【正文】 如果加大后仍然不上色，則有可能是染色液的問題，或者有膠面受到了污染，至少可排除不是加樣量過少的原因。這是我們排查實驗失敗原因的最常用的手段。這樣的檢查有時能很快查出實驗失敗的原因來。我想大家一般不會弄錯。切忌想當(dāng)然。三是配制試劑過程中盡量避免污染。當(dāng)然，并不是要求所有試劑都不用國產(chǎn)的。這樣才能得到可靠的信息。一般情況下不推薦此法。要靈活變化。因蛋白上樣量已經(jīng)夠高了，不能再增加了。這個因人而異。而我們的給藥量是不同的。２　適當(dāng)改變濃度改進(jìn)一個方法不是一下就能做得到的，而是要不斷、反復(fù)地摸索。注意激發(fā)其爆炸的條件。但通常我們在用其浸泡Tip頭后，使其揮發(fā)掉。擰開蓋子時，蓋子一般宜朝上放置，這樣也可減少污染范圍。通常標(biāo)簽我們用紅色的，標(biāo)明“有毒！”，必要時畫上毒性的符號。了解中毒的一些癥狀是很有必要的。相反，如果滴上一滴致癌的試劑，那我們就會感到很恐怖了。１　要了解試劑的毒性機理。這樣，我們就知道如何防護(hù)，也知道在萬一沾上有毒試劑時該如何處理。往往是做實驗中，或者是實驗做完后結(jié)果不如意時，才會考慮可能是試劑出了問題。如不在正常范圍內(nèi)，即可認(rèn)為已變質(zhì)。其實高分子是分散在其中，不是真正的溶解。對于含水用含糖的溶液尤其要注意。因此，了解試劑常見的一些可能變質(zhì)的現(xiàn)象，有助于我們掌握一般規(guī)律，并能順利解決實驗中出現(xiàn)的問題。有些殘留液體不洗，時間稍隔長一點，就比較難洗了。這時，我們一定要注意問清楚。以移液槍取液時，注意更換槍頭。但也有要求冷凍的，視其具體要求而定。有的試劑不是用水來配，而是要別的溶劑。三是要注意配好的試劑要冷卻到室溫最終量取體積才是準(zhǔn)確的。配一般的試劑，用量筒。不過這種方式有時亦可被水弄得字跡不清。貼標(biāo)簽是個必不可少的工作。比較大的可用裝蒸餾水的瓶子，一般有1升到5升，甚至10升的。只提一些應(yīng)特別注意的地方。測試一次后玻棒要洗滌方可用第二次。有此對熱不穩(wěn)定的不可加溫。尤其是一些需要加熱的試劑，通常是用加一部分溶劑（通常是水），使之全部溶解，再加溶劑補足。它的特點是：微量，使用時能插入到儀器之中或一定的液面之下。使用移液槍要注意槍頭與槍的配套，要注意吸取時不要把液體吸入槍內(nèi)。有多種規(guī)格。在一定范圍內(nèi)，可以配制任何容量大小的溶液，是配制溶液中最常用的量器。因為一般倒出來的試劑是不允許倒回原瓶的。固體以毛刷刷去；液體可用吸水紙吸干，并更換紙輕拭。切忌動作粗暴。這在使用之前一定要看清。下面著重介紹一下電子天平。下面我們就來談?wù)勥@方面的問題。三是一定要寫好牢固的標(biāo)簽。同時，一些緩沖液是用于洗滌或暫時保存組織的溶液系統(tǒng)。注意，如果要較為精確地測定乙醇濃度，最好還是使用酒精比重計。用乙醇進(jìn)行洗滌等。有機溶劑，是許多試劑中必不可少的。配制試劑，當(dāng)然不能用自來水，至少也是蒸餾水。淫羊藿苷，想一想，苷類都有糖基，極性大，總是能溶的吧？卻幾乎不溶于水，而溶于乙醇、甲醇中。我曾經(jīng)一次用丙酸睪酮注射液，想要稀釋，便用雙蒸水來做。該如何弄呢？方法有三。但實際使用時，要考慮可能引起一些藥理效應(yīng)，從而對實驗結(jié)果產(chǎn)生干擾。下面我們就來談?wù)勅绾闻渲七@些試劑。有時送貨人疏忽，少送了東東，也是很麻煩?？丛噭┰系陌b?；旧弦部梢宰龅綗o誤。不要對社會造成大的污染。如：EB，即溴乙錠；PMSF，苯甲基磺酰氟，是一種常用的蛋白酶抑制劑；烏拉坦，常用的一種麻醉劑，亦有一定的致癌活性。倒是用于保存實驗標(biāo)本時用得比較多。低溫冷凍一般是指20度保存。易吸濕的與不易吸濕的分開來。固體里有一類是比較容易吸濕的。液體及半固體有的要特別注意。這里所指的貯存方式，就是指試劑在提供商送貨后，在沒有使用之前的貯存方式。這需要在做實驗之前了解我們所要用的試劑的純度要求是怎樣的。那么這些基準(zhǔn)物質(zhì)要達(dá)到什么樣的要求？我想，%吧。而事實上，我們似乎總是把“標(biāo)準(zhǔn)品”當(dāng)作最高級別，而把‘對照品’當(dāng)作一個比“標(biāo)準(zhǔn)品”低一點的級別。三個月以上的長效型：不少性質(zhì)穩(wěn)定，且對濃度準(zhǔn)確度要求不是太高的溶液，可長期保存使用。對水不穩(wěn)定的藥物，如：青霉素。s液等。動物模型用試劑：如：造糖尿病的STZ、造肝損傷的氨基半乳糖胺、四氯化碳、造睪丸損傷的鎘劑、造成肺損傷的博來霉素、造成腎損傷的腺嘌呤、造成炎癥的角叉菜膠等等。前者，如：一些性質(zhì)較穩(wěn)定的、或單劑量包裝的試劑。分以下幾個方面來討論：一、 用于實驗的試劑的類型及用途二、 用于實驗的試劑原料的貯存方式三、 用于實驗的試劑的溶解度及常用配制方法四、 配制試劑的常用溶劑及適用范圍五、 配制和使用試劑時的量器、衡器的選擇六、 配制好的試劑的使用和保存方式七、 配制好的試劑的常見問題及解決方式八、有毒、危險性試劑的配制及保存九、試劑配制的優(yōu)化上傳一張圖片。因此，實際操作中，我們常常會以MTD的幾分之一來定藥效學(xué)劑量。甚至在10mg/kg以下。同理，雖然我們知道有些藥物的S值是大于2的，這樣量－效曲線比較陡，算出來的LD1與LD50接近了許多，但為保守起見，我們?nèi)匀”容^小的劑量作為藥效學(xué)的實驗劑量。很多藥物的S值在2以下，一部分在2～5之間，大于6的極少。E5=5％Emax =+ LD5s得：= LD5s/LDs50+ LD5s化簡，得：LD5s==1/19X LDs50同樣地, LD1s =1/99X LDs50如果S=1, 則LD5大約為LD50的1/20。因此，我們將這一公式移植到急毒實驗中來進(jìn)行一些應(yīng)用。為此，我們先來了解一下相關(guān)的基礎(chǔ)知識。我們知道，藥物是安全性和有效性并存的。這可能成為我們選擇劑量的一個重要依據(jù)。其實，只要知道等效劑量折算的原理，我們照樣可以很好地估算出來。不過，要注意一點，這是我們設(shè)想實驗動物對此藥敏感程度與人相同的情況下。而口服途徑一般來說，較易實現(xiàn)相對準(zhǔn)確。除此之外，在動物實驗中，還有一種重要的給藥途徑，就是：腹腔注射。通常我們以靜脈為參照，來比較其它途徑給藥能達(dá)到靜脈的百分之幾來衡量。下面我們就來談?wù)勥@個問題。而且，兒童用藥要“摸石頭過河”，不可盲目用較大劑量。在此，我推薦體表面積法。實際上，因為成人與小兒體型系數(shù)是一樣的，所以其體表面積就是他們體重比的２／３次方。從臨床應(yīng)用來說，是不妥的。如有不同看法，請與我交流。那么，這樣一來，折算系數(shù)表的中數(shù)字，全部要修正。歡迎大家多多探討～～！本人意見僅供參考。我們知道它們之間與人的劑量比，相比一下就知道它們之間的比了。給藥的劑量常會因為人為的操作而出現(xiàn)偏差。凡體重在350~400g之間的，誤差按20%來算。凡體重在250~300g之間的，誤差按10%計算。如果比較均勻，在180~220g，則相對誤差在5%以內(nèi)。有什么用呢？我們可以這個來估算按折算系數(shù)計算的劑量與實際相差多少。如下圖矩形框所示。則：Y1=U ＊＊X=按實際體面表面計算得出的Ｘkg大鼠的用藥量為Y2。從上面我們已經(jīng)知道按折算系數(shù)計算會產(chǎn)生誤差。我們下面就來一一地算一算。就是說，70kg的人對200g的大鼠，那么這個劑量完全準(zhǔn)確的。因為，這一切都是由體型公式計算得來的，也就是說，是按體表面積來計算等效劑量的。人的體表面積＝(70)2/3=大鼠的體表面積＝()2/3=體表面積比（大鼠／人）＝~~= 的小鼠的。體型系數(shù)是人們根據(jù)不同動物的體重與體表面積之間的關(guān)系計算出來的。因此，不能把這個所謂的等效劑量完全照搬。我們理想地認(rèn)為，對任何藥物，各種動物和人的敏感程度是完全一樣的。例如馬、豬、狗、大鼠和人的每m2體表面積每24小時的散熱量都在1000 kCal 左右。人：／70kg＝ 　大鼠：305cm2／200g＝305105/=大鼠劑量／人的劑量＝大鼠比表面積／人比表面積＝可以看出，與我們上述按折算系數(shù)算出來的結(jié)果幾乎相同。X mg/kg.狗的劑量＝X mg/kg70kg＝這個折算系數(shù)是以上表中藍(lán)色所示的標(biāo)準(zhǔn)體重計算得來的。把人的臨床劑量轉(zhuǎn)換為實驗動物的劑量。下面我來說一說用第一種方法進(jìn)行如何換算。有時沒有我們所用動物的劑量，但有其它實驗動物的。動物實驗基礎(chǔ)知識系列之一：劑量換算關(guān)于劑量換算的問題最近不少戰(zhàn)友詢問關(guān)于不同實驗動物之間或者實驗動物與人之間的劑量如何作“等效”換算的問題。也有的是有臨床用量的，但沒有實驗動物的。目前我們大多數(shù)人用的方法，是參考徐叔云教授主編的《藥理實驗方法學(xué)》。試著換算一個。依此類推，我們可以算出小鼠、豚鼠等其它動物劑量與人的比值。X mg/kg.注意，人的臨床劑量常會以　mg／d來表示，這時我們一定要把它轉(zhuǎn)化成　mg/kg才能以上式來折算。關(guān)于這個表，我說以下兩點：１． 這個表雖然是以體重的比來計算劑量，但實際上計算的是體表面積。為什么說要按體表面積來算才是準(zhǔn)確的呢？起初人們也以為是直接按體重比計算劑量就可以了，后來發(fā)現(xiàn)不是那么回事。藥理學(xué)家研究藥物在體內(nèi)的作用時則習(xí)慣于以mg/kg 或g/kg等方式來計算藥物的劑量。這是我們折算等效劑量的一個重要的前提。當(dāng)然，我們同樣反對毫無根據(jù)地亂設(shè)劑量。不同的動物有不同的體型系數(shù)。小鼠的體表面積＝()2/3=體表面積比（小鼠／人）＝ ~~=，這個計算結(jié)果與前面我們所說的那個表基本是一致。但是，我不得不說的是，按第一個表，或者是我編制的簡表來計算實驗動物的等效劑量，要動物基本上在標(biāo)準(zhǔn)體重的區(qū)間內(nèi)相差不大才會準(zhǔn)確。但如果大鼠不是200g，那么就會有偏差了。以大鼠為例。這種誤差應(yīng)該說是屬于系統(tǒng)誤差。Y2=*(Ｘ)2/3/＊U ＊70=(X)2/3這樣，我們就構(gòu)筑了兩個函數(shù)關(guān)系式。如果相差不大，我們認(rèn)為是可以接愛的。這是完全可以接受的。即：A－B／B＝。B＝凡體重在400~450g之間的，誤差按25%來算。而那樣的偏差達(dá)10%我想是很常見的。至此，我們對于這個折算系數(shù)換算劑量的方法基本解析完全。又附：在此對那個《藥理實驗方法學(xué)》中的折算關(guān)系表再提一點自己的看法。如此一來，我所編的那個簡表就要修正了。但是，對藥品生產(chǎn)廠家來說，他們也只能如此。那我們來驗算一下上面這個例子：（８／７０）２／３＝ ，可以看出，與上述結(jié)果相差無幾。按經(jīng)驗公式計算體表面積，非常方便，筆算甚至口算可得出答案。以上只是原則性的談了一下小孩與成人劑量的換算。說到這個問題，我們不得不談到生物利用度。關(guān)于不同途徑給藥的問題，在不少的藥理及相關(guān)的書上，有如下的敘述：以口服量為100時，皮下注射量為30～50，肌肉注射量為20～30，靜脈注射量為25。它可達(dá)到不錯的效果，而又比靜注要簡單方便，因此常常采用。第二，能夠不改給藥途徑時，盡量不改。以上所述，僅供參考～～！那么，如果是透皮吸收的呢？也就是說，把皮膚只當(dāng)作一個給藥途徑，最終在體內(nèi)發(fā)揮作用的呢？那實際上就相當(dāng)于體內(nèi)給藥了，仍然按前面所述的等效劑量給藥。與其它實驗動物的劑量折算相似，方法如下：第一，能找到有參考文獻(xiàn)的，可以用現(xiàn)成的劑量。那么，如何根據(jù)LD50或MTD來選擇劑量呢？要注意些什么問題呢？下面我來跟大家探討一下。在達(dá)到很好的藥效的時候，可能已經(jīng)產(chǎn)生毒性了。我們知道，藥理效應(yīng)跟劑量（或藥物濃度）之間存在一定的關(guān)系。對于一定大小的動物而言，一定的劑量與一定的血藥濃度基本上成正比的。 LD1則為LD50的1/100.如果S=2, 。也就是說，大多數(shù)藥物的效應(yīng)隨血藥濃度增加是漸進(jìn)式的，或近于漸進(jìn)式的。這樣我們就得到了藥效學(xué)劑量的一個最保守的估算值：大約取LD50的1／100。在新藥研究指南中，并沒有規(guī)定劑量取LD50的多少分之一。如果LD50超過5g/kg，那樣化合物的毒性就是相當(dāng)?shù)土恕?／2或1／3是常用的。十、如何追溯實驗中試劑導(dǎo)致的問題？十一、常用緩沖液的配制十二、生物類試劑的配制雜談十三、如何找到自己需要的試劑？十四、Do it yourself？還是買現(xiàn)成的試劑？　十五、實驗中購買試劑的成本－效用分析十六、不穩(wěn)定試劑的配制此系列貼主要是從大的方向、原則方面來講述的。像Western中的DAB顯色試劑就有現(xiàn)成的可直接用。動物模型用飼料：這個一般是固體狀態(tài)。清洗液：如：稀鹽酸液、重鉻酸鉀洗液。盡快用完。像福爾馬林、生理鹽水、CMC－Na溶液。事實并非如此，這兩個詞應(yīng)是一樣的。生物制品或抗生素則不一定了，因為有的抗生素實際上就是混合物的。不然難以得到滿意的結(jié)果。以往很多人對這個問題不是太重視。試劑中一大部分是固體。像氯化鈣、氯化鋅。常用的放在醒目、易于獲取的位置。這兩種保存方式一般適于一些酶類等在室溫下不穩(wěn)定的物質(zhì)。按其毒性，有無毒、低毒、中等毒性、劇毒幾種。 第二，要知道如何防護(hù)。上面我們談了按要求貯存試劑原料的問題，下面我們再來說一說試劑原料包裝的一點常識。三是郵購的。無非是看廠家、批號、規(guī)格、數(shù)量。對于有幾層包裝的試劑，要注意小包裝數(shù)量是否足量。易溶性的：像絕大多數(shù)的酸、堿、鹽類試劑，都是易溶性，且一般是水溶性的。能不用盡量不用。一是查看試劑包裝的說明。結(jié)果發(fā)現(xiàn)根本不混溶。因此，物質(zhì)的溶解度如何，除了查閱相關(guān)的資料外，其實很重要的一點還是要自己動手配制一點預(yù)試一下。最好是用雙蒸水。用理較多的是乙醇、甲醇、丙酮、氯仿這三種。要注意有機溶劑的易燃性和毒性。緩沖液，嚴(yán)格來說，算不上溶劑，只能算一種分散介質(zhì)。如 ：取組織標(biāo)本時，通常要用生理鹽水或PBS來洗滌血跡。本人配制蛋白電泳緩沖液時，有一次將濃縮膠緩沖液與分離膠緩沖液恰好弄反了，導(dǎo)致失誤。A 衡器的使用天平有不同的精密度的，如：準(zhǔn)確到1g的、,1/100g,1/1000g,1/10000g, 1/100000g的。天平的調(diào)水平。天平的使用注意事項。對于固體，一般要盡量以小勺搗至成粉末或小顆粒，再以牛角勺輕抖至稱量紙上或容器中。而多余的另裝則可能保質(zhì)期難以保證。容量瓶比較精確。使用時要用洗耳球吸取，放下時由手指來控制其放出的容量。要小心調(diào)節(jié)槍的刻度盤。量程有20ul, 50ul,100ul不等。要注意燒杯的大小，加