11酶工程酶的蛋白質(zhì)工程(文件)
【正文】 ? 絲狀真菌具有很強(qiáng)的分泌能力，有望提高重組蛋 白的生產(chǎn)效率； ? 新表達(dá)系統(tǒng)的建立可避開大腸桿菌生產(chǎn)重組蛋白 的專利限制； ? 米曲霉和黑曲霉等絲狀真菌被 FDA和世衛(wèi)組織認(rèn) 定安全 。 表達(dá)水平： 與多種因素有關(guān)，包括選用的啟動子及其他調(diào)控序列的存在、目的基因整合位置、整入拷貝數(shù)和受體菌株等。 : 酪氨酰 tRNA合成酶是應(yīng)用蛋白質(zhì)工程技術(shù)研究得比較深入的酶之一 。 1989年 ,Eersht等人應(yīng)用蛋白質(zhì)工程技術(shù)對這 8個側(cè)鏈殘基進(jìn)行系統(tǒng)突變以揭示側(cè)鏈在整個酶促反應(yīng)中的作用以及對決定酶與底物結(jié)合專一性方面的影響。 α 轉(zhuǎn)化生長因子 (TGFα) 與綠膿桿菌毒素的Ⅱ 與 Ⅲ 區(qū)段的基因 (PE40)拼接形成的雜合蛋白能夠明顯地延長荷瘤裸鼠 (腫瘤細(xì)胞表面有 TGF的受體 )的生存期 ,但該雜合毒素卻不殺死不帶此受體的細(xì)胞。 對于人體而言它是一種異體蛋白 , 會引起人體產(chǎn)生人抗鼠抗體 。 嵌合抗體 : 是應(yīng)用 DNA 重組技術(shù)將鼠源單抗的可變區(qū) (V區(qū) )基因與人免疫球蛋白 (Ig)的恒定區(qū) (C區(qū) )基因相連接 ,構(gòu)建成嵌合基因 ,導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行表達(dá) ,制成嵌合抗體。 蛋白質(zhì)工程存在的問題 蛋白質(zhì)工程集中了當(dāng)代分子生物學(xué)一些最新成就 , 并將核酸研究與蛋白質(zhì)研究結(jié)合起來 ,同時也將基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究結(jié)合起來 。人們正試圖尋找高效表達(dá)載體、分泌性系統(tǒng)以及各種高效批量分離技術(shù)來克服這一限制。 4）突變酶的結(jié)構(gòu)分析 突變酶 ATLLid 的底物結(jié)合口袋與野生型相比，位于對硝基苯所在方向的口袋區(qū)域顯著增大，與野生型相比空間位阻減少 (黃色箭頭所示 )，使對硝基苯酚酯類底物更好地進(jìn)入口袋并與活性中心結(jié)合，從而提高ATLLid 對該類底物的偏好性。 。利用同源建模模擬及分子對接等手段分析得出， ATLLid 蓋子區(qū)域的突變可使蓋子柔性增強(qiáng)、疏水性提高和底物結(jié)合口袋變大，使得底物更易進(jìn)入催化活性中心，提高對長鏈底物的催化活力。 ? 土曲霉 A. terreus 脂肪酶基因 ATL序列 (GenBank Accession No. )根 據(jù)畢赤酵母的密碼子偏好性優(yōu)化后，由南京金斯 瑞公司合成。 目前正在尋求通過電子衍射三維分析 、 二維核磁共振等手段來克服上述限制 。 由于該抗體已 “ 人源化 ” , 其免疫原性已大為降低。 對此人們應(yīng)用 DNA重組技術(shù)對抗體進(jìn)行改造 ,出現(xiàn)了抗體工程 。 抗體工程的設(shè)計與研制 : 蛋白質(zhì)工程中進(jìn)展最快又與醫(yī)學(xué)密切相關(guān)的是 “ 抗體工程 ” 。 枯草桿菌蛋白酶的蛋白質(zhì)工程 洗衣粉中對酶的穩(wěn)定性有影響因素： ? 表面活性劑：破壞酶的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) ? 漂白劑：化學(xué)氧化 抗氧化性結(jié)果是 Ala222抗氧化性最強(qiáng) 應(yīng)用蛋白質(zhì)工程已取得的研究成果實例 ─────────────────────────── ─────────────────────────── ─────────────────────────── 誘變蛋白質(zhì) 氨基酸突變 原定目標(biāo) 結(jié)果 ─────────────────────────── ─────────────────────────── ─────────────────────────── T4溶菌酶 Ile→ Cys 構(gòu)建二硫鍵 成功 增加熱穩(wěn)定性 ─────────────────────────── ─────────────────────────── ─────────────────────────── 枯草桿菌 Gly→Lys 拓寬酶作用的 成功 蛋白酶 底物范圍 Ala→Leu 提高抗氧化性能 ────────────────────────── ─────────────────────────── ─────────────────────────── α 抗凝酶 Met→ Val 提高抗氧化性能 成功 ─────────────────────────── ─────────────────────────── ─────────────────────────── 胰蛋白酶 Gly→ Ala 提高酶水解專一性 成功 ─────────────────────────── ─────────────────────────── ─────────────────────────── β 內(nèi)酰胺酶 Ser→ Cys 驗證 Ser對該酶 成功 的重要性 ─────────────────────────── ─────────────────────────── ─────────────────────────── β 干
黨政相關(guān)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1