發(fā)酵工程原理與技術第二章-資料下載頁
2025-09-11 20:42本頁面
【正文】 基因或操縱基因突變 ?產(chǎn)生的阻遏蛋白與終產(chǎn)物不能結合或結合，但不發(fā)生作用； 末端產(chǎn)物的積累 抗反饋阻遏和抗反饋抑制突變株篩選 方法 ： 末端產(chǎn)物結構類似物篩選； 未突變者死， 突變?yōu)榭拐呱a(chǎn)菌落 營養(yǎng)缺陷型回復突變株篩選。 活性復，結構改變 目標產(chǎn)物 結構類似物 賴氨酸 S（ 2氨基乙基） L半胱氨酸 (AEC) 蘇氨酸 ?氨基 ?羥基戊酸（ AHV) 異亮氨酸 乙硫氨酸 精氨酸 D精氨酸 苯丙氨酸 對氟苯丙氨酸 組成酶和誘導酶 組成酶 微生物有些酶總是適量地存在 ,它們是不依賴 于酶底物或底物的結構類似物的存在而合成的酶 ,如葡萄糖轉化為丙酮酸過程中的各種酶。 誘導酶 適應性酶 ,是依賴于某種底物或底物的結構類似物的存在而合成的酶。 大腸桿菌乳糖操縱子 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 有乳糖時 調(diào)節(jié)蛋白亞基 調(diào)節(jié)蛋白 阻遏蛋白 RNA聚合酶 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 誘導物乳糖 無活性的 阻遏蛋白 轉錄 翻譯 β 半乳糖苷酶 β 半乳糖苷通透酶 β 半乳糖苷乙酰轉移酶 mRNA 沒有乳糖時 誘導酶弊端 誘導酶的生產(chǎn)需要誘導物，而且受到誘導物的種類、數(shù)量以及分解產(chǎn)物的影響。誘導物有時又比較昂貴。 能迅速利用的碳源（如葡萄糖）會引起酶合成的減少 . 生產(chǎn)成本提高 組成型突變株 ?突變發(fā)生在調(diào)節(jié)基因或操縱基因 ,解除對誘導物的依賴 ,可獲組成型突變株。 ?少數(shù)情況下，組成型突變株可產(chǎn)生大量的、比親本高的多的酶，這種突變株稱為 超產(chǎn)突變株 。 前 進 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 有乳糖時 調(diào)節(jié)蛋白亞基 調(diào)節(jié)蛋白 阻遏蛋白 RNA聚合酶 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 誘導物乳糖 無活性的 阻遏蛋白 轉錄 翻譯 β 半乳糖苷酶 β 半乳糖苷通透酶 β 半乳糖苷乙酰轉移酶 mRNA 沒有乳糖時 ?篩選方法：設計條件使組成型優(yōu)勢生長，或通過菌落分辨。 ① 加誘導酶合成抑制物 ② 交替培養(yǎng)法 ③ 顯色反應法 組成型突變株篩選 組成型突變株篩選 ① 加誘導酶合成抑制物 如：加鄰硝基 β D巖藻糖苷，抑制 β 半乳糖苷酶合成。 誘導型不能利用乳糖，不長；組成型產(chǎn)酶，能利用乳糖，生長，被富集。 組成型突變株篩選 ② 交替培養(yǎng)法 含誘導物（乳糖）中培養(yǎng) —— 組成型快 —— 不含誘導物（葡萄糖）中培養(yǎng) —— 誘導型失酶 —— 反復。 組成型突變株篩選 ③ 顯色反應法 不含誘導物平板培養(yǎng) —— 加底物 —— 分解（有顏色變化） —— 檢出。 如 :鄰 硝基苯酚半乳糖苷 (ONPG)可被 β 半乳糖苷酶水解為半乳糖和黃色的鄰 硝基苯酚（ ONP） 抗（敏感）性突變株篩選 ?包括：抗生素、金屬離子、溫度、噬菌體 ①抗生素抗性突變：提高產(chǎn)量； ②抗噬菌體突變：消除噬菌體污染； ③條件抗性突變：如溫度，可提高產(chǎn)量； （溫度敏感突變，高溫呈營養(yǎng)缺陷表型） 抗（敏感）性突變株篩選 ④ 敏感突變： 如：檸檬酸 異檸檬酸 氟乙酸抑制順烏頭酸酶 氟乙酸敏感突變型 順烏頭酸酶活性極低，更敏感，異檸檬酸產(chǎn)量 少，檸檬酸積累。 順烏頭酸酶
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