微生物限度檢驗(yàn)操作規(guī)程(20xx年版)(文件)
【正文】 30～35℃培養(yǎng)24～48小時(shí)。 結(jié)果判斷 若木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上有疑似菌落生長(zhǎng)，且三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基的斜面為紅色、底層為黃色，或斜面黃色、底層黃色或黑色，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為沙門菌。 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過濾膜等。取相當(dāng)于1g或1ml供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，在30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。 結(jié)果判斷 若溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng)，且氧化酶試驗(yàn)陽性，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為銅綠假單胞菌。 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過濾膜等。取相當(dāng)于1g或1ml供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻。 白色念珠菌 設(shè)備、儀器及用具 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室、陽性菌檢測(cè)室、生物安全柜、凈化工作臺(tái)、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、滅菌柜、紫外燈等。 培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基等。 選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)24～48小時(shí)。 檢測(cè)周期：67個(gè)工作日。挑取疑似菌落接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48小時(shí)（必要時(shí)延長(zhǎng)至72小時(shí)），或采用其他適宜方法進(jìn)一步鑒定。取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定）的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，混勻。 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過濾膜等。 選擇和分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化納瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72小時(shí)。 培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基等。 金黃色葡萄球菌 設(shè)備、儀器及用具 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室、陽性菌檢測(cè)室、生物安全柜、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、滅菌柜、紫外燈等。取上述平板上生長(zhǎng)的菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)，或采用其他適宜方法進(jìn)一步鑒定。 培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基等。 銅綠假單胞菌 設(shè)備、儀器及用具 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室、陽性菌檢測(cè)室、生物安全柜、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、滅菌柜、紫外燈等。沙門菌在木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)良好，菌落為淡紅色或無色、透明或半透明、中心有或無黑色。 培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)基、木糖賴氨酸脫氧酸鹽瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基等。 沙門菌 設(shè)備、儀器及用具 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室、陽性菌檢測(cè)室、生物安全柜、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、滅菌柜、紫外燈等。 結(jié)果判斷 若紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng)，則對(duì)應(yīng)培養(yǎng)管為陽性，否則為陰性。 定性試驗(yàn) 除另有規(guī)定外，取相當(dāng)于1g或1ml供試品的上述預(yù)培養(yǎng)物接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定）腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，30℃～35℃培養(yǎng)24～48小時(shí)后，劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，30℃～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。 儀器及器皿顯微鏡、托盤天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過濾器等。 培養(yǎng)物的菌齡以1624h為宜。革蘭陰性菌呈紅色,大腸埃希菌為革蘭陰性短桿菌,或球桿菌狀,亦有桿菌狀。滴加結(jié)晶紫染液,染色1min,水洗,滴加碘液,媒染1min,水洗,以濾紙吸干余水。 結(jié)果判斷 若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。 操作方法 供試液制備和增菌培養(yǎng) 取供試品，照“”制成1：10供試液。 儀器及器皿顯微鏡、托盤天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過濾器等。陽性對(duì)照試驗(yàn)方法同供試品的控制菌檢查，對(duì)照菌的加量應(yīng)不大于100cfu。供試液制備及實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求同需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)
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