【正文】 關器具要洗滌。有些是必須取完后立即洗滌，以免別人或自己在污染的情況下誤用。如：丙烯酰胺溶液，有毒。有些是在一小段落后將所用器具洗滌干凈。有些殘留液體不洗，時間稍隔長一點，就比較難洗了。這是我們應當注意的。在一些實驗室，因有一些人要共用一些器具，尤其要注意這一點。就像吃完飯要洗碗一樣。這也應是一個良好的實驗習慣。第七，我們來談談試劑保存中的常見問題及解決方式。配好的試劑，在保存的過程中，或多或少會出現(xiàn)一些問題。有的稍加處理即可，不影響使用；有的則不能繼續(xù)使用，甚至產(chǎn)生毒性。因此，了解試劑常見的一些可能變質(zhì)的現(xiàn)象，有助于我們掌握一般規(guī)律，并能順利解決實驗中出現(xiàn)的問題。A 物理性質(zhì)的變化最常見的有：產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶、產(chǎn)生絮狀物、顏色變化、黏度變化、產(chǎn)生霉菌、產(chǎn)生氣味產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶：最常見的是一些緩沖液，當溫度比較低的時候，可能有些物質(zhì)是飽和溶液，低溫可使其析出。當恢復至室溫時，即溶解。比如，我有一次配含氯化鋅的多種離子的溶液，打開冰箱發(fā)現(xiàn)有沉淀，置室溫下?lián)u勻后，已澄清，不影響使用?？捡R斯亮藍如配制不當，即有可能出現(xiàn)藍色沉淀。一般來說，酌情調(diào)整其的中乙醇濃度可以避免。產(chǎn)生絮狀物：有些物質(zhì)在低溫下析出成絮狀，一般不影響使用。但要仔細觀察，如絮狀物是其它物質(zhì)，或者是菌絲，則不可用。對于含水用含糖的溶液尤其要注意。顏色變化：這一變化可能是在配制過程中加溫后，過一段時間出現(xiàn)的；也有可能是貯存過程中受光照所引起的；也有可能是溶液中各物質(zhì)相互作用所引起的。一般是顏色變深。如：有一次我配一個新化合物，由于事先不了解，加溫快速溶解，置冰箱后，第二天發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)黃色。后經(jīng)詢問合成此化合物的人員，說在60度以上不穩(wěn)定。也有可能是顏色變淺。如：一些染料溶液。黏度變化：主要是一些高分子物質(zhì)的“溶液”。其實高分子是分散在其中，不是真正的溶解。如：明膠溶液，配制時間過長，有的就會變稀，這可能是明膠的質(zhì)量問題。產(chǎn)生霉菌：常見于含水的，含糖分較高的一些溶液。主要是保存不當所致。一般而言，配制過程中注意操作，配好后置冷藏，短時間內(nèi)是不會出現(xiàn)霉菌的。產(chǎn)生氣味：這主要是可能溶液中的物質(zhì)相互反應產(chǎn)生了一些氣體，或者本身溶解其的中氣體跑了出來，也有的是本身固有的氣味變化。如：產(chǎn)生氨氣氣味、失去醋酸氣味等等。B 化學性質(zhì)的變化如：PH的變化、失去氧化性、失去還原性PH的變化：當懷疑試劑出現(xiàn)問題的時候，我們可以測一下其PH。如不在正常范圍內(nèi)，即可認為已變質(zhì)。失去氧化性：有一次用濃硫酸做蒽酮硫酸法測多糖的含量，發(fā)現(xiàn)配好的試劑沒有反應，沒出現(xiàn)應有的顏色。于是把濃硫酸取一滴滴于報紙上，發(fā)現(xiàn)根本沒有像往常一樣將報紙?zhí)蓟?。固此硫酸已不可用。這可以說是用通過簡單的觀察來判斷試劑有無變質(zhì)。同樣，像雙氧水等一些強氧化劑可通過類似的檢測來判斷。失去還原性：像維生素C 等還原性物質(zhì)，當變質(zhì)時一般有顏色變化。C 生物學性質(zhì)的變化如：酶失活、生物分子降解等這種變化并不是一下就可以看出來的。往往是做實驗中，或者是實驗做完后結(jié)果不如意時，才會考慮可能是試劑出了問題。關于這一問題，我們將在“如何追溯實驗中試劑的問題”章節(jié)中具體探討。在此不作贅述。如何解決試劑保存中出現(xiàn)的問題呢？一般而言，除少數(shù)不影響使用的現(xiàn)象外，試劑都得重配。第八，我們來談談有毒的、危險的試劑的配制及保存。首先，我們來了解一下毒性的基本常識。按其作用時間長短，可分為：急性毒性和長期毒性按其作用的分布，可分為：局部毒性和全身毒性按其作用部位及機制，可分為：臟器毒性：如：氯仿有肝毒性；SDS粉末可沉積于肺；等等血液毒性：如：苯有血液毒性神經(jīng)毒性：如：丙烯酰胺有神經(jīng)毒致癌：如：溴乙錠可致癌，烏拉坦可致癌。其它毒性：如：過敏、皮膚刺激等對我們而言，了解其毒性機制是很重要的。這樣，我們就知道如何防護，也知道在萬一沾上有毒試劑時該如何處理。對于局部毒性和一些臟器的慢性毒性，我們往往是不會特別地擔心。但對于導致血液、神經(jīng)系統(tǒng)的毒性，以及致癌的毒性，卻是我們感到最恐怖的。事實上，只要我們做到了安全防護，基本上也沒有多大問題。即使對于一些致癌物，我們也應該膽大心細地使用。我們的身體也不是那么脆弱的，還有免疫系統(tǒng)在起作用。但，做好必要的防護工作是最重要的。下面我們來具體談一談如何在配制毒性試劑過程中防護自己。１　要了解試劑的毒性機理。這是防護的一個基本前提。一般標明有毒性的物質(zhì)，其機理大多清楚。這樣，我們對于毒性試劑心里有個底。像對于氯仿這樣的溶劑，我們知道其長期應用可致脂肪肝。但平常用的時候偶爾灑一點到皮膚上，我們清洗即可，也就沒有多大的擔心。雙氧水，濃度不高的話，萬一有一點弄到皮膚上也不是很擔心，只是可能會脫掉一點皮。但不至于有生命之虞。相反，如果滴上一滴致癌的試劑，那我們就會感到很恐怖了。因此，了解其毒性機理，我們就會面對試劑心中有數(shù)，不至于太不重視，也不至于過分擔心。２　要了解常用的毒性物質(zhì)的性狀及預防措施針對不同毒物，我們有不同的措施。如：毒物為揮發(fā)性物質(zhì)，我們可考慮戴上防毒的面具，在有通風機械的地方配制，配好后蓋緊；對易揚起粉塵入肺的物質(zhì)，我們戴口套，并盡可能輕拿輕放；對于易致癌及有潛在致癌物質(zhì)，可戴一次性手套。３　了解中毒的癥狀不怕一萬，只怕萬一。我們常常不可能百分之百不接觸到有毒物質(zhì)。了解中毒的一些癥狀是很有必要的。如：有的有紅腫、疼痛、眼刺激性、特異性惡臭等。接觸到皮膚的話，一般情況下我們是用大量水清洗。嚴重的話，要去醫(yī)務室或醫(yī)院處理。在了解上述知識的基礎之上，我們來講一下配制毒性試劑的注意事項。第一，毒性試劑的容器要專用，并有醒目的標志。很多毒性試劑，我們用高分子材料的瓶子，除非一定要用玻璃瓶。因為玻璃瓶總是被人重復利用，擔心有人在不知情的情況下誤用裝過有毒試劑的瓶子。通常標簽我們用紅色的，標明“有毒！”，必要時畫上毒性的符號。第二，配制毒性試劑的防護。一是一般要戴一次性手套，必要時戴口罩及防毒面具。二是，試劑不要接觸到容器的外壁。因為試劑沾到外壁上以后，每次拿取都要戴一次性手套。這樣，有可能不小心用沾了有毒試劑的一次性手套接觸了其它瓶子，擴大了污染的范圍。我們的做法通常是，如果外壁有沾染，立即更換一個瓶子。這樣，就可以直接用手拿瓶壁外，而不擔心。擰開蓋子時，蓋子一般宜朝上放置，這樣也可減少污染范圍。三是配制完畢，污染物及時投放到指定地點。包括沾有毒性試劑的瓶子，手套，及其它一次性使用器具等。四是長期接觸有毒試劑的器具要放在專用的范圍內(nèi)。如：做PCR的電泳槽，長期接觸到電泳液，EB等，須固定在一個范圍內(nèi)，不要到處亂放。這樣就能盡可能地減少污染。第三，配制毒性試劑要按程序來配，注意與其它試劑反應產(chǎn)生致癌物的試劑。如：PCR中常用到的試劑焦碳酸二乙酯（DEPC），可與氨反應而產(chǎn)生致癌物。但通常我們在用其浸泡Tip頭后，使其揮發(fā)掉。DEPC能與胺和巰基反應,因而含Tris和DTT的試劑不能用DEPC處理。這里，實際上所說的，是一些潛在致癌物。要注意在使用過程中的配伍禁忌。此外，我們來略述一下危險品試劑的配制。這里所指危險品，主要是指在一定條件下可發(fā)生爆炸的物質(zhì)。如：乙醚、苦味酸、苯胺等。對于危險品，我們一般就是低溫、避光、在規(guī)定情況下使用。注意激發(fā)其爆炸的條件。第九，我們來談談配制試劑的優(yōu)化。一般而言，我們總是會嚴格按照參考書、文獻或者是試劑說明書上的步驟來配制試劑。但有時候，這些步驟讓我們覺得有些繁瑣。這樣我們就會思索該如何改進？如何又快又好。要達到這樣一個看似高于一般實驗的標準，需要些什么樣的要求呢？首先，必須是你對試劑的原理及可能出現(xiàn)的問題有全面的了解。其次，實驗中有必須要改進的因素存在。第三，要有小量的試配的經(jīng)驗。改進一個方法不是一下就能做得到的，而是要不斷、反復地摸索。關于配制試劑的優(yōu)化方法，主要有以下幾種：１　配混合試劑有時候，我們用試劑作檢測時，要配幾種試劑，而要不斷地把幾種試劑順序地加到樣本之中。每次加的時候，因為一次誤差，可能各種試劑的比例有差異。尤其是一些檢測酶類的試劑。但如果我們知其原理，就可以配成混合液，一并加入。比如，做酶的反應方面的實驗，底物及其緩沖液可能是好幾種試劑，一般可混合后一并加入，然后再加酶。這樣一是可以減少誤差，二是節(jié)省時間。２　適當改變濃度試劑說明書上，以及做某一具體實驗的方法步驟上，一般都會寫明試劑要配成什么樣的濃度。但這并不是說，完全不可以變化的。有時候，因為實驗條件的不同，完全按書上的方法去配成試劑，甚至做不出實驗結(jié)果。那么，什么樣的情況下，可以改變試劑的濃度呢？也就是說，不按書上或文獻中的，自己來改變呢？那前提就是：你必須知道方法的原理。比如：做蛋白電泳，用考馬斯亮藍染色時，有時我們會發(fā)現(xiàn)沒染上。這時可以考慮增加考馬的濃度，或者增加蛋白的上樣量。又如：給動物灌胃時，我們知道每種動物的容量是有一定的。而我們的給藥量是不同的。這樣，就要根據(jù)不同的情況來調(diào)整濃度，不要硬搬書上或文獻中的濃度。再者，像考馬測蛋白含量的時候，只要考馬與蛋白量的比例是一定就可以了。在試劑不很足的情況下，可以把試劑和標本蛋白量都減至２／３，甚至一半，同樣可以測出蛋白含量，只要濃度在它的檢測范圍內(nèi)。凡此種種，不一而足。因此，在對實驗原理及步驟很熟悉的情況下，實驗中可不拘泥于書本，完全可以自行掌握。３　適當省略步驟對于一些濃度要求不精確的溶液，配制時可酌情省去一些步驟。這個因人而異。我想在實驗中是有不少這樣的情況的。４　改進試劑的配方其前提是對實驗原理非常了解。我曾經(jīng)改變過考馬斯亮藍的配方。剛開始做蛋白電泳時，按《分子克隆》上的配方來配，老是染不上色。很納悶。摸索一番之后，發(fā)現(xiàn)有可能是考馬的問題。因蛋白上樣量已經(jīng)夠高了，不能再增加了。于是自己動手來改考馬的配方。發(fā)現(xiàn)，只要增加考馬液中的甲醇的比例，就容易染上色，且牢固。于是，在原配方的基礎上，我配制了幾種不同的考馬液，試了幾塊膠。選擇一種既能染上色，又能使蛋白帶的深淺較好的分出來的一種濃度。這就成了我實驗中的最佳濃度。很多時候，各個實驗室的條件不一樣，所用試劑就得有所改進。書本上的只是一個大概的標準。要靈活變化。５　尋找代用品有時實驗中用到的東東不一定能及時找得到。有的可能通過別人贈送，有的可以郵寄。但有些不是很常用的試劑確實一時找不到。那么，是否根據(jù)實驗的原理用別的試劑代用一下呢？我覺得是可以考慮的。但前提是，基本不影響實驗效果。這需要實驗做得很熟練，且對某具體實驗步驟、原理十分了解的情況下方可如此。一般情況下不推薦此法。第十，我們來談談如何追溯實驗中試劑導致的問題。有時候，試劑出了問題，并不是一下就能看出來的。甚至只有當實驗結(jié)果出出異常的時候，我們才會想起可能是試劑有問題。對于動物實驗而言，發(fā)現(xiàn)得越早，對實驗越有利。如果等到實驗已經(jīng)做完才發(fā)現(xiàn)，往往于事無補。動物實驗有時候是比較難以重復的。我們所能做的就是在一次實驗中，盡量使用同一批次的試劑，對所有動物齊同對比。這樣才能得到可靠的信息。首先，我們來談談如何避免因試劑原因而在實驗中出現(xiàn)問題。一是要保證試劑原料的可靠。該用進口的一定要用進口的。而且最好用著名大公司的。不要因為節(jié)省經(jīng)費而購一些難以達到要求的國產(chǎn)貨。如：蛋白電泳試劑中的丙烯酰胺、甲叉，原裝進口或進口分裝的皆可，不建議國產(chǎn)的。有些試劑國產(chǎn)的是達不到要求的。當然，并不是要求所有試劑都不用國產(chǎn)的。這主要是要看實驗的要求，以及國產(chǎn)試劑達到的質(zhì)量標準。二是不要頻繁更換試劑品牌或者廠家。在摸索階段，我們可能想各種的試劑都試一下效果，這可以理解。但，當我們基本確實用哪種試劑時，就要跟定。尤其在一個大的實驗階段，為保證實驗中的齊同對比，最好一次購進所需試劑，不要中途少了再趕。因為，不但是不同廠家的試劑有不同，同一廠家的不同批次都有可能不同。對于生物方面的實驗，尤其要注意。三是配制試劑過程中盡量避免污染。一方面是微生物的污染，另一方面是其它雜質(zhì)的污染。要求高的試劑一般是專瓶專用。更換一批試劑時，上一次的一定要處理干凈。如果可能的話，盡量做到專人專用。如有共用試劑，要詳細告知別人，或是從別人那得到詳細信息。總之，要對試劑非常放心。四是配好試劑按規(guī)定要求保存。切忌想當然。如：苦味酸可以配成給動物標記的苦味酸液，也可以配制Bouin’s液。二者看上去都是一樣的顏色。要區(qū)分開來，寫好標識。又如：PMSF，是用異丙醇配的，且要20度保存，不要想當然地冷藏。五是注意試劑使用的操作規(guī)程。一般實驗室都會對常用試劑的使用寫了同一個ＳＯＰ。有些試劑有詳細的說明。我想大家一般不會弄錯。在用之前，詳細地查詢是最基本的保證。但是，即便如此小心，實驗還是難以避免出現(xiàn)一些問題。的確，因為動物實驗屬生物方面，生物的變異度太大，出現(xiàn)一些問題在所難免。我們所要做的，就是如何在實驗中進行排查，找到問題的根源。要查找實驗中的問題，方法有如下幾種：一是常規(guī)檢查法。此法就是把實驗中所用的試劑最基本的性狀，及簡單化學性質(zhì)等檢查一遍。比如：本來在室溫下應為膠凍狀的試劑是不是已經(jīng)成液體了？PH值是否在規(guī)定的范圍內(nèi)？肉眼觀察試劑是否澄清？是否變色？所用量取器具是否干凈？是否用了已經(jīng)過期的配好的試劑？等等。這樣的檢查有時能很快查出實驗失敗的原因來。不過，很多是一下查不出來的。這就需要我們運用一些技巧或手段來逐步排查。二是替換法。此法就是把實驗中某一個步驟中的試劑重新配制，或者采用別人配制的相同的試劑，做一下看看實驗結(jié)果如何？此法的前提就是，你對某一試劑有比較大的懷疑。比如：在做蛋白電泳時，假如你懷疑細胞裂解液有問題。可以重新配制，或用別人的試試。這樣，很可能從中發(fā)現(xiàn)一些信息。這是我們排查實驗失敗原因的最常用的手段。三是強化法。所謂強化法就是把其中某一因素放大，看看是不是由于試劑量不足或者標本量不夠所引起的。這樣，可突出某一度劑的因素，從而暴露試劑的問題，也有可能藉此將此因素排除。例如：蛋白電泳染不上色。我想看看是不是由于樣品不夠的原因。這時我加大樣品量。如何平時是上５０ug,那么排查實驗可上200,300ug甚至更多。如果加大后仍然不上色，則有可能是染色液的問題，或者有膠面受到了污染，至少可排除不是加樣量過少的原因?？稍诖嘶A上進一步來查明原因。四是歸繆法。有時候，在實驗中會