)胞壁的合成） 真菌 制霉菌素 （破壞真菌細(xì)胞膜） 返 回 菌絲過濾法 原理： 在 基本培養(yǎng)基 上野生型發(fā)育成菌絲而營養(yǎng)缺陷 型不能，培養(yǎng)一段時(shí)間后，用擦鏡紙等合適濾 紙過濾，重復(fù)多次過濾除去大部分野生型個(gè)體。 活性復(fù)，結(jié)構(gòu)改變 目標(biāo)產(chǎn)物 結(jié)構(gòu)類似物 賴氨酸 S（ 2氨基乙基） L半胱氨酸 (AEC) 蘇氨酸 ?氨基 ?羥基戊酸（ AHV) 異亮氨酸 乙硫氨酸 精氨酸 D精氨酸 苯丙氨酸 對(duì)氟苯丙氨酸 組成酶和誘導(dǎo)酶 組成酶 微生物有些酶總是適量地存在 ,它們是不依賴 于酶底物或底物的結(jié)構(gòu)類似物的存在而合成的酶 ,如葡萄糖轉(zhuǎn)化為丙酮酸過程中的各種酶。 能迅速利用的碳源（如葡萄糖）會(huì)引起酶合成的減少 . 生產(chǎn)成本提高 組成型突變株 ?突變發(fā)生在調(diào)節(jié)基因或操縱基因 ,解除對(duì)誘導(dǎo)物的依賴 ,可獲組成型突變株。 誘導(dǎo)型不能利用乳糖，不長；組成型產(chǎn)酶，能利用乳糖，生長，被富集。 順烏頭酸酶 。 組成型突變株篩選 ③ 顯色反應(yīng)法 不含誘導(dǎo)物平板培養(yǎng) —— 加底物 —— 分解（有顏色變化） —— 檢出。 前 進(jìn) i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 有乳糖時(shí) 調(diào)節(jié)蛋白亞基 調(diào)節(jié)蛋白 阻遏蛋白 RNA聚合酶 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 誘導(dǎo)物乳糖 無活性的 阻遏蛋白 轉(zhuǎn)錄 翻譯 β 半乳糖苷酶 β 半乳糖苷通透酶 β 半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶 mRNA 沒有乳糖時(shí) ?篩選方法：設(shè)計(jì)條件使組成型優(yōu)勢生長，或通過菌落分辨。 大腸桿菌乳糖操縱子 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 有乳糖時(shí) 調(diào)節(jié)蛋白亞基 調(diào)節(jié)蛋白 阻遏蛋白 RNA聚合酶 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 誘導(dǎo)物乳糖 無活性的 阻遏蛋白 轉(zhuǎn)錄 翻譯 β 半乳糖苷酶 β 半乳糖苷通透酶 β 半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶 mRNA 沒有乳糖時(shí) 誘導(dǎo)酶弊端 誘導(dǎo)酶的生產(chǎn)需要誘導(dǎo)物，而且受到誘導(dǎo)物的種類、數(shù)量以及分解產(chǎn)物的影響。 培養(yǎng)后，如果某一營養(yǎng)物的周圍有微生物的生長圈，說明它就是微生物的營養(yǎng)缺陷型。 復(fù)篩： 對(duì)初篩結(jié)果的菌株生產(chǎn)性能作比較精確的 定量 測定 還需通過小型和中型發(fā)酵投產(chǎn)試驗(yàn)才能用于生產(chǎn) 例子 前進(jìn) 1 2 3 1 2 3 初篩 對(duì)照 (HC0 =HC1+ HC2 + HC3) ( HC1＞ HC0 能力增強(qiáng) ) ( HC2＜ HC0 能力減弱 ) ( HC3= HC0 能力不變 ) 誘變 1 2 3 3 對(duì)照＞ 能力增強(qiáng)＜ 能力減弱能力不變誘變 誘變后的突變株會(huì)繼續(xù)變異 ， 低單位菌株在傳代過程中往往占優(yōu)勢 ， 因此復(fù)篩中常常出現(xiàn)產(chǎn)量高低不穩(wěn)的狀態(tài) ，必須進(jìn)行自然分離 — 誘變育種和雜交育種必須環(huán)節(jié) 。 用致死率作為選擇適宜劑量的依據(jù) 。 提高突變頻率可獲得高產(chǎn)菌株 。 誘變育種 主要步驟 出發(fā)菌株的誘變處理 和 突變體的篩選。 自然突變 自然選育 ?自然選育的優(yōu)越
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