【正文】 熱時(shí)要墊石棉網(wǎng)，加磁力攪拌器的攪拌子的大小要適宜，傾倒時(shí)不要漏液。漏斗的使用 有些試劑配制后要求過濾方可作用。PH計(jì)的使用 有些對(duì)PH 要求比較精確的溶液是用要PH計(jì)來測(cè)定的。一是配制試劑的容器的選擇。有時(shí)也可用一些高分子材料的瓶子裝試劑。有人喜歡用記號(hào)筆寫上標(biāo)簽。這幾種方法可酌情選擇。切忌不要用量杯。如：有些試劑在配制過程中要加熱至沸騰，溶劑損失不少，要待其冷卻至室溫再加溶劑補(bǔ)足。如：PMSF，要用異丙醇來配制。有的試劑是極易氧化的，通常要加抗氧劑。以移液管取液時(shí)，注意要洗滌，多余的液體不要返回瓶?jī)?nèi)，而應(yīng)放掉。不然，實(shí)驗(yàn)出了問題就虧大了。這是我們應(yīng)當(dāng)注意的。A 物理性質(zhì)的變化最常見的有：產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶、產(chǎn)生絮狀物、顏色變化、黏度變化、產(chǎn)生霉菌、產(chǎn)生氣味產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶：最常見的是一些緩沖液，當(dāng)溫度比較低的時(shí)候，可能有些物質(zhì)是飽和溶液，低溫可使其析出。顏色變化：這一變化可能是在配制過程中加溫后，過一段時(shí)間出現(xiàn)的；也有可能是貯存過程中受光照所引起的；也有可能是溶液中各物質(zhì)相互作用所引起的。如：明膠溶液，配制時(shí)間過長(zhǎng)，有的就會(huì)變稀，這可能是明膠的質(zhì)量問題。失去氧化性：有一次用濃硫酸做蒽酮硫酸法測(cè)多糖的含量，發(fā)現(xiàn)配好的試劑沒有反應(yīng)，沒出現(xiàn)應(yīng)有的顏色。關(guān)于這一問題，我們將在“如何追溯實(shí)驗(yàn)中試劑的問題”章節(jié)中具體探討。對(duì)于局部毒性和一些臟器的慢性毒性，我們往往是不會(huì)特別地?fù)?dān)心。這是防護(hù)的一個(gè)基本前提。因此，了解其毒性機(jī)理，我們就會(huì)面對(duì)試劑心中有數(shù)，不至于太不重視，也不至于過分擔(dān)心。如：有的有紅腫、疼痛、眼刺激性、特異性惡臭等。第二，配制毒性試劑的防護(hù)。三是配制完畢，污染物及時(shí)投放到指定地點(diǎn)。DEPC能與胺和巰基反應(yīng),因而含Tris和DTT的試劑不能用DEPC處理。第九，我們來談?wù)勁渲圃噭┑膬?yōu)化。關(guān)于配制試劑的優(yōu)化方法，主要有以下幾種：１　配混合試劑試劑說明書上，以及做某一具體實(shí)驗(yàn)的方法步驟上，一般都會(huì)寫明試劑要配成什么樣的濃度。這樣，就要根據(jù)不同的情況來調(diào)整濃度，不要硬搬書上或文獻(xiàn)中的濃度。我想在實(shí)驗(yàn)中是有不少這樣的情況的。于是自己動(dòng)手來改考馬的配方。５　尋找代用品第十，我們來談?wù)勅绾巫匪輰?shí)驗(yàn)中試劑導(dǎo)致的問題。首先，我們來談?wù)勅绾伪苊庖蛟噭┰蚨趯?shí)驗(yàn)中出現(xiàn)問題。這主要是要看實(shí)驗(yàn)的要求，以及國(guó)產(chǎn)試劑達(dá)到的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。一方面是微生物的污染，另一方面是其它雜質(zhì)的污染。如：苦味酸可以配成給動(dòng)物標(biāo)記的苦味酸液，也可以配制Bouin’s液。在用之前，詳細(xì)地查詢是最基本的保證。不過，很多是一下查不出來的。三是強(qiáng)化法?？稍诖嘶A(chǔ)上進(jìn)一步來查明原因。如何平時(shí)是上５０ug,那么排查實(shí)驗(yàn)可上200,300ug甚至更多。這樣，很可能從中發(fā)現(xiàn)一些信息。比如：本來在室溫下應(yīng)為膠凍狀的試劑是不是已經(jīng)成液體了？PH值是否在規(guī)定的范圍內(nèi)？肉眼觀察試劑是否澄清？是否變色？所用量取器具是否干凈？是否用了已經(jīng)過期的配好的試劑？等等。有些試劑有詳細(xì)的說明。四是配好試劑按規(guī)定要求保存。對(duì)于生物方面的實(shí)驗(yàn)，尤其要注意。有些試劑國(guó)產(chǎn)的是達(dá)不到要求的。我們所能做的就是在一次實(shí)驗(yàn)中，盡量使用同一批次的試劑，對(duì)所有動(dòng)物齊同對(duì)比。這需要實(shí)驗(yàn)做得很熟練，且對(duì)某具體實(shí)驗(yàn)步驟、原理十分了解的情況下方可如此。書本上的只是一個(gè)大概的標(biāo)準(zhǔn)。摸索一番之后，發(fā)現(xiàn)有可能是考馬的問題。對(duì)于一些濃度要求不精確的溶液，配制時(shí)可酌情省去一些步驟。又如：給動(dòng)物灌胃時(shí)，我們知道每種動(dòng)物的容量是有一定的。這樣一是可以減少誤差，二是節(jié)省時(shí)間。第三，要有小量的試配的經(jīng)驗(yàn)。對(duì)于危險(xiǎn)品，我們一般就是低溫、避光、在規(guī)定情況下使用。如：PCR中常用到的試劑焦碳酸二乙酯（DEPC），可與氨反應(yīng)而產(chǎn)生致癌物。這樣，就可以直接用手拿瓶壁外，而不擔(dān)心。因?yàn)椴Ａ靠偸潜蝗酥貜?fù)利用，擔(dān)心有人在不知情的情況下誤用裝過有毒試劑的瓶子。我們常常不可能百分之百不接觸到有毒物質(zhì)。但不至于有生命之虞。下面我們來具體談一談如何在配制毒性試劑過程中防護(hù)自己。其它毒性：如：過敏、皮膚刺激等對(duì)我們而言，了解其毒性機(jī)制是很重要的。C 生物學(xué)性質(zhì)的變化如：酶失活、生物分子降解等這種變化并不是一下就可以看出來的。B 化學(xué)性質(zhì)的變化如：PH的變化、失去氧化性、失去還原性PH的變化：當(dāng)懷疑試劑出現(xiàn)問題的時(shí)候，我們可以測(cè)一下其PH。黏度變化：主要是一些高分子物質(zhì)的“溶液”。但要仔細(xì)觀察，如絮狀物是其它物質(zhì)，或者是菌絲，則不可用。有的稍加處理即可，不影響使用；有的則不能繼續(xù)使用，甚至產(chǎn)生毒性。有些是在一小段落后將所用器具洗滌干凈。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，做同一類實(shí)驗(yàn)時(shí)，我們通常會(huì)共用一些試劑。二是要注意反復(fù)取用試劑時(shí)，不要污染。試制配好后大多數(shù)是要求冷藏的，且盡快使用?？蛇x擇黑紙或者黑塑料來包裹。不然，一打開蓋，試劑粉末就損失掉了。像配對(duì)照品溶液，一般是用容量瓶，而且要選合適的規(guī)格。也可以在醫(yī)用膠布上寫上字，貼上去。二是標(biāo)簽。酌情使用。既已在前面有所述及，這里關(guān)于保存就不詳述了。多以玻棒蘸取。二是要注意是否加溫。C 其它器具的使用燒杯的使用 在配制試劑時(shí)通常要用到燒杯。多用于液相的進(jìn)樣，蛋白電泳的進(jìn)樣。尤其在一些微量溶液的吸取，在需要嚴(yán)格避免污染的一些實(shí)驗(yàn)中，起到了不可替代的作用。移液管是比較精確的。根據(jù)情況合理選擇。而鱗狀的、顆粒狀的要注意小心稱量。四是稱量剩余的固體及不小心灑落的液體要清除干凈。要細(xì)心、耐心地調(diào)好。當(dāng)然，小于其最小量程是稱不出來的。普通天平一般用于粗略的稱量，大家都很熟悉；扭力天平也使用簡(jiǎn)單；光電分析天平現(xiàn)在用得較少。在配制過程中，要使試劑符合我們的要求，還要用到如：玻棒、磁力攪拌器、PH試紙、分液漏斗、濾紙等器具。二是要準(zhǔn)確測(cè)量PH值。前面述及的STZ，必須在PH4～，故而要用緩沖液配制。有些試劑用一定濃度的乙醇來配效果比較好。做PCR時(shí)，用氯仿除蛋白。這類玻璃容器一般都是用重鉻酸液浸泡，再洗滌。水，是用得最廣泛的溶劑。然而，實(shí)際卻基本不溶?？纯慈芙舛热绾?。但是，有些試劑我們并不知道。DMSO號(hào)稱萬能溶劑。又可分為脂溶性的親水性兩大類。但又比實(shí)際用量要多出一些，因多次取樣后會(huì)損失一些。尤其是一些生化試劑，要注意是否過期。二是由試劑銷售人員送貨上門的。第四，要知道這些物質(zhì)使用后的排放處理方式。有的是致癌，這是我們感到最為擔(dān)心的。而固體一般的降解是比較慢的。普通冷凍一般是指置于0度下。再者，要注意，級(jí)別不同的試劑要分開來。嚴(yán)格按要求保存。固體相對(duì)比較好保存。第二，我們來談?wù)勗噭┰系馁A存方式。通常有寫到化學(xué)純、分析純、色譜純、純度達(dá)到多少？含標(biāo)示物多少？等等。稱青霉素為對(duì)照品的、標(biāo)準(zhǔn)品的，都有。而抗生素類（注意，不是合成抗菌藥）的基準(zhǔn)物質(zhì)則稱為標(biāo)準(zhǔn)品。一個(gè)月以內(nèi)的中效型：許多試劑在配好后，如果能低溫保存，能用一個(gè)月以上。已配好的顯色劑，通常也是較短時(shí)間內(nèi)用完。5％CMC－Na液、DMSO液、增溶劑泊洛沙姆（與藥物混勻后再加入溶劑中）保存標(biāo)本的試劑：如：10％福爾馬林、中性福爾馬林、4％多聚甲醛、Bouin39。制劑有的要進(jìn)行提取，有的可直接用。試劑有已配好的即用型試劑和需要配制的試劑。下面，我們來討論在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的試劑的配制的問題。附：由于上面的公式有點(diǎn)看不清。但不能忽略的一點(diǎn)是，沒有死亡不能就推定沒有毒性。多數(shù)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)的劑量在10～100mg/kg。我們通常給的劑量大概是LD50的1／50～1／20之間。劑量就給到LD1的樣子。 當(dāng)S6時(shí)，藥效是隨血藥濃度呈突進(jìn)式的；而當(dāng)S介于二者之間時(shí)，藥效是呈過渡式的。如此，我們來看，當(dāng)劑量為L(zhǎng)D5時(shí)，LD5與LD50之間的關(guān)系如何呢？毒理效應(yīng)可以看作是一種特殊的藥理效應(yīng)。下面，我們就運(yùn)用藥理學(xué)與數(shù)學(xué)的知識(shí)來探討這個(gè)問題。那么，我們?nèi)绾蝸砉烙?jì)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)的劑量呢？在此，我提出一個(gè)自己的想法。在急毒中，我們可以得到一個(gè)LD50，或者是最大耐受量（MTD）。那么，對(duì)于這樣一些在這個(gè)表中無法找到折算系數(shù)的動(dòng)物，我們?cè)鯓觼碚鬯闼鼈兣c人或其它動(dòng)物的等效劑量呢？對(duì)此，很多人會(huì)感到茫然。即用于人體多少面積涂多少藥，動(dòng)物也是多少面積涂多少藥。尤其是靜注。可能與實(shí)際會(huì)有較大出入。估計(jì)為25％，有點(diǎn)偏于保守，本人傾向于估計(jì)為30％。我們談到不同給藥途徑之間的換算，就是要用到絕對(duì)生物利用度。大多數(shù)是我們?cè)趯?shí)踐中根據(jù)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出來的。本人認(rèn)為，減至等效劑量的3/4～4/5較為適宜。不再列出。按經(jīng)驗(yàn)公式：小兒體表面積＝(４＊體重（kg）+7) /90＋體重例如：小孩重８kg，折算劑量＝（４＊８＋７／９０）／*成人劑量＝此方亦非常簡(jiǎn)便，可操作性強(qiáng)。無論高矮、無論胖瘦，一律是用　XX mg/天　這樣的劑量。同理，按人體重50kg計(jì)算，簡(jiǎn)表中數(shù)字乘以50*小鼠：　　　　大鼠：　　　豚鼠：　兔：　　貓：　　猴：　狗：此結(jié)果與大家共探討。如果為60kg。多一句很笨笨的話：有人會(huì)問，那我要算大、小鼠之間的劑量比呢，要算大鼠和豚鼠的呢？在鼠和兔的呢？這就很簡(jiǎn)單了。除了這些誤差之外，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中常有不少人為誤差。劑量為八點(diǎn)七折。那么，如果我們真的一定要很嚴(yán)謹(jǐn)，堅(jiān)持要按實(shí)際體表面積給藥的話，我們?nèi)绾慰焖佟⒑?jiǎn)便地算出劑量呢？其實(shí)很簡(jiǎn)單，我們可以根據(jù)上述理論的結(jié)果來進(jìn)行修正。這樣，我們按折算系數(shù)算出來的劑量，其相對(duì)誤差不會(huì)超過10%.基本上能接受。Y３＝／(X)2/31=(X)1/31現(xiàn)在我們得到了這樣一個(gè)簡(jiǎn)單的函數(shù)關(guān)系式。常常選用的是180~220g的大鼠。按折算系數(shù)計(jì)算得出的Xkg大鼠的用藥量為Y1。那么，二者的誤差有多大？我們?cè)撛趺礃诱{(diào)整？下面我們就談一談兩種計(jì)算等效劑量方法的誤差問題。這就是偏差的來源。為什么說，當(dāng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重不在上述標(biāo)準(zhǔn)體重的附近的話，按折算系數(shù)算出來的劑量就不那么準(zhǔn)了呢？這是因?yàn)?，我們用這個(gè)折算系數(shù)，只是一個(gè)點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的關(guān)系。從上述解析也可以看出，我們完全可以信任第一個(gè)表中所列出的折算系數(shù)，當(dāng)然，也完全可以信任后面我編制的那個(gè)簡(jiǎn)表。如：一個(gè)70kg的人與一只200g的大鼠的體表面積。下面我再介紹一下體型系數(shù)。而實(shí)際上，我們都是一半?yún)⒖嫉刃┝浚话肟孔约旱拿?。在上述的折算關(guān)系中，我們是沒有考慮到種屬差異的。附：早在十九世紀(jì)末年，生理學(xué)家Voit 氏等發(fā)現(xiàn)雖然不同種類的動(dòng)物每kg體重單位時(shí)間內(nèi)的散熱量相差懸殊，但都如折算成每m2體表面積的散熱量，則基本一致。按體表面積來算，那就是要算于它們單位體重所占的體表面積的比值，也就相當(dāng)于它們的劑量比。見下表：X mg/kg.猴的劑量＝X mg/kg70kg＝注意體重的單位要化成一致。請(qǐng)注意最后一行，這個(gè)就是我們通常用到的。這個(gè)我們?cè)倭眍}討論。有時(shí)有現(xiàn)成的，可直接用。這個(gè)問題對(duì)學(xué)習(xí)藥理的戰(zhàn)友來講，可能是非常熟悉了。這樣，我們就得進(jìn)行換算。在其附錄中有一個(gè)表，列出了人和動(dòng)物間按體表面積折算的等效劑量比值?！∪纾喝说呐R床劑量為　X mg/kg ,　換算成大鼠的劑量：大鼠的劑量＝X mg/kg70kg＝X mg/kg70kg＝小鼠的劑量＝X mg/kg70kg＝X mg/kg70kg＝如：某藥。很多人誤認(rèn)為這是按體重來算劑量，不準(zhǔn)，提出要按體表面積來算。經(jīng)研究才知，是與體表面積基本成正比的。這種辦法行之于同種動(dòng)物的不同個(gè)體時(shí)，問題似乎不大；但用于不同種類動(dòng)物時(shí)，常常會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重偏小或偏大，以致無法完成實(shí)驗(yàn)。例如：犬無汗腺，對(duì)發(fā)汗藥不敏感，而對(duì)流涎藥比較敏感；大鼠無膽囊，對(duì)利膽藥及有明顯肝腸循環(huán)的藥物與其他動(dòng)物差別較大；鼠和兔對(duì)催吐藥不敏感，而犬貓則較為敏感；嗎啡對(duì)一般動(dòng)物有抑制作用，但卻對(duì)貓引起興奮。如：有的人做實(shí)驗(yàn)相當(dāng)然地自己隨意地設(shè)置10mg/kg ,20mg/kg, 40mg/kg.　好像是方便自己配藥，而不是根據(jù)科學(xué)的道理來設(shè)置。不少動(dòng)物（包括人）~。事實(shí)上，那個(gè)表就是根據(jù)體型系數(shù)算出來的。這個(gè)偏差來源于體型系數(shù)的公式。設(shè)人的劑量為　X mg/kg，　體重70kg.體重為150g時(shí)：按折算系數(shù)算：大鼠的劑量＝ X mg/kg , 150g大鼠的總給藥量為：＊ X mg/kg＝ mg/kg按體表面積計(jì)算：大鼠的體表面積＝＊（）2/3=人的體表面積＝體表面積比（大鼠／人）＝／=180g大鼠的總給藥量為：X mg/kg＊70＊= X mg/kg體重為180g時(shí)：按折算系數(shù)算：大鼠的劑量＝ X mg/kg , 180g大鼠的總給藥量為：＊ X mg/kg＝ X mg/kg按體表面積計(jì)算：大鼠的體表面積＝＊（）2/3=人的體表面積＝體表面積比（大鼠／人）＝／=180g大鼠的總給藥量為：X mg/kg＊70＊= X mg/kg體重為250g時(shí)：按折算系數(shù)算：大鼠的劑量＝ X mg/kg ,250g大鼠的總給藥量為：＊ X mg/kg＝ X mg/kg按體表面積計(jì)算：大鼠的體表面積＝＊（）2/3=人的體表面積＝體表面積比（大鼠／人）＝／=250g大鼠的總給藥量為：X mg/kg＊70＊= X mg/kg體重為300g時(shí)：按折算系數(shù)算：大鼠的劑量＝ X mg/kg , 300g大鼠的總給藥量為：＊ X mg/kg＝ X mg/kg按體表面積計(jì)算：大鼠的體表面積＝＊（）2/3=人的體表面積＝體表面積比（大鼠／人）＝／=250g大鼠的總給藥量為：X mg/kg＊70＊= X mg/kg體重為350g時(shí)：按折算系數(shù)算：大鼠的劑量＝ X mg/kg , 350g大鼠的總給藥量為：＊ X mg/kg＝ X mg/kg按體表面積計(jì)算：大鼠的體表面積＝＊（）2/3=人的體表面積＝體表面積比（大鼠／人）＝／=250g大鼠的總給藥量為：X mg/kg＊70＊= X mg/kg從上述計(jì)算我們是不是看出了一點(diǎn)規(guī)律？那就是，當(dāng)大鼠體重小于200g時(shí)，按折算系數(shù)算出來的結(jié)果比按體表面積的結(jié)果要偏?。欢笫篌w重大于200g時(shí)，