發(fā)酵工程原理與技術(shù)第二章-資料下載頁(yè)
2024-09-20 20:42本頁(yè)面
【正文】 基因或操縱基因突變 ?產(chǎn)生的阻遏蛋白與終產(chǎn)物不能結(jié)合或結(jié)合，但不發(fā)生作用； 末端產(chǎn)物的積累 抗反饋?zhàn)瓒艉涂狗答佉种仆蛔冎旰Y選 方法 ： 末端產(chǎn)物結(jié)構(gòu)類(lèi)似物篩選； 未突變者死， 突變?yōu)榭拐呱a(chǎn)菌落 營(yíng)養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變株篩選。 活性復(fù)，結(jié)構(gòu)改變 目標(biāo)產(chǎn)物 結(jié)構(gòu)類(lèi)似物 賴(lài)氨酸 S（ 2氨基乙基） L半胱氨酸 (AEC) 蘇氨酸 ?氨基 ?羥基戊酸（ AHV) 異亮氨酸 乙硫氨酸 精氨酸 D精氨酸 苯丙氨酸 對(duì)氟苯丙氨酸 組成酶和誘導(dǎo)酶 組成酶 微生物有些酶總是適量地存在 ,它們是不依賴(lài) 于酶底物或底物的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物的存在而合成的酶 ,如葡萄糖轉(zhuǎn)化為丙酮酸過(guò)程中的各種酶。 誘導(dǎo)酶 適應(yīng)性酶 ,是依賴(lài)于某種底物或底物的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物的存在而合成的酶。 大腸桿菌乳糖操縱子 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 有乳糖時(shí) 調(diào)節(jié)蛋白亞基 調(diào)節(jié)蛋白 阻遏蛋白 RNA聚合酶 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 誘導(dǎo)物乳糖 無(wú)活性的 阻遏蛋白 轉(zhuǎn)錄 翻譯 β 半乳糖苷酶 β 半乳糖苷通透酶 β 半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶 mRNA 沒(méi)有乳糖時(shí) 誘導(dǎo)酶弊端 誘導(dǎo)酶的生產(chǎn)需要誘導(dǎo)物，而且受到誘導(dǎo)物的種類(lèi)、數(shù)量以及分解產(chǎn)物的影響。誘導(dǎo)物有時(shí)又比較昂貴。 能迅速利用的碳源（如葡萄糖）會(huì)引起酶合成的減少 . 生產(chǎn)成本提高 組成型突變株 ?突變發(fā)生在調(diào)節(jié)基因或操縱基因 ,解除對(duì)誘導(dǎo)物的依賴(lài) ,可獲組成型突變株。 ?少數(shù)情況下，組成型突變株可產(chǎn)生大量的、比親本高的多的酶，這種突變株稱(chēng)為 超產(chǎn)突變株 。 前 進(jìn) i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 有乳糖時(shí) 調(diào)節(jié)蛋白亞基 調(diào)節(jié)蛋白 阻遏蛋白 RNA聚合酶 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 誘導(dǎo)物乳糖 無(wú)活性的 阻遏蛋白 轉(zhuǎn)錄 翻譯 β 半乳糖苷酶 β 半乳糖苷通透酶 β 半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶 mRNA 沒(méi)有乳糖時(shí) ?篩選方法：設(shè)計(jì)條件使組成型優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)，或通過(guò)菌落分辨。 ① 加誘導(dǎo)酶合成抑制物 ② 交替培養(yǎng)法 ③ 顯色反應(yīng)法 組成型突變株篩選 組成型突變株篩選 ① 加誘導(dǎo)酶合成抑制物 如：加鄰硝基 β D巖藻糖苷，抑制 β 半乳糖苷酶合成。 誘導(dǎo)型不能利用乳糖，不長(zhǎng)；組成型產(chǎn)酶，能利用乳糖，生長(zhǎng)，被富集。 組成型突變株篩選 ② 交替培養(yǎng)法 含誘導(dǎo)物（乳糖）中培養(yǎng) —— 組成型快 —— 不含誘導(dǎo)物（葡萄糖）中培養(yǎng) —— 誘導(dǎo)型失酶 —— 反復(fù)。 組成型突變株篩選 ③ 顯色反應(yīng)法 不含誘導(dǎo)物平板培養(yǎng) —— 加底物 —— 分解（有顏色變化） —— 檢出。 如 :鄰 硝基苯酚半乳糖苷 (ONPG)可被 β 半乳糖苷酶水解為半乳糖和黃色的鄰 硝基苯酚（ ONP） 抗（敏感）性突變株篩選 ?包括：抗生素、金屬離子、溫度、噬菌體 ①抗生素抗性突變：提高產(chǎn)量； ②抗噬菌體突變：消除噬菌體污染； ③條件抗性突變：如溫度，可提高產(chǎn)量； （溫度敏感突變，高溫呈營(yíng)養(yǎng)缺陷表型） 抗（敏感）性突變株篩選 ④ 敏感突變： 如：檸檬酸 異檸檬酸 氟乙酸抑制順烏頭酸酶 氟乙酸敏感突變型 順烏頭酸酶活性極低，更敏感，異檸檬酸產(chǎn)量 少，檸檬酸積累。 順烏頭酸酶
研究報(bào)告相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1