【正文】 有些物質(zhì)的溶解性是我們所熟知的。助懸劑，如：羧甲基纖維素鈉（CMC－Na）；增溶劑，如：泊洛沙姆188；潛溶劑，如：乙醇。如果是液體試劑，則就要看它能否有溶劑中混勻或者分散。要量體裁衣。四是由別人饋贈(zèng)的。有些可自己去試劑原料店購(gòu)買。每種物質(zhì)都是可以清洗的，只要發(fā)現(xiàn)得早，且沒有入口中，基本上可以自行處理。有的是產(chǎn)生血液毒性，如：苯，對(duì)粒細(xì)胞有影響。對(duì)試劑原料而言，一般較少有這種情況。當(dāng)然，這是指部分含水的試劑原料而言。一般要注意避光，并保持溫度不致于過高。這對(duì)以后配制試劑時(shí)的稱量有一定的影響。因此，做好這個(gè)前期工作是十分必要的。按其毒性，有無毒、低毒、中等毒性、劇毒幾種。因此，我們?cè)谂淠承┰噭r(shí)，可考慮先稱10mg以上的物質(zhì)配成較大的濃度，再逐步稀釋，所得濃度要準(zhǔn)確一些。如：青霉素的基準(zhǔn)物質(zhì)稱為標(biāo)準(zhǔn)品，而氧氟沙星的基準(zhǔn)物質(zhì)則稱為對(duì)照品。我們通?；煊眠@兩個(gè)詞。有些緩沖液，尤其是做離體實(shí)驗(yàn)的，一般低溫保存下盡快地用完。按其使用時(shí)限來分：即配即用型：如：STZ極易分解，配制后要迅速全部用完，不然完全失效。動(dòng)物基本操作用試劑：如：麻醉用試劑、動(dòng)物除毛的試劑硫化鈉、動(dòng)物標(biāo)記的試劑苦味酸、取血或插管用的試劑肝素、消毒用的75％乙醇、碘伏、新潔爾滅、動(dòng)物手術(shù)后護(hù)理的抗生素等。又可分為原料藥和制劑。系列貼子中如有不當(dāng)之處，請(qǐng)各位不吝指出！from dxy首先，我們來了解一下動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中需要用到的試劑的類型為此，本版將陸續(xù)推出一些最基礎(chǔ)的專題，從一般到特殊，從抽象到具體，從已知到未知，逐步地深入討論。所以，沒有必要用那么高的劑量。因此，從理論來上說，藥效學(xué)的最高劑量可以達(dá)到MTD。是否可以考慮將LD50的1／100作為長(zhǎng)毒試驗(yàn)的低劑量？我覺得上式有一定的參考意義。因此，這些是需要我們?nèi)ッ鞯?。而且，我更趨向于保守地估?jì)。 .如果S=6, 。相應(yīng)地，LD5則為死亡率為5％時(shí)的效應(yīng)；LD1則為死亡率為1％時(shí)的效應(yīng)；LD50則為死亡率為50％時(shí)的效應(yīng)。:E=+ Cs這就是著名的Hill方程。就是說，把引起5％實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡的劑量定為藥效學(xué)最高劑量。在預(yù)試中摸索并調(diào)整劑量。通過查文獻(xiàn)我們可以找到。但有時(shí)候，我們可能會(huì)使用一些其它的動(dòng)物。那么，在多大的面積上給多少藥才與臨床差不多等效呢？關(guān)于這個(gè)問題，我們只討論皮膚給藥的。主要是口服影響因素多。因?yàn)槊糠N藥物的生物利用度是不一樣的。應(yīng)該說，這樣的估計(jì)是比較合理的。而我們常常主要關(guān)注的是吸收程度。在做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，我們通常要用到不同的給藥途徑。但是，小孩由于發(fā)育不完全，尤其是肝臟這一承擔(dān)主要藥物代謝的器官發(fā)育不完全，實(shí)際上小孩比成人要敏感。一般用于計(jì)算成人。成人體重一般按70kg算。我們知道，老人和小孩的用藥劑量與成人通常是不一樣的。如果設(shè)為60kg或55kg，則能為大多數(shù)人接受。看了以上的論述種種，您是否已有了上述感受呢？現(xiàn)在，您就可以放心地用我編的那個(gè)簡(jiǎn)表了。按照前面我所編制的簡(jiǎn)表，大家都可以非常方便的算出劑量來。在此，當(dāng)我們了解了其中的相對(duì)誤差后，就會(huì)有選擇依據(jù)了。凡體重在300~350g之間的，誤差按15%來算。我們知道，要把體重轉(zhuǎn)化成體表面積，要用到計(jì)算器。從以上數(shù)據(jù)可知：當(dāng)大鼠體重在170~230g范圍內(nèi)，按折算系數(shù)計(jì)算劑量的相對(duì)誤差在5%以內(nèi)；當(dāng)大鼠體重在150~260g范圍內(nèi)，按折算系數(shù)計(jì)算劑量的相對(duì)誤差在10%以內(nèi)；當(dāng)大鼠體重在120~300g范圍內(nèi)，按折算系數(shù)計(jì)算劑量的相對(duì)誤差在15%以內(nèi)；當(dāng)大鼠體重在100~340g范圍內(nèi)，按折算系數(shù)計(jì)算劑量的相對(duì)誤差在20%以內(nèi)。誤差為正。根據(jù)前面計(jì)算的結(jié)果，我們可以預(yù)測(cè)到：當(dāng)X，函數(shù)Y2在Y1的上方，當(dāng)X，函數(shù)Y2在Y1的下方。設(shè)人的劑量為U mg/kg, 體重為70kg。哪一種計(jì)算方法更方便呢？當(dāng)然是按折算系數(shù)來計(jì)算。而我們按折算系數(shù)計(jì)算的時(shí)候，是直接按體重給藥的。我們不妨以大鼠為例來算一算。這個(gè)公式的發(fā)表，可以說，對(duì)于科學(xué)界起到了一個(gè)很好的推動(dòng)作用。遇到有很大種屬差異的藥物或化合物，上述換算關(guān)系就相差很大了。我們可以用常用的麻醉劑試試對(duì)不同動(dòng)物的作用。以上所述，一方面是想說明按體表面積算劑量的準(zhǔn)確性；另一方面，是想表明通過折算系數(shù)后，以體重為參照，在一定范圍內(nèi)還是實(shí)用的，且方便。應(yīng)該說，這是一種理想化的推論。不信，你可以用體表面積的公式來算，結(jié)果是相差無幾的。根據(jù)上述結(jié)果，我們來編制這樣一個(gè)簡(jiǎn)表，希望能給廣大戰(zhàn)友們提供一個(gè)方便。X mg/kg.兔的劑量＝X mg/kg70kg＝還要注意到折算系數(shù)，也就是表中以紅色所示的。一般參考數(shù)據(jù)是LD50。第一、等效劑量系數(shù)折算法換算第二、體表面積法換算第三、系數(shù)折算法與體表面積法的比較第四、系數(shù)折算法的相對(duì)誤差第五、小孩與成人的劑量換算第六、少常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物劑量間的換算第七、不同給藥途徑間的劑量換算第八、LD50與藥效學(xué)劑量間的換算下面我來簡(jiǎn)單說一下這個(gè)問題。下面我們分以下幾點(diǎn)來探討這個(gè)問題。另一種方法就是根據(jù)自己或文獻(xiàn)上有關(guān)急性毒性的數(shù)據(jù)來進(jìn)行估算，以期采用合適的劑量。表如下所示：在這里，我們要看到每種動(dòng)物的體重（包括人），在上表中以藍(lán)色顯示的。X mg/kg.豚鼠的劑量＝X mg/kg70kg＝X mg/kg70kg＝盡管在這個(gè)表中，成人的標(biāo)準(zhǔn)體重設(shè)為70kg。這個(gè)折算系數(shù)實(shí)際上就是已經(jīng)把體重與體表面積的關(guān)系折算過來了的。很多研究指出：基礎(chǔ)代謝率、熱卡、肝腎功能、血藥濃度、血藥濃度_時(shí)間曲線的曲線下面積（AUC）、肌酐（Cr）、Cr清除率、血液循環(huán)等都與體表面積基本成正比，因此按照動(dòng)物體表面積計(jì)算藥物劑量比體重更為合理。此后，按體表面積計(jì)算劑量的概念逐漸為藥理學(xué)家接受，被認(rèn)為尤其適用于不同動(dòng)物之間劑量的換算。大鼠對(duì)血管阻力藥敏感，卻對(duì)強(qiáng)心苷類不敏感，而貓對(duì)強(qiáng)心苷類則很敏感；大鼠對(duì)缺乏維生素及氨基酸敏感，因能自行合成維生素C，故對(duì)缺乏維生素C不敏感，而豚鼠對(duì)缺乏維生素C及變態(tài)反應(yīng)特別敏感。值得一提的是，這個(gè)換算方法只是一個(gè)重要參考而已。于1879年發(fā)表。如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重與此相差比較大，按剛剛我們所講的體型公式計(jì)算，與按折算系數(shù)計(jì)算的結(jié)果，就會(huì)有較大的偏差。體表面積＝體型系數(shù)＊（體重）2/3注意，體表面積是與體重的2/3次方成正比的。哪一種計(jì)算結(jié)果更準(zhǔn)確呢？當(dāng)然是按實(shí)際的體表面積來算。我們?nèi)砸源笫鬄槔齺碛懻撨@個(gè)誤差問題。這兩個(gè)函數(shù)在什么時(shí)候相等呢？　很顯然，就是當(dāng)X＝。令: 按折算系數(shù)計(jì)算的劑量＝A按實(shí)際體表面積計(jì)算的劑量＝B相對(duì)誤差＝（A－B）／B100%=A/B1很顯然，這個(gè)相對(duì)誤差是有正負(fù)的。如果大鼠體重達(dá)300g以上，尤其是達(dá)350g以上的時(shí)候，我們可以選擇用實(shí)際體表面積來算。易知：B＝. 那就是說，在這個(gè)體重范圍內(nèi)的大鼠，劑量打九折就行了。此前，不少戰(zhàn)友對(duì)于劑量到底是按體重算還是按體表面積算，是有過一番爭(zhēng)論的。按折算系數(shù)算出來，劑量是八九不離十的。而如果一定要用實(shí)際體表面積來算，一則相差無幾，二則繁瑣，令人不勝其煩。我們國(guó)人的平均體重是否能達(dá)到70kg？難道我們都能吃得這么好？這恐怕不是太合理。這樣，相當(dāng)于簡(jiǎn)表中的數(shù)字都要乘以60*結(jié)果如下：小鼠：　　　大鼠：　　　豚鼠：　兔： 倍　　貓：　　猴：　狗：。畢竟，臨床才是最重要的。那么小孩的劑量該如何來算呢？實(shí)際上，仍然是沿襲了體表面積的折算法。另有計(jì)算體表面積的經(jīng)驗(yàn)公式如下：體表面積（m2）=身高（cm）+體重(kg)這是較為適合我國(guó)人的公式。如前所述，這種換算的前提是：小孩與成人對(duì)此藥的敏感程度是一致的。在此不再討論。而吸收的程度與發(fā)揮作用的藥量是相關(guān)的。認(rèn)為肌注相當(dāng)于靜脈的80％，皮下相當(dāng)于靜脈的50％。因此，我們可以將上述結(jié)果列于下：對(duì)此簡(jiǎn)表需要說明的是：第一，給藥劑量可參照經(jīng)驗(yàn)，但最好親自實(shí)驗(yàn)。尤其是口服和靜注之間有時(shí)按上述折算給藥時(shí)，血藥濃度相差太大。一般用兔子做實(shí)驗(yàn)。在前面的貼子中，我們討論了常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的劑量換算的問題。這就要我們?nèi)フ业较鄳?yīng)的動(dòng)物的體型系數(shù)。只是有個(gè)預(yù)試過程。如果要給一個(gè)定量的數(shù)字，我覺得取LD5比較好。如何用數(shù)學(xué)的模型或是公式來描述這樣一種“濃度－效應(yīng)關(guān)系”呢？早已有人對(duì)此進(jìn)行了研究。E=+ LDs很顯然，在毒理實(shí)驗(yàn)中，Emax就是死亡率為100％時(shí)的效應(yīng)。 .如果S=5, 。也就是說，藥效學(xué)的最高劑量是否可以估計(jì)為L(zhǎng)D5或者LD1呢？我覺得是可以的。因此，藥效學(xué)的劑量高的可以取到LD50的1／10，甚至1／5。長(zhǎng)毒實(shí)驗(yàn)中規(guī)定低劑量不能有毒性反應(yīng)，中劑量有輕微毒性反應(yīng)，高劑量要有一定的毒性反應(yīng)。那可以這樣說，此藥的LD1肯定是比這個(gè)MTD要大的。從量－效曲線的規(guī)律我們也知道。而泛泛而談，雖能總括一般的規(guī)律，但也許戰(zhàn)友們得不到最貼心、最具實(shí)用價(jià)值的信息。希望本貼能長(zhǎng)期不斷地深入下去。按其用途來分，可分為：藥物：通常就是我們要考察其藥效或機(jī)制的化合物或中草藥提取物。如：高脂飼料中要配以膽固醇、丙基硫氧嘧啶、膽酸鹽、雞蛋黃、豬油等?？梢粤黹_專題討論。如：蛋白電泳中的過硫酸銨，是一種促進(jìn)氧自由基產(chǎn)生的輔助試劑，促進(jìn)凝膠的形成，時(shí)間久了就不能產(chǎn)生自由基，故而一般在一周內(nèi)使用，最多兩周。其實(shí)這二者差別不大。其中， 標(biāo)準(zhǔn)品特指用于生物檢定、抗生素或生化試劑中含量或效價(jià)檢定的基準(zhǔn)物質(zhì)，按效價(jià)單位計(jì)，與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定。通常，我們?cè)诜Q量10mg以下的物質(zhì)時(shí)，是很難準(zhǔn)的。做藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)，液相檢測(cè)時(shí)要注意，要用色譜純?cè)噭?，不然?yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果?；蛘邔?shí)驗(yàn)進(jìn)行中，突然發(fā)現(xiàn)試劑已不可用，則可能導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)的失敗。其中，針晶、柱晶等流動(dòng)性比較好，而磷片狀的、塊狀的則不太好。常溫保存的試劑原料，放在實(shí)驗(yàn)室存放試劑的柜子中即可。一般而言，冷藏的是不會(huì)結(jié)冰的，因?yàn)闇囟纫话闶窃?~4度之間。深低溫保存一般適合于需要在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持活性的物質(zhì)。有的是產(chǎn)生刺激性，如：紅腫、灼痛等一些不良反應(yīng)。第三，要知道如何處理不幸染上這些原料。一些常用的試劑有些學(xué)?；蚩蒲袉挝挥幸粋€(gè)試劑庫(kù)房，可辦好相關(guān)手續(xù)后領(lǐng)取。如有不對(duì)，可再聯(lián)系供應(yīng)商。規(guī)格也是蠻重要的。這是對(duì)大多數(shù)固體試劑而言。但有時(shí)候不能用油，但又要混勻，這時(shí)我們只好加助懸劑或者增溶劑，或者用潛溶劑。一是有些物質(zhì)一加熱就變質(zhì)了，產(chǎn)生了分解產(chǎn)物；二是有些物質(zhì)加熱就失效了，如一些酶或蛋白質(zhì)類的物質(zhì)。google上找到的網(wǎng)頁或是論文都可以。有時(shí)候，我們學(xué)藥理的中可能有些化學(xué)好一點(diǎn)，覺得從結(jié)構(gòu)上來看就知道其溶解性的規(guī)律。第四，我們來談?wù)勁渲圃噭┑某Ｓ萌軇┗蛘叻稚⒔橘|(zhì)。配制水溶性的試劑時(shí)，要注意相關(guān)容器的洗滌、滅菌。當(dāng)然，做液相檢測(cè)時(shí)，要用色譜純。盡管這些毒性遠(yuǎn)不如致癌的試劑毒性大，但也不可忽視。最常用的莫過于磷酸緩沖液（PBS）了。嚴(yán)格按照說明進(jìn)行。第五，我們來談?wù)勁渲圃噭┲泻馄?、量器及其它器具的選擇。衡器一般是天平。天平的量程。要認(rèn)真閱讀說明書來調(diào)平。二是配制時(shí)，除極少數(shù)特殊情況外，一般是從側(cè)面加入試劑原料。固體有的是結(jié)晶狀的，結(jié)晶有多種形態(tài)，像針晶、柱晶、小鱗片狀晶等等。前面四個(gè)都是比較粗略的量器，基本上只作一個(gè)估計(jì)值。如：10ml，25ml，50ml，100ml等等。在今天廣泛使用移液槍的情況下，我們也應(yīng)看到移液管在某些方面的優(yōu)點(diǎn)。有進(jìn)口的和國(guó)產(chǎn)的。注意，玻璃量器均不能以高溫烘烤，以免容量不準(zhǔn)。有人經(jīng)常用玻棒把燒杯攪得嘩啦嘩啦響，以為如此就溶得快，其實(shí)這樣易把燒杯打破。對(duì)于一些要求不是特別高的溶液，可以用PH試紙。這方面，有專門的書可參考。小的有青霉素瓶，又稱西林瓶。像玻璃瓶倒好像有些舍不得。但此法有個(gè)缺點(diǎn)，就是下次用此瓶配其它試劑時(shí)，字跡不易洗掉，有些麻煩。三是濃度的準(zhǔn)確性。二是有些量特別小的試劑（通常是5mg以下），可以直接在其貯存容器里加溶劑。如：冰醋酸在溫度16度以下，是結(jié)成凍塊了，要緩緩加溫后使用。有的試劑是要求配好后要過濾的。一是配好后盡快使用。如果用不同的試劑，結(jié)果出來就不知道是什么引起的差異了。五是試劑用完后，相關(guān)器具要洗滌。這也應(yīng)是一個(gè)良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。考馬斯亮藍(lán)如配制不當(dāng)，即有可能出現(xiàn)藍(lán)色沉淀。后經(jīng)詢問合成此化合物的人員，說在60度以上不穩(wěn)定。一般而言，配制過程中注意操作，配好后置冷藏，短時(shí)間內(nèi)是不會(huì)出現(xiàn)霉菌的。這可以說是用通過簡(jiǎn)單的觀察來判斷試劑有無變質(zhì)。第八，我們來談?wù)動(dòng)卸镜?、危險(xiǎn)的試劑的配制及保存。即使對(duì)于一些致癌物，我們也應(yīng)該膽大心細(xì)地使用。像對(duì)于氯仿這樣的溶劑，我們知道其長(zhǎng)期應(yīng)用可致脂肪肝。如：毒物為揮發(fā)性物質(zhì)，我們可考慮戴上防毒的面具，在有通風(fēng)機(jī)械的地方配制，配好后蓋緊；對(duì)易揚(yáng)起粉塵入肺的物質(zhì)，我們戴口套，并盡可能輕拿輕放；對(duì)于易致癌及有潛在致癌物質(zhì)，可戴一次性手套。在了解上述知識(shí)的基礎(chǔ)之上，我們來講一下配制毒性試劑的注意事項(xiàng)。因?yàn)樵噭┱吹酵獗谏弦院?，每次拿取都要戴一次性手套。如：做PCR的電泳槽，長(zhǎng)期接觸到電泳液，EB等，須固定在一個(gè)范圍內(nèi)，不要到處亂放。此外，我們來略述一下危險(xiǎn)品試劑的配制。這樣我們就會(huì)思索該如何改進(jìn)？如何又快又好。尤其是一些檢測(cè)酶類的試劑。那么，什么樣的情況下，可以改變?cè)噭┑臐舛饶兀恳簿褪钦f，不按書上或文獻(xiàn)中的，自己來改變呢？那前提就是：你必須知道方法的原理。凡此種種，不一而足。我曾經(jīng)改變過考馬斯亮藍(lán)的配方。選擇一種既能染上色，又能使蛋白帶的深淺較好的分出來的一種濃度。但有些不是很常用的試劑確實(shí)一時(shí)找不到。對(duì)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)而言，發(fā)現(xiàn)得越早，對(duì)實(shí)驗(yàn)越有利。而且最好用著名大公司的。但，當(dāng)我們基本確實(shí)用哪種試劑時(shí)，就要跟定。如果可能的話，盡量做到專人專用。又如：PMSF，是用異丙醇配的，且要20度保存，不要想當(dāng)然地冷藏。我們所要做的，就是如何在實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行排查，找到問題的根源。此法就是把實(shí)驗(yàn)中某一個(gè)步驟中的試劑重新配制，或者采用別人配制的相同的試劑，做一下看看實(shí)驗(yàn)結(jié)果如何？此法的前提就是，你對(duì)某一試劑有比較大的懷疑。例如：蛋白電泳染不