【文章內容簡介】 應關系”。如何用數學的模型或是公式來描述這樣一種“濃度－效應關系”呢？早已有人對此進行了研究。:E=+ Cs這就是著名的Hill方程。式中，Emax表示藥物的最大效應；EC50表示達到50％的Emax時的藥物的濃度；C表示藥物的濃度；上標S是表示濃度－效應關系曲線形狀的參數。毒理效應可以看作是一種特殊的藥理效應。因此，我們將這一公式移植到急毒實驗中來進行一些應用。對于一定大小的動物而言，一定的劑量與一定的血藥濃度基本上成正比的。所以，我們就以劑理來代替濃度進行計算。上式中，以LD50代替EC50，以LD代替C，則得：E=+ LDs很顯然，在毒理實驗中，Emax就是死亡率為100％時的效應。相應地，LD5則為死亡率為5％時的效應；LD1則為死亡率為1％時的效應；LD50則為死亡率為50％時的效應。我想對此大家應無異議。如此，我們來看，當劑量為LD5時，LD5與LD50之間的關系如何呢？E5=5％Emax =+ LD5s得：= LD5s/LDs50+ LD5s化簡，得：LD5s==1/19X LDs50同樣地, LD1s =1/99X LDs50如果S=1, 則LD5大約為LD50的1/20。 LD1則為LD50的1/100.如果S=2, 。 .如果S=3, 。 .如果S=4, 。 .如果S=5, 。 .如果S=6, 。 .S是決定藥效隨血藥濃度增加而變化的趨勢的程度的參數。 當S6時，藥效是隨血藥濃度呈突進式的；而當S介于二者之間時，藥效是呈過渡式的。很多藥物的S值在2以下，一部分在2～5之間，大于6的極少。也就是說，大多數藥物的效應隨血藥濃度增加是漸進式的，或近于漸進式的。那么，根據以上的計算結果，我們是否可以初步地得到一個結論呢？那就是說，當我們知道一個化合物的LD50以后，我們可以得到一點關于它的LD5或LD1的信息。我們希望在做藥效學實驗時，動物的死亡率不要超過5％，最好不要超過1％。也就是說，藥效學的最高劑量是否可以估計為LD5或者LD1呢？我覺得是可以的。而且，我更趨向于保守地估計。那就設為1％吧。劑量就給到LD1的樣子。同理，雖然我們知道有些藥物的S值是大于2的，這樣量－效曲線比較陡，算出來的LD1與LD50接近了許多，但為保守起見，我們仍取比較小的劑量作為藥效學的實驗劑量。這樣我們就得到了藥效學劑量的一個最保守的估算值：大約取LD50的1／100。但，不可否認的是，這是一個相當保守的估計。如果藥物的S值是大于2的，則這個劑量可能要高好幾倍。因此，藥效學的劑量高的可以取到LD50的1／10，甚至1／5。因此，這些是需要我們去摸索的。因為，畢竟毒理反應和藥理效應的機理可能不同，其量－效關系的變化規(guī)律可能不一樣。我們通常給的劑量大概是LD50的1／50～1／20之間。在新藥研究指南中，并沒有規(guī)定劑量取LD50的多少分之一。而是給出了一些基本的原則。只要遵循了這些原則就可以了。長毒實驗中規(guī)定低劑量不能有毒性反應，中劑量有輕微毒性反應，高劑量要有一定的毒性反應。是否可以考慮將LD50的1／100作為長毒試驗的低劑量？我覺得上式有一定的參考意義。對化學合成藥而言，劑量在100mg/kg以上就是相當大的劑量了。多數藥效學實驗的劑量在10～100mg/kg。甚至在10mg/kg以下。如果LD50超過5g/kg，那樣化合物的毒性就是相當低了。對于中草藥而言，可能很多時候測不到LD50，而是用最大耐受量來表示。在MTD時，還沒有出現一只動物死亡。那可以這樣說，此藥的LD1肯定是比這個MTD要大的。因此，從理論來上說，藥效學的最高劑量可以達到MTD。當然，這個思維的出發(fā)點是，在這個劑量點基本上還沒有動物出現嚴重的毒性反應。但不能忽略的一點是，沒有死亡不能就推定沒有毒性。因此，實際操作中，我們常常會以MTD的幾分之一來定藥效學劑量。1／2或1／3是常用的。在實踐中觀察效果。為什么可以這樣做呢？因為，當劑量達到MTD時，可能藥效早已達到了最高點。從量－效曲線的規(guī)律我們也知道。所以，沒有必要用那么高的劑量。一家之言，僅供參考～！希望大家多多探討。附：由于上面的公式有點看不清。上傳一張圖片。做一個動物實驗，要涉及要許多方面。從實驗設計到實驗操作，再到實驗數據的整理及統(tǒng)計，以及論文的撰寫，需要各個方面綜合的、零零散散的知識和經驗。而泛泛而談，雖能總括一般的規(guī)律，但也許戰(zhàn)友們得不到最貼心、最具實用價值的信息。為此，本版將陸續(xù)推出一些最基礎的專題，從一般到特殊，從抽象到具體，從已知到未知，逐步地深入討論。希望大家踴躍參與。下面，我們來討論在動物實驗中的試劑的配制的問題。分以下幾個方面來討論：一、 用于實驗的試劑的類型及用途二、 用于實驗的試劑原料的貯存方式三、 用于實驗的試劑的溶解度及常用配制方法四、 配制試劑的常用溶劑及適用范圍五、 配制和使用試劑時的量器、衡器的選擇六、 配制好的試劑的使用和保存方式七、 配制好的試劑的常見問題及解決方式八、有毒、危險性試劑的配制及保存九、試劑配制的優(yōu)化十、如何追溯實驗中試劑導致的問題？十一、常用緩沖液的配制十二、生物類試劑的配制雜談十三、如何找到自己需要的試劑？十四、Do it yourself？還是買現成的試劑？　十五、實驗中購買試劑的成本－效用分析十六、不穩(wěn)定試劑的配制此系列貼主要是從大的方向、原則方面來講述的。對于某一試劑的具體細節(jié)問題沒有作過深的探討。各位參與討論的戰(zhàn)友，請著重講述某具體試劑你是如何配制的？要注意些什么細節(jié)問題。希望本貼能長期不斷地深入下去。系列貼子中如有不當之處，請各位不吝指出！from dxy首先，我們來了解一下動物實驗中需要用到的試劑的類型按照其貯存狀態(tài)來分：試劑有已配好的即用型試劑和需要配制的試劑。前者，如：一些性質較穩(wěn)定的、或單劑量包裝的試劑。像Western中的DAB顯色試劑就有現成的可直接用。后者，如：大多數的藥物、試劑。當然，要配制的占大部分。按其用途來分，可分為：藥物：通常就是我們要考察其藥效或機制的化合物或中草藥提取物。又可分為原料藥和制劑。原料藥一般可直接應用。制劑有的要進行提取，有的可直接用。動物模型用試劑：如：造糖尿病的STZ、造肝損傷的氨基半乳糖胺、四氯化碳、造睪丸損傷的鎘劑、造成肺損傷的博來霉素、造成腎損傷的腺嘌呤、造成炎癥的角叉菜膠等等。動物模型用飼料：這個一般是固體狀態(tài)。也有半固體的。液體狀態(tài)的較少。如：高脂飼料中要配以膽固醇、丙基硫氧嘧啶、膽酸鹽、雞蛋黃、豬油等。動物基本操作用試劑：如：麻醉用試劑、動物除毛的試劑硫化鈉、動物標記的試劑苦味酸、取血或插管用的試劑肝素、消毒用的75％乙醇、碘伏、新潔爾滅、動物手術后護理的抗生素等。各類緩沖液或基礎分散介質：如：PBS、生理鹽水、檸檬酸緩沖液、克氏液、任氏液、配難溶性藥物用的0。5％CMC－Na液、DMSO液、增溶劑泊洛沙姆（與藥物混勻后再加入溶劑中）保存標本的試劑：如：10％福爾馬林、中性福爾馬林、4％多聚甲醛、Bouin39。s液等。清洗液：如：稀鹽酸液、重鉻酸鉀洗液。檢測試劑：這個因實驗而異。不同的實驗有不同的方法?？梢粤黹_專題討論。按其使用時限來分：即配即用型：如：STZ極易分解，配制后要迅速全部用完，不然完全失效。一些酶類的試劑，配制后也要盡快用完。已配好的顯色劑，通常也是較短時間內用完。對水不穩(wěn)定的藥物，如：青霉素。盡快用完。可在一周內使用短效型：主要是一些亞穩(wěn)定狀態(tài)的溶液。可隨溫度、氧氣的作用而逐漸分解而達不到使用的要求。如：蛋白電泳中的過硫酸銨，是一種促進氧自由基產生的輔助試劑，促進凝膠的形成，時間久了就不能產生自由基，故而一般在一周內使用，最多兩周。有些緩沖液，尤其是做離體實驗的，一般低溫保存下盡快地用完。不然可影響實驗結果。一個月以內的中效型：許多試劑在配好后，如果能低溫保存，能用一個月以上。三個月以上的長效型：不少性質穩(wěn)定，且對濃度準確度要求不是太高的溶液，可長期保存使用。像福爾馬林、生理鹽水、CMC－Na溶液。按其純度可分為：化學純:一般化學實驗用的,%以上.分析純:做分析實驗用的,含微量雜質,純度一般應在99%: 色譜純:%.生化純::要注意的是,有些廠家有標明 優(yōu)級純()的, 實際上,可認為相當于分析純的級別.還有就是級別最高的:標準品、對照品。其實這二者差別不大。我們通?；煊眠@兩個詞。按藥典規(guī)定，我們通常用的基準物質稱為對照品。而抗生素類（注意，不是合成抗菌藥）的基準物質則稱為標準品。而事實上，我們似乎總是把“標準品”當作最高級別，而把‘對照品’當作一個比“標準品”低一點的級別。事實并非如此，這兩個詞應是一樣的。只是標準品特指抗生素或其它生物制品。特此將二者區(qū)分如下：對照品、標準品系指用于鑒別、檢查、含量測定的基準物質。其中， 標準品特指用于生物檢定、抗生素或生化試劑中含量或效價檢定的基準物質，按效價單位計，與國際標準品標定。如：青霉素的基準物質稱為標準品，而氧氟沙星的基準物質則稱為對照品。但在所發(fā)表的論文中，我們所看到的絕大部分情況是二者混用。稱青霉素為對照品的、標準品的，都有。那么這些基準物質要達到什么樣的要求？我想，%吧。生物制品或抗生素則不一定了，因為有的抗生素實際上就是混合物的。只能用效價來評定。在配制標準品或對照品時，尤其注意要準確。通常，我們在稱量10mg以下的物質時，是很難準的。因此，我們在配某些試劑時，可考慮先稱10mg以上的物質配成較大的濃度，再逐步稀釋，所得濃度要準確一些。每一種試劑對不同級別的規(guī)定和要求是不同的.我們可以看到論文中要標明試劑的純度。通常有寫到化學純、分析純、色譜純、純度達到多少？含標示物多少？等等。這需要在做實驗之前了解我們所要用的試劑的純度要求是怎樣的。不然難以得到滿意的結果。如：需要用色譜純的試劑用了分析純，可能會得到失敗的實驗結果。動物實驗中，用到分析純及以上級別的比較多。做藥動學實驗，液相檢測時要注意，要用色譜純試劑，不然嚴重影響實驗結果。按其毒性，有無毒、低毒、中等毒性、劇毒幾種。要注意毒性試劑的保存，以及實驗過程中自身的防護。第二，我們來談談試劑原料的貯存方式。這里所指的貯存方式，就是指試劑在提供商送貨后，在沒有使用之前的貯存方式。以往很多人對這個問題不是太重視。但這是一個重要的問題。不然，實驗還沒開始，試劑出問題了，得臨時更換，誤事?；蛘邔嶒炦M行中，突然發(fā)現試劑已不可用，則可能導致整個實驗的失敗。因此，做好這個前期工作是十分必要的。按其狀態(tài)，有固體、液體、半固體之分。固體相對比較好保存。液體及半固體有的要特別注意。試劑中一大部分是固體。固體有的是結晶狀的，結晶有多種形態(tài)，像針晶、柱晶、小鱗片狀晶等等。有的是顆粒狀的；有的是塊狀的。其中，針晶、柱晶等流動性比較好，而磷片狀的、塊狀的則不太好。這對以后配制試劑時的稱量有一定的影響。這類物質的保存就是要密封好。嚴格按要求保存。固體里有一類是比較容易吸濕的。像氯化鈣、氯化鋅。尤其要注意相對濕度的影響。按其保存的要求，有常溫保存、低溫冷藏、普通冷凍、低溫冷凍、深低溫冷凍（－70度以下）幾種。常溫保存的試劑原料，放在實驗室存放試劑的柜子中即可。一般要注意避光，并保持溫度不致于過高。一般而言，高于35度的話，應注意。再者，要注意，級別不同的試劑要分開來。易吸濕的與不易吸濕的分開來。常用的放在醒目、易于獲取的位置。可能在一定條件下發(fā)生爆炸的危險品、有毒的試劑原料單獨存放。低溫冷藏的要注意兩點：一是不要把該冷凍的來冷藏。一般而言，冷藏的是不會結冰的，因為溫度一般是在0~4度之間。當然，這是指部分含水的試劑原料而言。二是一般冷藏的試劑原料是不是太穩(wěn)定，但又不能冷凍怕失去或降低活性的一類物質，故一般需要盡快使用。普通冷凍一般是指置于0度下。低溫冷凍一般是指20度保存。這兩種保存方式一般適于一些酶類等在室溫下不穩(wěn)定的物質。注意冰箱不要關閉不嚴，或者短時間內反復開啟，導致試劑原料失活。再者就是漿箱除冰時要預先進行轉移至相應的同等條件下暫時貯存。深低溫保存一般適合于需要在較長時間內保持活性的物質。對試劑原料而言，一般較少有這種情況。因為試劑原料中固體占大部分。而固體一般的降解是比較慢的。倒是用于保存實驗標本時用得比較多。按其毒性，有無毒、低毒、中等毒性、劇毒幾種。這就要求我們在使用或者存放之時要注意防護。對于毒性原料，首先是要了解其毒性的機制，做到心中有數。有的是產生刺激性，如：紅腫、灼痛等一些不良反應。有的是產生血液毒性，如：苯，對粒細胞有影響。有的是神經毒性，如：丙烯酰胺單體。有的是致癌，這是我們感到最為擔心的。如：EB，即溴乙錠；PMSF，苯甲基磺酰氟，是一種常用的蛋白酶抑制劑；烏拉坦，常用的一種麻醉劑，亦有一定的致癌活性。 第二，要知道如何防護。包括拿取、配制時，都要注意。一般我們可以戴一次性手套。第三，要知道如何處理不幸染上這些原料。每種物質都是可以清洗的，只要發(fā)現得早，且沒有入口中，基本上可以自行處理。如：大量水清洗，適當選用洗滌劑，用特效物質進行減毒的處理等等。第四，要知道這些物質使用后的排放處理方式。不要對社會造成大的污染。上面我們談了按要求貯存試劑原料的問題，下面我們再來說一說試劑原料包裝的一點常識。如何在試劑拿到手時判斷試劑有無問題？包括包裝破損與否？是否正規(guī)廠家生產？是國外原裝進口還是國內分裝？其形態(tài)是否符合我們的要求？運輸途中是否有特殊要求？規(guī)格是否符合我們的要求？一般獲取試劑原料有四條途徑。一是自己去試劑供應點購買或者領取。一些常用的試劑有些學校或科研單位有一個試劑庫房，可辦好相關手續(xù)后領取。有些可自己去試劑原料店購買。這些可以當面看清包裝標識。二是由試劑銷售人員送貨上門的。基本上也可以做到無誤。三是郵購的。大多由特快專遞送過來。要查驗后確認。如有不對，可再聯系供應商。四是由別人饋贈的。這一點，我們通常要注意問明，最好是查看原包裝的標簽。尤其是一些生化試劑，要注意是否過期?？丛噭┰系陌b。無非是看廠家、批號、規(guī)格、數量。不同廠家的試劑效果可能不一樣。不同批號也可能有差異。規(guī)格也