【文章內(nèi)容簡介】 三）磷酸鹽緩沖液配制2H2O置于100ml容量瓶中，加入約30ml蒸餾水溶解后用蒸餾水定容至100ml。（四）姬姆薩原液配制稱取姬姆薩染料1g，甘油66ml，甲醇66ml，將研細的姬姆薩染料加入少量溫熱（60℃）的甘油，在研缽內(nèi)研磨直至完全無顆粒呈勻漿而止，再將剩余全部甘油倒入置56℃恒溫箱中2h，分次用甲醇清洗容器于棕色瓶保存，二周后使用，此原液放置時間越長越好，使用前過濾。（五）姬姆薩染液的配制根據(jù)每個抹片需染液2ml來確定所需染液量，配置好的染液需立即使用染色，放置時間過長會使染色效果減退。姬姆薩染液的配制方法為原染液、緩沖液、蒸餾水的比例為2：3：5。（六）蘇木精——伊紅染液的配制 ：%伊紅溶液（七）生物顯微鏡（1000油鏡）（八）血球計數(shù)板（九）載玻片、蓋玻片、滴管、紅布、染色缸、染色架、玻片鑷三、實驗內(nèi)容（一）抹片將需測定精液樣品搖勻，在精液的中層用吸管吸取一小滴精液，平滴在載玻片的右端，取另一邊緣光滑平直的載玻片呈35176。角自精液滴的左面向右接觸樣品，樣品精液即呈條狀分布在兩個載玻片接觸邊緣之間，將上面的載玻片貼著平置的載玻片表面自右向左移動，帶著精液滴均勻地涂抹在載玻片上，切忌將精液滴“推”過去，否則易造成精子的人為損傷，制作另一抹片時，須重新?lián)Q取載玻片，在抹片的右端背面用特種鉛筆注明標號，每份精液樣品須同時制作兩個抹片。（二）風干自然干燥520分鐘后即固定染色，不可久置。（三）固定將風干抹片平置于染色架上，用滴管吸取12ml福爾馬林磷酸鹽緩沖固定液，滴在抹片上，輕輕搖動，使固定液布滿在整個抹片表面，靜置固定15分鐘。（四）水洗用玻片鑷夾住抹片一端，將固定液棄至染色缸內(nèi)，在蒸餾水缸中涮洗，取出立于瓷盤邊待干。（五）染色將經(jīng)固定風干后的抹片平置于染色架上，選用下列任意一種染色液進行染色。用滴管吸取新配制的姬姆薩染色液2ml，自左向右滴在涂片上，使染液均勻布滿抹片上，靜置染色90分鐘。取蘇木精染液，滴于風干后的抹片上，靜置15分鐘，用蒸餾水洗去染色液體，待其自然風干后，%伊紅復染液滴于經(jīng)蘇木精初染的抹片上復染23分鐘。（六）水洗用（四）的方法水洗除去抹片上的染色體液，每張抹片經(jīng)數(shù)次涮洗，直至水洗液無色為止，風干待鏡檢觀察。（七）精子頂體的觀察將精液樣品抹片置于1000倍生物顯微鏡下用油鏡頭觀察或者用相差顯微鏡（1040）觀察。用姬姆薩液染色時，精子的頂體呈紫色，而用蘇木精——伊紅液染色時，精子的細胞膜呈黑色，頂體和核染成紫紅色。按照精子形態(tài)，細胞膜及頂體的完整與否，將精子頂體狀態(tài)分為四種類型。頂體完整型：精子頭部外形正常，細胞膜和頂體完整、著色均勻、頂脊、赤道段清晰。頂體膨變型：頂體著色均勻，但頭部邊緣不整齊呈畸形，核前細胞膜不明顯或部分缺損。頂體破損型：頂體著色不均勻，頂體脫離細胞核，形成缺口或陷凹。頂體全脫型：赤道段以前的細胞膜缺損，頂體已全部脫離細胞核。（八）計算在每張抹片上觀察300個精子，并統(tǒng)計出頂體完整型精子數(shù)。精子頂體完整率（%）=要求每張抹片精子頂體完整率差異不超過15%，求出二張抹片平均頂體完整率，即為樣品精液的頂體完整率。四、作業(yè)將試驗結(jié)果填入下表畜種（號）： 精液類型： 精液活率：抹片號頂體完整型（個）異常頂體類型（個）頂體完整率（%）平均頂體完整率（%）頂體膨變型頂體破損型頂體全脫型12實驗七 人工授精器械的認識及假陰道的準備一、實驗目的認識各種家畜人工授精所用的器械，了解其構(gòu)造、用途和使用方法，初步掌握假陰道的安裝方法。二、實驗材料各種家畜的采精器械。各種家畜的輸精器械。三、實驗內(nèi)容（一）各種家畜采精器械的認識各種家畜的采精器械主要是假陰道，由外殼、內(nèi)胎、集精杯3部分組成。各種家畜的假陰道分別介紹如下：馬：其假陰道外殼是由鍍鋅鐵皮制成的圓筒，外形似大暖瓶，筒體中部有把手，便于采精時把握，側(cè)面有注水孔，可塞進帶氣嘴的橡皮塞子，由此灌水和充氣。內(nèi)胎是由優(yōu)質(zhì)橡膠制成長筒，裝于外殼內(nèi)，兩端翻卷固定在外殼內(nèi)，集精杯為短圓狀的黑色橡皮杯，套在外殼的小端。牛：其假陰道有美式、蘇式兩種，外殼是由硬橡膠或塑料制成的圓筒，中部有注水孔，塞有帶氣嘴的橡皮塞，灌水和充氣用，內(nèi)胎同馬；集精杯有二種：一種是棕色的雙層集精杯，夾層可盛37℃以下溫水以保護精液；另一種是在橡皮漏斗上接上一個玻璃管或離心管。羊：其假陰道構(gòu)造基本與牛相同，只是較小，集精杯是棕色的雙層杯。豬：其假陰道構(gòu)造基本與牛、羊相同，只是較牛的短，比羊的粗，集精杯為有色的廣口玻璃瓶，容量為350500ml。在生產(chǎn)實踐中，豬采精通常用手握法，須醫(yī)用乳膠手套和一個保溫杯即可。（二）各種家畜輸精器械的認識各種家畜的輸精器械為開張器，輸精器和照明燈。開張器有二種：一種是金屬的鴨嘴式開張型的，一種是玻璃或塑料的圓筒式的，各種家畜的開張器只是大小有別。輸精器有玻璃、金屬、塑料、橡皮制成的。馬、豬的輸精器，為一端尖細的優(yōu)質(zhì)橡皮管，其大小不一，它的一端接注射器。牛、羊的輸精器有玻璃和金屬兩種，其中大小不一，牛采用直腸把握法輸精多用金屬輸精器。細管冷凍精液，有專用的金屬細管輸精槍——卡蘇槍。照明燈：可用手電筒、頭燈，最實用的為固定在開張器或輸精器上的照明燈。（三）假陰道的安裝安裝前的準備首先檢查：（1）外殼有無裂縫或小孔。（2）內(nèi)胎是否漏氣，邊緣是否裂口。（3）氣門活塞是否有裂口漏氣，開關是否靈活。安裝方法（1）內(nèi)胎光滑面朝內(nèi)腔裝入外殼，兩端翻卷于外殼兩端，不得扭轉(zhuǎn)，中軸與外殼重合呈同心圓位置，并用橡皮圈固定兩端。（2）由外殼的注水孔注入45～55℃的溫水，使采精時的溫度為38～42℃，水量為外殼內(nèi)胎之間容積的1/3～1/2。（3）裝上氣門活塞，于一端裝上集精杯和保護套。（4）用玻璃棒涂布潤滑劑凡士林或石蠟油。由內(nèi)向外均勻涂布，深度不超過1/2。（5）打開開關充氣，使內(nèi)胎呈“Y”形。（6）用溫度計插入假陰道，測量溫度為38～42℃，準備采精。四、作業(yè)試述牛假陰道的組成及安裝方法。實驗八 動物精液的冷凍技術操作一、實驗目的了解精液冷凍保存技術的操作過程，基本掌握冷凍精液的制作技術。二、實驗材料牛、豬精液。藥品：葡萄糖、蔗糖、檸檬酸鈉、氨基乙酸、三羥基甲基氨基甲烷、甘油、雞蛋、青霉素、鏈霉素。器具：液氮罐、保溫瓶、溫度計、鑷子、鋁飯盒、氟板、銅紗網(wǎng)、滴管、細管、封口粉、燒杯、量筒、三角燒瓶、瓷盤、紗布、棉花、顯微鏡、顯微鏡保溫箱、載玻片、蓋玻片、天平、濾紙、玻璃球、磁力攪拌器。三、實驗內(nèi)容（一）公牛精液的冷凍：稀釋液的配制稀釋液配方：12%蔗糖溶液75ml，卵黃20ml，甘油5ml，青霉素5001000單位/ml，鏈霉素5001000μg/ml。首先配制12%蔗糖溶液，過濾后在水浴中煮沸消毒15分鐘，待涼后按比例加卵黃、甘油和青鏈霉素，用磁力攪拌器或玻璃棒充分攪勻。解凍液的配制解凍液配方：(g)，蒸餾水100ml，配好后過濾，煮沸消毒。顆粒法與細管法（見流程圖）（二）公豬精液的冷凍稀釋液配制稀釋液配方：12%蔗糖溶液 75ml 氨基乙酸 檸檬酸鈉 Tris 卵黃 20ml 雙重蒸餾水加至 100ml 甘油最終濃度 1% 青鏈霉素 5001000μg/ml甘油配制12%蔗糖溶液，并加入氨基乙酸，檸檬酸鈉和Tris后過濾煮沸15分鐘消毒，待涼后按比例加入卵黃、甘油、青鏈霉素，充分攪拌均勻。解凍稀釋液的配制解凍稀釋液配方：葡萄糖 5g 雙蒸水 100ml 檸檬酸鈉 10%安鈉加 5ml配好后過濾煮沸消毒顆 粒 法 細 管 法冷凍工藝流程：鏡檢：精液采得后在3840℃下顯微鏡檢查，釋釋：用稀釋液1：1等溫稀釋四、作業(yè)：評定冷凍精液解凍后的活力。試述如何提高冷凍精液的質(zhì)量。實驗九 動物的發(fā)情鑒定一、實驗目的觀察識別母牛、母羊和母豬發(fā)情時外部表現(xiàn)（性興奮），陰道的變化和性欲表現(xiàn)，利用腹腔鏡觀察卵巢的發(fā)育情況，確定母畜是否發(fā)情。二、實驗材料陰道開張器、載玻片、消毒棉簽、腹腔鏡、溫水、1%煤酚皂溶液、75%酒精棉球、生理鹽水。三、實驗內(nèi)容（一）外部觀察法發(fā)情動物常表現(xiàn)為精神不安，鳴叫，食欲減退，外陰部充血腫脹，濕潤，有粘液流出，對周圍的環(huán)境和雄性動物的反應敏感。母牛發(fā)情表現(xiàn)不安，哞叫，食欲和奶量都減少，尾巴常不停地搖擺和高舉。放牧時通常不安靜吃草而亂走。明顯的特征是接受其它母牛的爬跨，拱腰站立不動，發(fā)情母牛也追逐其它牛。其它牛常嗅聞發(fā)情母牛的陰門，但發(fā)情母牛從不去嗅聞其它母牛的陰門。陰道排出蛋清樣的粘液，打開陰道從開張器中間滴溜垂落地下。母羊發(fā)情亦表現(xiàn)不安，高聲鳴叫，不停地搖尾巴，用手按壓其臀部搖尾更甚，食欲減退，反芻停止，放牧時常有離群現(xiàn)象，上述表現(xiàn)，山羊比綿羊表現(xiàn)強烈。母豬的發(fā)情表現(xiàn)在各種母畜中表現(xiàn)最為強烈，食欲劇減甚至廢絕，在圈內(nèi)不停走動，碰撞騷擾，拱地，啃嚼門閂企圖外出，不停爬跨其它母豬，而且也接受其它母豬的爬跨。（二）陰道檢查開張器法（1）檢查前的準備工作保定：根據(jù)現(xiàn)場條件和習慣，利用繩索，三角絆或六柱欄保定母馬；將尾毛理齊，由一側(cè)拉向前方。外陰部的洗滌和清毒：先用溫水（或肥皂、23%的蘇打水等）洗凈外陰部，然后用1%煤酚皂溶液進行消毒，最后用消毒紗布或酒精棉球擦干。在洗凈或消毒時，應先由陰門裂開始，逐漸向外擴大。如果準備用手臂檢查，洗滌及消毒范圍應該上至尾根，兩側(cè)達到臀端外側(cè)。開張器的準備：先用75%的酒精棉球清毒開張器的內(nèi)外面，然后用無煙火焰燒灼消毒亦可用消毒液浸泡消毒，然后，用開水沖去藥液并在其濕潤時使用