發(fā)酵工程原理與技術(shù)第二章(參考版)
2024-09-22 20:42本頁面
【正文】 順烏頭酸酶 。 組成型突變株篩選 ③ 顯色反應(yīng)法 不含誘導(dǎo)物平板培養(yǎng) —— 加底物 —— 分解（有顏色變化） —— 檢出。 誘導(dǎo)型不能利用乳糖，不長；組成型產(chǎn)酶，能利用乳糖，生長，被富集。 前 進 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 有乳糖時 調(diào)節(jié)蛋白亞基 調(diào)節(jié)蛋白 阻遏蛋白 RNA聚合酶 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 誘導(dǎo)物乳糖 無活性的 阻遏蛋白 轉(zhuǎn)錄 翻譯 β 半乳糖苷酶 β 半乳糖苷通透酶 β 半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶 mRNA 沒有乳糖時 ?篩選方法：設(shè)計條件使組成型優(yōu)勢生長，或通過菌落分辨。 能迅速利用的碳源（如葡萄糖）會引起酶合成的減少 . 生產(chǎn)成本提高 組成型突變株 ?突變發(fā)生在調(diào)節(jié)基因或操縱基因 ,解除對誘導(dǎo)物的依賴 ,可獲組成型突變株。 大腸桿菌乳糖操縱子 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 有乳糖時 調(diào)節(jié)蛋白亞基 調(diào)節(jié)蛋白 阻遏蛋白 RNA聚合酶 i基因 P O Lac Z Lac Y lac A 誘導(dǎo)物乳糖 無活性的 阻遏蛋白 轉(zhuǎn)錄 翻譯 β 半乳糖苷酶 β 半乳糖苷通透酶 β 半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶 mRNA 沒有乳糖時 誘導(dǎo)酶弊端 誘導(dǎo)酶的生產(chǎn)需要誘導(dǎo)物，而且受到誘導(dǎo)物的種類、數(shù)量以及分解產(chǎn)物的影響。 活性復(fù)，結(jié)構(gòu)改變 目標(biāo)產(chǎn)物 結(jié)構(gòu)類似物 賴氨酸 S（ 2氨基乙基） L半胱氨酸 (AEC) 蘇氨酸 ?氨基 ?羥基戊酸（ AHV) 異亮氨酸 乙硫氨酸 精氨酸 D精氨酸 苯丙氨酸 對氟苯丙氨酸 組成酶和誘導(dǎo)酶 組成酶 微生物有些酶總是適量地存在 ,它們是不依賴 于酶底物或底物的結(jié)構(gòu)類似物的存在而合成的酶 ,如葡萄糖轉(zhuǎn)化為丙酮酸過程中的各種酶。 培養(yǎng)后，如果某一營養(yǎng)物的周圍有微生物的生長圈，說明它就是微生物的營養(yǎng)缺陷型。 營養(yǎng)缺陷型突變株 抗阻遏和抗反饋突變型 特殊變異菌的篩選方法 組成型突變株 抗（敏感）性突變株 高絲氨酸缺陷菌生產(chǎn) 賴氨酸 必需氨基酸 食品 、 醫(yī)藥 、 畜牧業(yè)需要量很大 但在 代謝過程 中 ， 一方面賴氨酸對 天冬氨酸激酶有反饋抑制 ，另一方面還同時生成蘇氨酸和甲硫氨酸 ， 使賴氨酸不能在細(xì)胞內(nèi)累積 高絲氨酸缺陷菌 （ 不能合成高絲氨酸脫氫酶 ， 補充適量高絲氨酸 ） 則合成大量賴氨酸 天冬氨酸 天冬氨酸 磷酸 天冬氨酸 半醛 高絲氨酸 蘇氨酸 甲硫 氨酸 賴氨酸 AK HSDH 為反饋抑制 為阻遏 AK： 天冬氨酸激酶 HSDH： 高絲氨酸脫氫酶 營養(yǎng)缺陷型的篩選 ?淘汰野生型 ?檢出缺陷型 ?鑒定缺陷型 前 進 淘汰野生型 原因： 營養(yǎng)缺陷型的比率很低 ， 只有百分 之幾到千分之幾 ， 淘汰為數(shù)眾多的 野生型菌株 ， 可達到 “ 濃縮 ” 營養(yǎng)缺 陷型的目的 方法： 抗生素法 或 菌絲過濾法 返 回 抗生素法 原理： 抗生素只殺死生長中的細(xì)菌或真菌 ， 在基本培養(yǎng)基上加抗生素 ， 將野生型細(xì)菌殺死 ， 營養(yǎng)缺陷型不死 ， 從而來濃縮營養(yǎng)缺陷型 細(xì)菌 通常 青霉素 （抑制細(xì)胞壁的合成） 真菌
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