【正文】 ）的基準(zhǔn)物質(zhì)則稱為標(biāo)準(zhǔn)品。特此將二者區(qū)分如下：對照品、標(biāo)準(zhǔn)品系指用于鑒別、檢查、含量測定的基準(zhǔn)物質(zhì)。稱青霉素為對照品的、標(biāo)準(zhǔn)品的，都有。在配制標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌窌r，尤其注意要準(zhǔn)確。通常有寫到化學(xué)純、分析純、色譜純、純度達(dá)到多少？含標(biāo)示物多少？等等。動物實驗中，用到分析純及以上級別的比較多。第二，我們來談?wù)勗噭┰系馁A存方式。不然，實驗還沒開始，試劑出問題了，得臨時更換，誤事。固體相對比較好保存。有的是顆粒狀的；有的是塊狀的。嚴(yán)格按要求保存。按其保存的要求，有常溫保存、低溫冷藏、普通冷凍、低溫冷凍、深低溫冷凍（－70度以下）幾種。再者，要注意，級別不同的試劑要分開來。低溫冷藏的要注意兩點：一是不要把該冷凍的來冷藏。普通冷凍一般是指置于0度下。再者就是漿箱除冰時要預(yù)先進(jìn)行轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的同等條件下暫時貯存。而固體一般的降解是比較慢的。對于毒性原料，首先是要了解其毒性的機(jī)制，做到心中有數(shù)。有的是致癌，這是我們感到最為擔(dān)心的。一般我們可以戴一次性手套。第四，要知道這些物質(zhì)使用后的排放處理方式。一是自己去試劑供應(yīng)點購買或者領(lǐng)取。二是由試劑銷售人員送貨上門的。要查驗后確認(rèn)。尤其是一些生化試劑，要注意是否過期。不同批號也可能有差異。但又比實際用量要多出一些，因多次取樣后會損失一些。第三，試劑的溶解度。又可分為脂溶性的親水性兩大類。難溶性的：難溶性的有的是脂溶性比較高的，可以用油來配制。DMSO號稱萬能溶劑。要特別注意不要盲目加熱。但是，有些試劑我們并不知道。二是上網(wǎng)查詢?？纯慈芙舛热绾?。后來改用植物油稀釋，效果不錯。然而，實際卻基本不溶。通常與水以不同濃度混合，有時可達(dá)到比較滿意的效果。水，是用得最廣泛的溶劑。雙蒸水可以達(dá)到無菌、無熱原的要求。這類玻璃容器一般都是用重鉻酸液浸泡，再洗滌。多用分析純。做PCR時，用氯仿除蛋白。要注意甲醇對眼睛的毒性，氯仿對肝臟的毒性。有些試劑用一定濃度的乙醇來配效果比較好。這是因為，有些試劑必須在一定的PH值條件下才能穩(wěn)定。前面述及的STZ，必須在PH4～，故而要用緩沖液配制。配制緩沖液時，要注意如下事項：1。二是要準(zhǔn)確測量PH值。貼上醒目而牢固的標(biāo)簽就容易識別。在配制過程中，要使試劑符合我們的要求，還要用到如：玻棒、磁力攪拌器、PH試紙、分液漏斗、濾紙等器具。將固體配制成試劑時，通常要用到衡器。普通天平一般用于粗略的稱量，大家都很熟悉；扭力天平也使用簡單；光電分析天平現(xiàn)在用得較少。選擇1/1000的尚可，但要用1/10000的就沒必要，也不太合適了。當(dāng)然，小于其最小量程是稱不出來的。其大前提是：放置天平的房間要控制溫濕度，放置天平的臺子要平。要細(xì)心、耐心地調(diào)好。一是預(yù)先插電幾分鐘，至電子天平的屏幕顯示穩(wěn)定后再稱量。四是稱量剩余的固體及不小心灑落的液體要清除干凈。對于少數(shù)液體需稱量的，多以滴管或移液器來添加。而鱗狀的、顆粒狀的要注意小心稱量。B 量器的使用量器主要有：帶刻度燒杯、帶刻度試管、帶刻度吸管、量杯、量筒、容量瓶、移液管、移液槍、微量進(jìn)樣器。根據(jù)情況合理選擇。它只有一些定量的大小規(guī)格。移液管是比較精確的。熟能生巧。尤其在一些微量溶液的吸取，在需要嚴(yán)格避免污染的一些實驗中，起到了不可替代的作用。使用時要定期校正。多用于液相的進(jìn)樣，蛋白電泳的進(jìn)樣。用后可以乙醇液、蒸餾水洗滌，置于專用盒中。C 其它器具的使用燒杯的使用 在配制試劑時通常要用到燒杯。要注意的是，不要讓玻棒觸底、觸壁，要讓溶液全部旋轉(zhuǎn)起來，而不要有死角。二是要注意是否加溫。PH試紙的使用 有些溶液需要調(diào)PH值的。多以玻棒蘸取。不用時多以氯化鉀飽和溶液來保護(hù)電極。既已在前面有所述及，這里關(guān)于保存就不詳述了。用得比較多的是玻璃瓶。酌情使用。因為用完了就可以丟棄。二是標(biāo)簽。所以注意要用油性筆寫。也可以在醫(yī)用膠布上寫上字，貼上去。也可以讓別人知道其大致是否在有效期內(nèi)。像配對照品溶液，一般是用容量瓶，而且要選合適的規(guī)格。配體積小的溶液，通常要用移液槍，或微量進(jìn)樣器。不然，一打開蓋，試劑粉末就損失掉了。有的試劑配制前要加溫?？蛇x擇黑紙或者黑塑料來包裹。因其在水中會較快失效。試制配好后大多數(shù)是要求冷藏的，且盡快使用。關(guān)于試劑的使用，我只談?wù)勗瓌t上的一些注意事項。二是要注意反復(fù)取用試劑時，不要污染。因動物實驗中，講究的就是齊同對比。在同一個實驗室，做同一類實驗時，我們通常會共用一些試劑。要注意不要用過期的試劑。有些是在一小段落后將所用器具洗滌干凈。就像吃完飯要洗碗一樣。有的稍加處理即可，不影響使用；有的則不能繼續(xù)使用，甚至產(chǎn)生毒性。比如，我有一次配含氯化鋅的多種離子的溶液，打開冰箱發(fā)現(xiàn)有沉淀，置室溫下?lián)u勻后，已澄清，不影響使用。但要仔細(xì)觀察，如絮狀物是其它物質(zhì)，或者是菌絲，則不可用。如：有一次我配一個新化合物，由于事先不了解，加溫快速溶解，置冰箱后，第二天發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)黃色。黏度變化：主要是一些高分子物質(zhì)的“溶液”。主要是保存不當(dāng)所致。B 化學(xué)性質(zhì)的變化如：PH的變化、失去氧化性、失去還原性PH的變化：當(dāng)懷疑試劑出現(xiàn)問題的時候，我們可以測一下其PH。固此硫酸已不可用。C 生物學(xué)性質(zhì)的變化如：酶失活、生物分子降解等這種變化并不是一下就可以看出來的。如何解決試劑保存中出現(xiàn)的問題呢？一般而言，除少數(shù)不影響使用的現(xiàn)象外，試劑都得重配。其它毒性：如：過敏、皮膚刺激等對我們而言，了解其毒性機(jī)制是很重要的。事實上，只要我們做到了安全防護(hù)，基本上也沒有多大問題。下面我們來具體談一談如何在配制毒性試劑過程中防護(hù)自己。這樣，我們對于毒性試劑心里有個底。但不至于有生命之虞。針對不同毒物，我們有不同的措施。我們常常不可能百分之百不接觸到有毒物質(zhì)。嚴(yán)重的話，要去醫(yī)務(wù)室或醫(yī)院處理。因為玻璃瓶總是被人重復(fù)利用，擔(dān)心有人在不知情的情況下誤用裝過有毒試劑的瓶子。二是，試劑不要接觸到容器的外壁。這樣，就可以直接用手拿瓶壁外，而不擔(dān)心。四是長期接觸有毒試劑的器具要放在專用的范圍內(nèi)。如：PCR中常用到的試劑焦碳酸二乙酯（DEPC），可與氨反應(yīng)而產(chǎn)生致癌物。要注意在使用過程中的配伍禁忌。對于危險品，我們一般就是低溫、避光、在規(guī)定情況下使用。但有時候，這些步驟讓我們覺得有些繁瑣。第三，要有小量的試配的經(jīng)驗。每次加的時候，因為一次誤差，可能各種試劑的比例有差異。這樣一是可以減少誤差，二是節(jié)省時間。有時候，因為實驗條件的不同，完全按書上的方法去配成試劑，甚至做不出實驗結(jié)果。又如：給動物灌胃時，我們知道每種動物的容量是有一定的。在試劑不很足的情況下，可以把試劑和標(biāo)本蛋白量都減至２／３，甚至一半，同樣可以測出蛋白含量，只要濃度在它的檢測范圍內(nèi)。對于一些濃度要求不精確的溶液，配制時可酌情省去一些步驟。其前提是對實驗原理非常了解。摸索一番之后，發(fā)現(xiàn)有可能是考馬的問題。于是，在原配方的基礎(chǔ)上，我配制了幾種不同的考馬液，試了幾塊膠。書本上的只是一個大概的標(biāo)準(zhǔn)。有的可能通過別人贈送，有的可以郵寄。這需要實驗做得很熟練，且對某具體實驗步驟、原理十分了解的情況下方可如此。甚至只有當(dāng)實驗結(jié)果出出異常的時候，我們才會想起可能是試劑有問題。我們所能做的就是在一次實驗中，盡量使用同一批次的試劑，對所有動物齊同對比。該用進(jìn)口的一定要用進(jìn)口的。有些試劑國產(chǎn)的是達(dá)不到要求的。在摸索階段，我們可能想各種的試劑都試一下效果，這可以理解。對于生物方面的實驗，尤其要注意。更換一批試劑時，上一次的一定要處理干凈。四是配好試劑按規(guī)定要求保存。要區(qū)分開來，寫好標(biāo)識。有些試劑有詳細(xì)的說明。的確，因為動物實驗屬生物方面，生物的變異度太大，出現(xiàn)一些問題在所難免。比如：本來在室溫下應(yīng)為膠凍狀的試劑是不是已經(jīng)成液體了？PH值是否在規(guī)定的范圍內(nèi)？肉眼觀察試劑是否澄清？是否變色？所用量取器具是否干凈？是否用了已經(jīng)過期的配好的試劑？等等。二是替換法。這樣，很可能從中發(fā)現(xiàn)一些信息。這樣，可突出某一度劑的因素，從而暴露試劑的問題，也有可能藉此將此因素排除。如何平時是上５０ug,那么排查實驗可上200,300ug甚至更多。有時候，在實驗中會出現(xiàn)。可在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步來查明原因。我想看看是不是由于樣品不夠的原因。三是強(qiáng)化法。比如：在做蛋白電泳時，假如你懷疑細(xì)胞裂解液有問題。不過，很多是一下查不出來的。要查找實驗中的問題，方法有如下幾種：一是常規(guī)檢查法。在用之前，詳細(xì)地查詢是最基本的保證。五是注意試劑使用的操作規(guī)程。如：苦味酸可以配成給動物標(biāo)記的苦味酸液，也可以配制Bouin’s液。如有共用試劑，要詳細(xì)告知別人，或是從別人那得到詳細(xì)信息。一方面是微生物的污染，另一方面是其它雜質(zhì)的污染。尤其在一個大的實驗階段，為保證實驗中的齊同對比，最好一次購進(jìn)所需試劑，不要中途少了再趕。這主要是要看實驗的要求，以及國產(chǎn)試劑達(dá)到的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。不要因為節(jié)省經(jīng)費而購一些難以達(dá)到要求的國產(chǎn)貨。首先，我們來談?wù)勅绾伪苊庖蛟噭┰蚨趯嶒炛谐霈F(xiàn)問題。如果等到實驗已經(jīng)做完才發(fā)現(xiàn)，往往于事無補。第十，我們來談?wù)勅绾巫匪輰嶒炛性噭?dǎo)致的問題。那么，是否根據(jù)實驗的原理用別的試劑代用一下呢？我覺得是可以考慮的。５　尋找代用品這就成了我實驗中的最佳濃度。于是自己動手來改考馬的配方。剛開始做蛋白電泳時，按《分子克隆》上的配方來配，老是染不上色。我想在實驗中是有不少這樣的情況的。因此，在對實驗原理及步驟很熟悉的情況下，實驗中可不拘泥于書本，完全可以自行掌握。這樣，就要根據(jù)不同的情況來調(diào)整濃度，不要硬搬書上或文獻(xiàn)中的濃度。比如：做蛋白電泳，用考馬斯亮藍(lán)染色時，有時我們會發(fā)現(xiàn)沒染上。試劑說明書上，以及做某一具體實驗的方法步驟上，一般都會寫明試劑要配成什么樣的濃度。但如果我們知其原理，就可以配成混合液，一并加入。關(guān)于配制試劑的優(yōu)化方法，主要有以下幾種：１　配混合試劑要達(dá)到這樣一個看似高于一般實驗的標(biāo)準(zhǔn)，需要些什么樣的要求呢？首先，必須是你對試劑的原理及可能出現(xiàn)的問題有全面的了解。第九，我們來談?wù)勁渲圃噭┑膬?yōu)化。這里所指危險品，主要是指在一定條件下可發(fā)生爆炸的物質(zhì)。DEPC能與胺和巰基反應(yīng),因而含Tris和DTT的試劑不能用DEPC處理。這樣就能盡可能地減少污染。三是配制完畢，污染物及時投放到指定地點。這樣，有可能不小心用沾了有毒試劑的一次性手套接觸了其它瓶子，擴(kuò)大了污染的范圍。第二，配制毒性試劑的防護(hù)。第一，毒性試劑的容器要專用，并有醒目的標(biāo)志。如：有的有紅腫、疼痛、眼刺激性、特異性惡臭等。３　了解中毒的癥狀因此，了解其毒性機(jī)理，我們就會面對試劑心中有數(shù)，不至于太不重視，也不至于過分擔(dān)心。但平常用的時候偶爾灑一點到皮膚上，我們清洗即可，也就沒有多大的擔(dān)心。這是防護(hù)的一個基本前提。我們的身體也不是那么脆弱的，還有免疫系統(tǒng)在起作用。對于局部毒性和一些臟器的慢性毒性，我們往往是不會特別地?fù)?dān)心。首先，我們來了解一下毒性的基本常識。關(guān)于這一問題，我們將在“如何追溯實驗中試劑的問題”章節(jié)中具體探討。同樣，像雙氧水等一些強(qiáng)氧化劑可通過類似的檢測來判斷。失去氧化性：有一次用濃硫酸做蒽酮硫酸法測多糖的含量，發(fā)現(xiàn)配好的試劑沒有反應(yīng)，沒出現(xiàn)應(yīng)有的顏色。產(chǎn)生氣味：這主要是可能溶液中的物質(zhì)相互反應(yīng)產(chǎn)生了一些氣體，或者本身溶解其的中氣體跑了出來，也有的是本身固有的氣味變化。如：明膠溶液，配制時間過長，有的就會變稀，這可能是明膠的質(zhì)量問題。也有可能是顏色變淺。顏色變化：這一變化可能是在配制過程中加溫后，過一段時間出現(xiàn)的；也有可能是貯存過程中受光照所引起的；也有可能是溶液中各物質(zhì)相互作用所引起的。一般來說，酌情調(diào)整其的中乙醇濃度可以避免。A 物理性質(zhì)的變化最常見的有：產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶、產(chǎn)生絮狀物、顏色變化、黏度變化、產(chǎn)生霉菌、產(chǎn)生氣味產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶：最常見的是一些緩沖液，當(dāng)溫度比較低的時候，可能有些物質(zhì)是飽和溶液，低溫可使其析出。第七，我們來談?wù)勗噭┍４嬷械某Ｒ妴栴}及解決方式。這是我們應(yīng)當(dāng)注意的。有些是必須取完后立即洗滌，以免別人或自己在污染的情況下誤用。不然，實驗出了問題就虧大了。所以，配試劑時，盡量配足量，寧愿在一次實驗后有剩余，而不能不足。以移液管取液時，注意要洗滌，多余的液體不要返回瓶內(nèi)，而應(yīng)放掉。配好的試劑因大多以液體形式存在，其保質(zhì)期較原料試劑要短，易失效。有的試劑是極易氧化的，通常要加抗氧劑。要注意取續(xù)濾液。如：PMSF，要用異丙醇來配制。DMSO也會出現(xiàn)類似現(xiàn)象。如：有些試劑在配制過程中要加熱至沸騰，溶劑損失不少，要待其冷卻至室溫再加溶劑補足。如：PCR、蛋白電泳中某些試劑就是極微量的裝在Doff管中，甚至基本看不見。切忌不要用量杯。濃度要準(zhǔn)確，要注意幾點。這幾種方法可酌情選擇。也可以在紙上寫好，然后貼上透明膠。有人喜歡用記號筆寫上標(biāo)簽。在買一些試劑盒的時候，我們通常能得到一些這樣的瓶子。有時也可用一些高分子材料的瓶子裝試劑。極少量的試劑可以用子彈頭型的Doff管來裝。一是配制試劑的容器的選擇。第六，我們來談?wù)?配制好的試劑的使用和保存這個問題在前面講到原料的保存時已提到過一些。PH計的使用 有些對PH 要求比較精確的溶液是用要PH計來測定的。要注意選用試紙的PH范圍。漏斗的使用 有些試劑配制后要求過濾方可作用。更有甚者，把溫度計當(dāng)玻棒用，那是很不應(yīng)該的。要注意燒杯的大小，加熱時要墊石棉網(wǎng)，加磁力攪拌器的攪拌子的大小要適宜，傾倒時不要漏液。只能吹干。量程有20ul, 50ul,100ul不等。進(jìn)口的質(zhì)量較佳。要小心調(diào)節(jié)槍的刻度盤。熟練掌握將為我們的實驗提高不少效率。使用時要用洗耳球吸取，放下時由手指來控制其放出的容量。多用于配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液。容量瓶比較精確。對于一些不需精確濃度的試劑的配制是可行的。而多余的另裝則可能保質(zhì)期難以保證。有的是顆粒狀的；有的是塊狀的。對于固體，一般要盡量以小勺搗至成粉末或小顆粒，再以牛角勺輕抖至稱量紙上或容器中。三是稱量輔助器具。天平的使用注意事項。看了說明書再來調(diào)可以使我們省去不少時間。天平的調(diào)水平。每一個天平都有它的量程范圍。天平有不同的精密度的，如：準(zhǔn)確到1g的、,1/100g,1/1000g,1/10000g, 1/100000g的。盡管