【正文】 有時(shí)候，在實(shí)驗(yàn)中會(huì)出現(xiàn)。可在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步來(lái)查明原因。如何平時(shí)是上５０ug,那么排查實(shí)驗(yàn)可上200,300ug甚至更多。我想看看是不是由于樣品不夠的原因。這樣，可突出某一度劑的因素，從而暴露試劑的問(wèn)題，也有可能藉此將此因素排除。三是強(qiáng)化法。這樣，很可能從中發(fā)現(xiàn)一些信息。比如：在做蛋白電泳時(shí)，假如你懷疑細(xì)胞裂解液有問(wèn)題。二是替換法。不過(guò)，很多是一下查不出來(lái)的。比如：本來(lái)在室溫下應(yīng)為膠凍狀的試劑是不是已經(jīng)成液體了？PH值是否在規(guī)定的范圍內(nèi)？肉眼觀察試劑是否澄清？是否變色？所用量取器具是否干凈？是否用了已經(jīng)過(guò)期的配好的試劑？等等。要查找實(shí)驗(yàn)中的問(wèn)題，方法有如下幾種：一是常規(guī)檢查法。的確，因?yàn)閯?dòng)物實(shí)驗(yàn)屬生物方面，生物的變異度太大，出現(xiàn)一些問(wèn)題在所難免。在用之前，詳細(xì)地查詢(xún)是最基本的保證。有些試劑有詳細(xì)的說(shuō)明。五是注意試劑使用的操作規(guī)程。要區(qū)分開(kāi)來(lái)，寫(xiě)好標(biāo)識(shí)。如：苦味酸可以配成給動(dòng)物標(biāo)記的苦味酸液，也可以配制Bouin’s液。四是配好試劑按規(guī)定要求保存。如有共用試劑，要詳細(xì)告知?jiǎng)e人，或是從別人那得到詳細(xì)信息。更換一批試劑時(shí)，上一次的一定要處理干凈。一方面是微生物的污染，另一方面是其它雜質(zhì)的污染。對(duì)于生物方面的實(shí)驗(yàn)，尤其要注意。尤其在一個(gè)大的實(shí)驗(yàn)階段，為保證實(shí)驗(yàn)中的齊同對(duì)比，最好一次購(gòu)進(jìn)所需試劑，不要中途少了再趕。在摸索階段，我們可能想各種的試劑都試一下效果，這可以理解。這主要是要看實(shí)驗(yàn)的要求，以及國(guó)產(chǎn)試劑達(dá)到的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。有些試劑國(guó)產(chǎn)的是達(dá)不到要求的。不要因?yàn)楣?jié)省經(jīng)費(fèi)而購(gòu)一些難以達(dá)到要求的國(guó)產(chǎn)貨。該用進(jìn)口的一定要用進(jìn)口的。首先，我們來(lái)談?wù)勅绾伪苊庖蛟噭┰蚨趯?shí)驗(yàn)中出現(xiàn)問(wèn)題。我們所能做的就是在一次實(shí)驗(yàn)中，盡量使用同一批次的試劑，對(duì)所有動(dòng)物齊同對(duì)比。如果等到實(shí)驗(yàn)已經(jīng)做完才發(fā)現(xiàn)，往往于事無(wú)補(bǔ)。甚至只有當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果出出異常的時(shí)候，我們才會(huì)想起可能是試劑有問(wèn)題。第十，我們來(lái)談?wù)勅绾巫匪輰?shí)驗(yàn)中試劑導(dǎo)致的問(wèn)題。這需要實(shí)驗(yàn)做得很熟練，且對(duì)某具體實(shí)驗(yàn)步驟、原理十分了解的情況下方可如此。那么，是否根據(jù)實(shí)驗(yàn)的原理用別的試劑代用一下呢？我覺(jué)得是可以考慮的。有的可能通過(guò)別人贈(zèng)送，有的可以郵寄。５　尋找代用品書(shū)本上的只是一個(gè)大概的標(biāo)準(zhǔn)。這就成了我實(shí)驗(yàn)中的最佳濃度。于是，在原配方的基礎(chǔ)上，我配制了幾種不同的考馬液，試了幾塊膠。于是自己動(dòng)手來(lái)改考馬的配方。摸索一番之后，發(fā)現(xiàn)有可能是考馬的問(wèn)題。剛開(kāi)始做蛋白電泳時(shí)，按《分子克隆》上的配方來(lái)配，老是染不上色。其前提是對(duì)實(shí)驗(yàn)原理非常了解。我想在實(shí)驗(yàn)中是有不少這樣的情況的。對(duì)于一些濃度要求不精確的溶液，配制時(shí)可酌情省去一些步驟。因此，在對(duì)實(shí)驗(yàn)原理及步驟很熟悉的情況下，實(shí)驗(yàn)中可不拘泥于書(shū)本，完全可以自行掌握。在試劑不很足的情況下，可以把試劑和標(biāo)本蛋白量都減至２／３，甚至一半，同樣可以測(cè)出蛋白含量，只要濃度在它的檢測(cè)范圍內(nèi)。這樣，就要根據(jù)不同的情況來(lái)調(diào)整濃度，不要硬搬書(shū)上或文獻(xiàn)中的濃度。又如：給動(dòng)物灌胃時(shí)，我們知道每種動(dòng)物的容量是有一定的。比如：做蛋白電泳，用考馬斯亮藍(lán)染色時(shí)，有時(shí)我們會(huì)發(fā)現(xiàn)沒(méi)染上。有時(shí)候，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)條件的不同，完全按書(shū)上的方法去配成試劑，甚至做不出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。試劑說(shuō)明書(shū)上，以及做某一具體實(shí)驗(yàn)的方法步驟上，一般都會(huì)寫(xiě)明試劑要配成什么樣的濃度。這樣一是可以減少誤差，二是節(jié)省時(shí)間。但如果我們知其原理，就可以配成混合液，一并加入。每次加的時(shí)候，因?yàn)橐淮握`差，可能各種試劑的比例有差異。關(guān)于配制試劑的優(yōu)化方法，主要有以下幾種：１　配混合試劑第三，要有小量的試配的經(jīng)驗(yàn)。要達(dá)到這樣一個(gè)看似高于一般實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)，需要些什么樣的要求呢？首先，必須是你對(duì)試劑的原理及可能出現(xiàn)的問(wèn)題有全面的了解。但有時(shí)候，這些步驟讓我們覺(jué)得有些繁瑣。第九，我們來(lái)談?wù)勁渲圃噭┑膬?yōu)化。對(duì)于危險(xiǎn)品，我們一般就是低溫、避光、在規(guī)定情況下使用。這里所指危險(xiǎn)品，主要是指在一定條件下可發(fā)生爆炸的物質(zhì)。要注意在使用過(guò)程中的配伍禁忌。DEPC能與胺和巰基反應(yīng),因而含Tris和DTT的試劑不能用DEPC處理。如：PCR中常用到的試劑焦碳酸二乙酯（DEPC），可與氨反應(yīng)而產(chǎn)生致癌物。這樣就能盡可能地減少污染。四是長(zhǎng)期接觸有毒試劑的器具要放在專(zhuān)用的范圍內(nèi)。三是配制完畢，污染物及時(shí)投放到指定地點(diǎn)。這樣，就可以直接用手拿瓶壁外，而不擔(dān)心。這樣，有可能不小心用沾了有毒試劑的一次性手套接觸了其它瓶子，擴(kuò)大了污染的范圍。二是，試劑不要接觸到容器的外壁。第二，配制毒性試劑的防護(hù)。因?yàn)椴Ａ靠偸潜蝗酥貜?fù)利用，擔(dān)心有人在不知情的情況下誤用裝過(guò)有毒試劑的瓶子。第一，毒性試劑的容器要專(zhuān)用，并有醒目的標(biāo)志。嚴(yán)重的話(huà)，要去醫(yī)務(wù)室或醫(yī)院處理。如：有的有紅腫、疼痛、眼刺激性、特異性惡臭等。我們常常不可能百分之百不接觸到有毒物質(zhì)。３　了解中毒的癥狀針對(duì)不同毒物，我們有不同的措施。因此，了解其毒性機(jī)理，我們就會(huì)面對(duì)試劑心中有數(shù)，不至于太不重視，也不至于過(guò)分擔(dān)心。但不至于有生命之虞。但平常用的時(shí)候偶爾灑一點(diǎn)到皮膚上，我們清洗即可，也就沒(méi)有多大的擔(dān)心。這樣，我們對(duì)于毒性試劑心里有個(gè)底。這是防護(hù)的一個(gè)基本前提。下面我們來(lái)具體談一談如何在配制毒性試劑過(guò)程中防護(hù)自己。我們的身體也不是那么脆弱的，還有免疫系統(tǒng)在起作用。事實(shí)上，只要我們做到了安全防護(hù)，基本上也沒(méi)有多大問(wèn)題。對(duì)于局部毒性和一些臟器的慢性毒性，我們往往是不會(huì)特別地?fù)?dān)心。其它毒性：如：過(guò)敏、皮膚刺激等對(duì)我們而言，了解其毒性機(jī)制是很重要的。首先，我們來(lái)了解一下毒性的基本常識(shí)。如何解決試劑保存中出現(xiàn)的問(wèn)題呢？一般而言，除少數(shù)不影響使用的現(xiàn)象外，試劑都得重配。關(guān)于這一問(wèn)題，我們將在“如何追溯實(shí)驗(yàn)中試劑的問(wèn)題”章節(jié)中具體探討。C 生物學(xué)性質(zhì)的變化如：酶失活、生物分子降解等這種變化并不是一下就可以看出來(lái)的。同樣，像雙氧水等一些強(qiáng)氧化劑可通過(guò)類(lèi)似的檢測(cè)來(lái)判斷。固此硫酸已不可用。失去氧化性：有一次用濃硫酸做蒽酮硫酸法測(cè)多糖的含量，發(fā)現(xiàn)配好的試劑沒(méi)有反應(yīng)，沒(méi)出現(xiàn)應(yīng)有的顏色。B 化學(xué)性質(zhì)的變化如：PH的變化、失去氧化性、失去還原性PH的變化：當(dāng)懷疑試劑出現(xiàn)問(wèn)題的時(shí)候，我們可以測(cè)一下其PH。產(chǎn)生氣味：這主要是可能溶液中的物質(zhì)相互反應(yīng)產(chǎn)生了一些氣體，或者本身溶解其的中氣體跑了出來(lái)，也有的是本身固有的氣味變化。主要是保存不當(dāng)所致。如：明膠溶液，配制時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，有的就會(huì)變稀，這可能是明膠的質(zhì)量問(wèn)題。黏度變化：主要是一些高分子物質(zhì)的“溶液”。也有可能是顏色變淺。如：有一次我配一個(gè)新化合物，由于事先不了解，加溫快速溶解，置冰箱后，第二天發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)黃色。顏色變化：這一變化可能是在配制過(guò)程中加溫后，過(guò)一段時(shí)間出現(xiàn)的；也有可能是貯存過(guò)程中受光照所引起的；也有可能是溶液中各物質(zhì)相互作用所引起的。但要仔細(xì)觀察，如絮狀物是其它物質(zhì)，或者是菌絲，則不可用。一般來(lái)說(shuō)，酌情調(diào)整其的中乙醇濃度可以避免。比如，我有一次配含氯化鋅的多種離子的溶液，打開(kāi)冰箱發(fā)現(xiàn)有沉淀，置室溫下?lián)u勻后，已澄清，不影響使用。A 物理性質(zhì)的變化最常見(jiàn)的有：產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶、產(chǎn)生絮狀物、顏色變化、黏度變化、產(chǎn)生霉菌、產(chǎn)生氣味產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶：最常見(jiàn)的是一些緩沖液，當(dāng)溫度比較低的時(shí)候，可能有些物質(zhì)是飽和溶液，低溫可使其析出。有的稍加處理即可，不影響使用；有的則不能繼續(xù)使用，甚至產(chǎn)生毒性。第七，我們來(lái)談?wù)勗噭┍４嬷械某Ｒ?jiàn)問(wèn)題及解決方式。就像吃完飯要洗碗一樣。這是我們應(yīng)當(dāng)注意的。有些是在一小段落后將所用器具洗滌干凈。有些是必須取完后立即洗滌，以免別人或自己在污染的情況下誤用。要注意不要用過(guò)期的試劑。不然，實(shí)驗(yàn)出了問(wèn)題就虧大了。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，做同一類(lèi)實(shí)驗(yàn)時(shí)，我們通常會(huì)共用一些試劑。所以，配試劑時(shí)，盡量配足量，寧愿在一次實(shí)驗(yàn)后有剩余，而不能不足。因動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，講究的就是齊同對(duì)比。以移液管取液時(shí)，注意要洗滌，多余的液體不要返回瓶?jī)?nèi)，而應(yīng)放掉。二是要注意反復(fù)取用試劑時(shí)，不要污染。配好的試劑因大多以液體形式存在，其保質(zhì)期較原料試劑要短，易失效。關(guān)于試劑的使用，我只談?wù)勗瓌t上的一些注意事項(xiàng)。有的試劑是極易氧化的，通常要加抗氧劑。試制配好后大多數(shù)是要求冷藏的，且盡快使用。要注意取續(xù)濾液。因其在水中會(huì)較快失效。如：PMSF，要用異丙醇來(lái)配制?？蛇x擇黑紙或者黑塑料來(lái)包裹。DMSO也會(huì)出現(xiàn)類(lèi)似現(xiàn)象。有的試劑配制前要加溫。如：有些試劑在配制過(guò)程中要加熱至沸騰，溶劑損失不少，要待其冷卻至室溫再加溶劑補(bǔ)足。不然，一打開(kāi)蓋，試劑粉末就損失掉了。如：PCR、蛋白電泳中某些試劑就是極微量的裝在Doff管中，甚至基本看不見(jiàn)。配體積小的溶液，通常要用移液槍?zhuān)蛭⒘窟M(jìn)樣器。切忌不要用量杯。像配對(duì)照品溶液，一般是用容量瓶，而且要選合適的規(guī)格。濃度要準(zhǔn)確，要注意幾點(diǎn)。也可以讓別人知道其大致是否在有效期內(nèi)。這幾種方法可酌情選擇。也可以在醫(yī)用膠布上寫(xiě)上字，貼上去。也可以在紙上寫(xiě)好，然后貼上透明膠。所以注意要用油性筆寫(xiě)。有人喜歡用記號(hào)筆寫(xiě)上標(biāo)簽。二是標(biāo)簽。在買(mǎi)一些試劑盒的時(shí)候，我們通常能得到一些這樣的瓶子。因?yàn)橛猛炅司涂梢詠G棄。有時(shí)也可用一些高分子材料的瓶子裝試劑。酌情使用。極少量的試劑可以用子彈頭型的Doff管來(lái)裝。用得比較多的是玻璃瓶。一是配制試劑的容器的選擇。既已在前面有所述及，這里關(guān)于保存就不詳述了。第六，我們來(lái)談?wù)?配制好的試劑的使用和保存這個(gè)問(wèn)題在前面講到原料的保存時(shí)已提到過(guò)一些。不用時(shí)多以氯化鉀飽和溶液來(lái)保護(hù)電極。PH計(jì)的使用 有些對(duì)PH 要求比較精確的溶液是用要PH計(jì)來(lái)測(cè)定的。多以玻棒蘸取。要注意選用試紙的PH范圍。PH試紙的使用 有些溶液需要調(diào)PH值的。漏斗的使用 有些試劑配制后要求過(guò)濾方可作用。二是要注意是否加溫。更有甚者，把溫度計(jì)當(dāng)玻棒用，那是很不應(yīng)該的。要注意的是，不要讓玻棒觸底、觸壁，要讓溶液全部旋轉(zhuǎn)起來(lái)，而不要有死角。要注意燒杯的大小，加熱時(shí)要墊石棉網(wǎng)，加磁力攪拌器的攪拌子的大小要適宜，傾倒時(shí)不要漏液。C 其它器具的使用燒杯的使用 在配制試劑時(shí)通常要用到燒杯。只能吹干。用后可以乙醇液、蒸餾水洗滌，置于專(zhuān)用盒中。量程有20ul, 50ul,100ul不等。多用于液相的進(jìn)樣，蛋白電泳的進(jìn)樣。進(jìn)口的質(zhì)量較佳。使用時(shí)要定期校正。要小心調(diào)節(jié)槍的刻度盤(pán)。尤其在一些微量溶液的吸取，在需要嚴(yán)格避免污染的一些實(shí)驗(yàn)中，起到了不可替代的作用。熟練掌握將為我們的實(shí)驗(yàn)提高不少效率。熟能生巧。使用時(shí)要用洗耳球吸取，放下時(shí)由手指來(lái)控制其放出的容量。移液管是比較精確的。多用于配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液。它只有一些定量的大小規(guī)格。容量瓶比較精確。根據(jù)情況合理選擇。對(duì)于一些不需精確濃度的試劑的配制是可行的。B 量器的使用量器主要有：帶刻度燒杯、帶刻度試管、帶刻度吸管、量杯、量筒、容量瓶、移液管、移液槍、微量進(jìn)樣器。而多余的另裝則可能保質(zhì)期難以保證。而鱗狀的、顆粒狀的要注意小心稱(chēng)量。有的是顆粒狀的；有的是塊狀的。對(duì)于少數(shù)液體需稱(chēng)量的，多以滴管或移液器來(lái)添加。對(duì)于固體，一般要盡量以小勺搗至成粉末或小顆粒，再以牛角勺輕抖至稱(chēng)量紙上或容器中。四是稱(chēng)量剩余的固體及不小心灑落的液體要清除干凈。三是稱(chēng)量輔助器具。一是預(yù)先插電幾分鐘，至電子天平的屏幕顯示穩(wěn)定后再稱(chēng)量。天平的使用注意事項(xiàng)。要細(xì)心、耐心地調(diào)好。看了說(shuō)明書(shū)再來(lái)調(diào)可以使我們省去不少時(shí)間。其大前提是：放置天平的房間要控制溫濕度，放置天平的臺(tái)子要平。天平的調(diào)水平。當(dāng)然，小于其最小量程是稱(chēng)不出來(lái)的。每一個(gè)天平都有它的量程范圍。選擇1/1000的尚可，但要用1/10000的就沒(méi)必要，也不太合適了。天平有不同的精密度的，如：準(zhǔn)確到1g的、,1/100g,1/1000g,1/10000g, 1/100000g的。普通天平一般用于粗略的稱(chēng)量，大家都很熟悉；扭力天平也使用簡(jiǎn)單；光電分析天平現(xiàn)在用得較少。盡管有比較準(zhǔn)確的量程小的桿秤，但那是藥店里用的。將固體配制成試劑時(shí)，通常要用到衡器。A 衡器的使用在配制過(guò)程中，要使試劑符合我們的要求，還要用到如：玻棒、磁力攪拌器、PH試紙、分液漏斗、濾紙等器具。我們知道，試劑的原料大多數(shù)情況下是固體，少數(shù)的一部分是液體。貼上醒目而牢固的標(biāo)簽就容易識(shí)別。本人配制蛋白電泳緩沖液時(shí)，有一次將濃縮膠緩沖液與分離膠緩沖液恰好弄反了，導(dǎo)致失誤。二是要準(zhǔn)確測(cè)量PH值。主要是加入溶液中的物質(zhì)的順序。配制緩沖液時(shí)，要注意如下事項(xiàng)：1。如 ：取組織標(biāo)本時(shí)，通常要用生理鹽水或PBS來(lái)洗滌血跡。前面述及的STZ，必須在PH4～，故而要用緩沖液配制。而且PBS又可配成不同的PH值。這是因?yàn)?，有些試劑必須在一定的PH值條件下才能穩(wěn)定。緩沖液，嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，算不上溶劑，只能算一種分散介質(zhì)。有些試劑用一定濃度的乙醇來(lái)配效果比較好。復(fù)合溶媒，通常是指乙醇等親水性較強(qiáng)的溶劑與水互溶形成的混合物。要注意甲醇對(duì)眼睛的毒性，氯仿對(duì)肝臟的毒性。要注意有機(jī)溶劑的易燃性和毒性。做PCR時(shí)，用氯仿除蛋白。有時(shí)候，這些溶劑不需任何配制，本身就作為試劑來(lái)使用。多用分析純。用理較多的是乙醇、甲醇、丙酮、氯仿這三種。這類(lèi)玻璃容器一般都是用重鉻酸液浸泡，再洗滌。注意量器不能高溫烘烤，不然可致形變而量得不準(zhǔn)。雙蒸水可以達(dá)到無(wú)菌、無(wú)熱原的要求。最好是用雙蒸水。水，是用得最廣泛的溶劑。應(yīng)該說(shuō)，這是大家比較熟悉的一個(gè)問(wèn)題。通常與水以不同濃度混合，有時(shí)可達(dá)到比較滿(mǎn)意的效果。因此，物質(zhì)的溶解度如何，除了查閱相關(guān)的資料外，其實(shí)很重要的一點(diǎn)還是要自己動(dòng)手配制一點(diǎn)預(yù)試一下。然而，實(shí)際卻基本不溶。但往往會(huì)因?yàn)檫^(guò)于自信而忽略了一些特例。后來(lái)改用植物油稀釋?zhuān)Ч诲e(cuò)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)根本不混溶?？纯慈芙舛热绾?。三是要試。二是上網(wǎng)查詢(xún)。一是查看試劑包裝的說(shuō)明。但是，有些試劑我們并不知道。有些物質(zhì)的溶解性是我們所熟知的。要特別注意不要盲目加熱。能不用盡量不用。DMSO號(hào)稱(chēng)萬(wàn)能溶劑。助懸劑，如：羧甲基纖維素鈉（CMC－Na）；增溶劑，如：泊洛沙姆188；潛溶劑，如：乙醇。難溶性的：難溶性的有的是脂溶性比較高的，可以用油來(lái)配制。易溶性的：像絕大多數(shù)的酸、堿、鹽類(lèi)試劑，都是易溶性，且一般是水溶性的。又可分為脂溶性的親水性?xún)纱箢?lèi)。如果是液體試劑，則就要看它