【正文】 例如：蛋白電泳染不上色。我們所要做的，就是如何在實驗中進行排查，找到問題的根源。如果可能的話，盡量做到專人專用。而且最好用著名大公司的。但有些不是很常用的試劑確實一時找不到。我曾經(jīng)改變過考馬斯亮藍的配方。那么，什么樣的情況下，可以改變試劑的濃度呢？也就是說，不按書上或文獻中的，自己來改變呢？那前提就是：你必須知道方法的原理。這樣我們就會思索該如何改進？如何又快又好。如：做PCR的電泳槽，長期接觸到電泳液，EB等，須固定在一個范圍內(nèi)，不要到處亂放。在了解上述知識的基礎(chǔ)之上，我們來講一下配制毒性試劑的注意事項。像對于氯仿這樣的溶劑，我們知道其長期應(yīng)用可致脂肪肝。第八，我們來談?wù)動卸镜?、危險的試劑的配制及保存。一般而言，配制過程中注意操作，配好后置冷藏，短時間內(nèi)是不會出現(xiàn)霉菌的?？捡R斯亮藍如配制不當，即有可能出現(xiàn)藍色沉淀。五是試劑用完后，相關(guān)器具要洗滌。一是配好后盡快使用。如：冰醋酸在溫度16度以下，是結(jié)成凍塊了，要緩緩加溫后使用。三是濃度的準確性。像玻璃瓶倒好像有些舍不得。這方面，有專門的書可參考。有人經(jīng)常用玻棒把燒杯攪得嘩啦嘩啦響，以為如此就溶得快，其實這樣易把燒杯打破。有進口的和國產(chǎn)的。如：10ml，25ml，50ml，100ml等等。固體有的是結(jié)晶狀的，結(jié)晶有多種形態(tài)，像針晶、柱晶、小鱗片狀晶等等。要認真閱讀說明書來調(diào)平。衡器一般是天平。嚴格按照說明進行。盡管這些毒性遠不如致癌的試劑毒性大，但也不可忽視。配制水溶性的試劑時，要注意相關(guān)容器的洗滌、滅菌。有時候，我們學(xué)藥理的中可能有些化學(xué)好一點，覺得從結(jié)構(gòu)上來看就知道其溶解性的規(guī)律。一是有些物質(zhì)一加熱就變質(zhì)了，產(chǎn)生了分解產(chǎn)物；二是有些物質(zhì)加熱就失效了，如一些酶或蛋白質(zhì)類的物質(zhì)。這是對大多數(shù)固體試劑而言。如有不對，可再聯(lián)系供應(yīng)商。第三，要知道如何處理不幸染上這些原料。深低溫保存一般適合于需要在較長時間內(nèi)保持活性的物質(zhì)。常溫保存的試劑原料，放在實驗室存放試劑的柜子中即可。或者實驗進行中，突然發(fā)現(xiàn)試劑已不可用，則可能導(dǎo)致整個實驗的失敗。通常，我們在稱量10mg以下的物質(zhì)時，是很難準的。其實這二者差別不大。可以另開專題討論。按其用途來分，可分為：藥物：通常就是我們要考察其藥效或機制的化合物或中草藥提取物。而泛泛而談，雖能總括一般的規(guī)律，但也許戰(zhàn)友們得不到最貼心、最具實用價值的信息。那可以這樣說，此藥的LD1肯定是比這個MTD要大的。因此，藥效學(xué)的劑量高的可以取到LD50的1／10，甚至1／5。 .如果S=5, 。如何用數(shù)學(xué)的模型或是公式來描述這樣一種“濃度－效應(yīng)關(guān)系”呢？早已有人對此進行了研究。只是有個預(yù)試過程。在前面的貼子中，我們討論了常用實驗動物的劑量換算的問題。尤其是口服和靜注之間有時按上述折算給藥時，血藥濃度相差太大。認為肌注相當于靜脈的80％，皮下相當于靜脈的50％。在此不再討論。另有計算體表面積的經(jīng)驗公式如下：體表面積（m2）=身高（cm）+體重(kg)這是較為適合我國人的公式。畢竟，臨床才是最重要的。我們國人的平均體重是否能達到70kg？難道我們都能吃得這么好？這恐怕不是太合理。按折算系數(shù)算出來，劑量是八九不離十的。易知：B＝. 那就是說，在這個體重范圍內(nèi)的大鼠，劑量打九折就行了。這兩個函數(shù)在什么時候相等呢？　很顯然，就是當X＝。哪一種計算結(jié)果更準確呢？當然是按實際的體表面積來算。如果實驗動物的體重與此相差比較大，按剛剛我們所講的體型公式計算，與按折算系數(shù)計算的結(jié)果，就會有較大的偏差。大鼠對血管阻力藥敏感，卻對強心苷類不敏感，而貓對強心苷類則很敏感；大鼠對缺乏維生素及氨基酸敏感，因能自行合成維生素C，故對缺乏維生素C不敏感，而豚鼠對缺乏維生素C及變態(tài)反應(yīng)特別敏感。很多研究指出：基礎(chǔ)代謝率、熱卡、肝腎功能、血藥濃度、血藥濃度_時間曲線的曲線下面積（AUC）、肌酐（Cr）、Cr清除率、血液循環(huán)等都與體表面積基本成正比，因此按照動物體表面積計算藥物劑量比體重更為合理。盡管在這個表中，成人的標準體重設(shè)為70kg。在這里，我們要看到每種動物的體重（包括人），在上表中以藍色顯示的。另一種方法就是根據(jù)自己或文獻上有關(guān)急性毒性的數(shù)據(jù)來進行估算，以期采用合適的劑量。第一、等效劑量系數(shù)折算法換算第二、體表面積法換算第三、系數(shù)折算法與體表面積法的比較第四、系數(shù)折算法的相對誤差第五、小孩與成人的劑量換算第六、少常用實驗動物劑量間的換算第七、不同給藥途徑間的劑量換算第八、LD50與藥效學(xué)劑量間的換算下面我來簡單說一下這個問題。X mg/kg.兔的劑量＝X mg/kg70kg＝不信，你可以用體表面積的公式來算，結(jié)果是相差無幾的。以上所述，一方面是想說明按體表面積算劑量的準確性；另一方面，是想表明通過折算系數(shù)后，以體重為參照，在一定范圍內(nèi)還是實用的，且方便。遇到有很大種屬差異的藥物或化合物，上述換算關(guān)系就相差很大了。這個公式的發(fā)表，可以說，對于科學(xué)界起到了一個很好的推動作用。而我們按折算系數(shù)計算的時候，是直接按體重給藥的。設(shè)人的劑量為U mg/kg, 體重為70kg。誤差為正。我們知道，要把體重轉(zhuǎn)化成體表面積，要用到計算器。在此，當我們了解了其中的相對誤差后，就會有選擇依據(jù)了?？戳艘陨系恼撌龇N種，您是否已有了上述感受呢？現(xiàn)在，您就可以放心地用我編的那個簡表了。成人體重一般按70kg算。但是，小孩由于發(fā)育不完全，尤其是肝臟這一承擔主要藥物代謝的器官發(fā)育不完全，實際上小孩比成人要敏感。而我們常常主要關(guān)注的是吸收程度。因為每種藥物的生物利用度是不一樣的。那么，在多大的面積上給多少藥才與臨床差不多等效呢？關(guān)于這個問題，我們只討論皮膚給藥的。通過查文獻我們可以找到。就是說，把引起5％實驗動物死亡的劑量定為藥效學(xué)最高劑量。相應(yīng)地，LD5則為死亡率為5％時的效應(yīng)；LD1則為死亡率為1％時的效應(yīng)；LD50則為死亡率為50％時的效應(yīng)。而且，我更趨向于保守地估計。是否可以考慮將LD50的1／100作為長毒試驗的低劑量？我覺得上式有一定的參考意義。所以，沒有必要用那么高的劑量。系列貼子中如有不當之處，請各位不吝指出！from dxy首先，我們來了解一下動物實驗中需要用到的試劑的類型動物基本操作用試劑：如：麻醉用試劑、動物除毛的試劑硫化鈉、動物標記的試劑苦味酸、取血或插管用的試劑肝素、消毒用的75％乙醇、碘伏、新潔爾滅、動物手術(shù)后護理的抗生素等。有些緩沖液，尤其是做離體實驗的，一般低溫保存下盡快地用完。如：青霉素的基準物質(zhì)稱為標準品，而氧氟沙星的基準物質(zhì)則稱為對照品。按其毒性，有無毒、低毒、中等毒性、劇毒幾種。這對以后配制試劑時的稱量有一定的影響。當然，這是指部分含水的試劑原料而言。有的是產(chǎn)生血液毒性，如：苯，對粒細胞有影響。有些可自己去試劑原料店購買。要量體裁衣。助懸劑，如：羧甲基纖維素鈉（CMC－Na）；增溶劑，如：泊洛沙姆188；潛溶劑，如：乙醇。三是要試。應(yīng)該說，這是大家比較熟悉的一個問題。有時候，這些溶劑不需任何配制，本身就作為試劑來使用。而且PBS又可配成不同的PH值。我們知道，試劑的原料大多數(shù)情況下是固體，少數(shù)的一部分是液體。每一個天平都有它的量程范圍。三是稱量輔助器具。對于一些不需精確濃度的試劑的配制是可行的。熟練掌握將為我們的實驗提高不少效率。只能吹干。要注意選用試紙的PH范圍。極少量的試劑可以用子彈頭型的Doff管來裝。也可以在紙上寫好，然后貼上透明膠。如：PCR、蛋白電泳中某些試劑就是極微量的裝在Doff管中，甚至基本看不見。要注意取續(xù)濾液。所以，配試劑時，盡量配足量，寧愿在一次實驗后有剩余，而不能不足。第七，我們來談?wù)勗噭┍４嬷械某Ｒ妴栴}及解決方式。也有可能是顏色變淺。同樣，像雙氧水等一些強氧化劑可通過類似的檢測來判斷。我們的身體也不是那么脆弱的，還有免疫系統(tǒng)在起作用。３　了解中毒的癥狀這樣，有可能不小心用沾了有毒試劑的一次性手套接觸了其它瓶子，擴大了污染的范圍。這里所指危險品，主要是指在一定條件下可發(fā)生爆炸的物質(zhì)。但如果我們知其原理，就可以配成混合液，一并加入。因此，在對實驗原理及步驟很熟悉的情況下，實驗中可不拘泥于書本，完全可以自行掌握。這就成了我實驗中的最佳濃度。如果等到實驗已經(jīng)做完才發(fā)現(xiàn)，往往于事無補。尤其在一個大的實驗階段，為保證實驗中的齊同對比，最好一次購進所需試劑，不要中途少了再趕。五是注意試劑使用的操作規(guī)程。比如：在做蛋白電泳時，假如你懷疑細胞裂解液有問題。有時候，在實驗中會出現(xiàn)。二是替換法。要區(qū)分開來，寫好標識。在摸索階段，我們可能想各種的試劑都試一下效果，這可以理解。甚至只有當實驗結(jié)果出出異常的時候，我們才會想起可能是試劑有問題。于是，在原配方的基礎(chǔ)上，我配制了幾種不同的考馬液，試了幾塊膠。在試劑不很足的情況下，可以把試劑和標本蛋白量都減至２／３，甚至一半，同樣可以測出蛋白含量，只要濃度在它的檢測范圍內(nèi)。每次加的時候，因為一次誤差，可能各種試劑的比例有差異。要注意在使用過程中的配伍禁忌。二是，試劑不要接觸到容器的外壁。針對不同毒物，我們有不同的措施。事實上，只要我們做到了安全防護，基本上也沒有多大問題。固此硫酸已不可用。如：有一次我配一個新化合物，由于事先不了解，加溫快速溶解，置冰箱后，第二天發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)黃色。就像吃完飯要洗碗一樣。因動物實驗中，講究的就是齊同對比。因其在水中會較快失效。配體積小的溶液，通常要用移液槍，或微量進樣器。所以注意要用油性筆寫。用得比較多的是玻璃瓶。PH試紙的使用 有些溶液需要調(diào)PH值的。用后可以乙醇液、蒸餾水洗滌，置于專用盒中。熟能生巧。B 量器的使用量器主要有：帶刻度燒杯、帶刻度試管、帶刻度吸管、量杯、量筒、容量瓶、移液管、移液槍、微量進樣器。一是預(yù)先插電幾分鐘，至電子天平的屏幕顯示穩(wěn)定后再稱量。選擇1/1000的尚可，但要用1/10000的就沒必要，也不太合適了。貼上醒目而牢固的標簽就容易識別。這是因為，有些試劑必須在一定的PH值條件下才能穩(wěn)定。多用分析純。通常與水以不同濃度混合，有時可達到比較滿意的效果。二是上網(wǎng)查詢。難溶性的：難溶性的有的是脂溶性比較高的，可以用油來配制。不同批號也可能有差異。一是自己去試劑供應(yīng)點購買或者領(lǐng)取。對于毒性原料，首先是要了解其毒性的機制，做到心中有數(shù)。低溫冷藏的要注意兩點：一是不要把該冷凍的來冷藏。有的是顆粒狀的；有的是塊狀的。動物實驗中，用到分析純及以上級別的比較多。特此將二者區(qū)分如下：對照品、標準品系指用于鑒別、檢查、含量測定的基準物質(zhì)。可隨溫度、氧氣的作用而逐漸分解而達不到使用的要求。液體狀態(tài)的較少。各位參與討論的戰(zhàn)友，請著重講述某具體試劑你是如何配制的？要注意些什么細節(jié)問題。為什么可以這樣做呢？因為，當劑量達到MTD時，可能藥效早已達到了最高點。只要遵循了這些原則就可以了。我們希望在做藥效學(xué)實驗時，動物的死亡率不要超過5％，最好不要超過1％。上式中，以LD50代替EC50，以LD代替C，則得：那么，什么樣的情況下可以滿足這樣一個要求呢？我覺得，就是：當藥物差不多剛剛引起毒性反應(yīng)時的劑量設(shè)為藥效學(xué)的最高劑量，再往下以等比遞減。第二，有臨床用量的，折算到動物。如：想考察一種藥物對燒傷的作用。而且吸收一般可達靜注的80～85％。吸收的速度反反與藥物的達峰時間相關(guān)聯(lián)。值得注意的是：以上所述是按照成人與小孩的等效劑量來刻板地計算的。當然，成人自己或醫(yī)生可以根據(jù)療效調(diào)整用藥劑量。而原有的計算方法為：實驗動物用劑量＝人的劑量＊70＊折算系數(shù)／動物體重。按此表來計算，結(jié)果不會差到哪里去。B＝這只是理論推算，除極少數(shù)情況外，實際體重太大的恐怕不能用于實驗。這個表的編制，就是為了方便廣大科研工作者。這個誤差應(yīng)為相對誤差。還有一種誤差是我們在實驗中實際給藥時，由于稱體重、給藥時的不準而產(chǎn)生的，那就不是我們在這里要探討的問題了。我們是應(yīng)當按體表面積來計算劑量的。這個按體型系數(shù)計算體表面積的公式被稱為Mech公式。這是我們所應(yīng)當摒棄的。1958年P(guān)inkle氏報告6MP等抗腫瘤藥物在小鼠、大鼠、狗和人身上的治療劑量，按mg/kg計算時差距甚大，但如改為按mg/m2體表面積計算，就都非常接近。這是誤解。這個表，幾乎被藥理專業(yè)的人們奉為經(jīng)典，一直在科研中沿用。但對于非藥理專業(yè)但又需做藥理實驗的戰(zhàn)友來說，仍然是令人困擾的問題。至于該選擇LD50的多少分之一來作為參考劑量，眾說紛紜。將人的劑量轉(zhuǎn)換成哪種動物的，就在相應(yīng)的動物那一列下找到與人的相交的地方的折算系數(shù)，將劑量乘以折算系數(shù)，再乘上人的體重與那種動物體重的比值。這樣，我們不必去翻閱厚重的藥理實驗參考書，也不必在初涉實驗時茫然無措了。在目前沒有更好的、也沒有更方便的換算方法的前提下，我們可以把當前這種折算關(guān)系當作一種重要的參考。如果機械地按等效劑量去算，可能難以達到理想的效果。下面我們來算一下，各種動物之間的體表面積比。當大鼠的體重為180g, 250g ,300g ,350g,400g時，那么它的劑量根據(jù)體型系數(shù)計算實際體表面積應(yīng)是多少？而按我們前面所說的折算系數(shù)算又是多少？它們之間相差有多大？　當大鼠體重在哪個范圍內(nèi)波動時，上述折算系數(shù)仍然基本準確呢？這個問題我們再進一步探討。尤其是對非藥理、實驗動物專業(yè)方面的戰(zhàn)友來說。如下圖所示：我們知道，一般用于實驗的大鼠，其體重大多在150~350g之間。我們大多數(shù)情況下，大鼠在實驗期間的體重在180~250g。B＝。也就不必經(jīng)常來論壇里問劑量了咯～～～這樣一來，這個表就得進行修正。目前，我們對于成人的劑量常常是沒有考慮體表面積的。還有些其它方法，因計算稍微復(fù)雜，在臨床上不實用。而且，有時候我們想知道不同的給藥途徑之間的效果相差有多大？以什么樣的比例給予能使不同給藥途徑之間的效果差不多呢？比如：某藥，可靜脈注射，也可以腹腔注射，我們想把靜脈途徑改為腹腔，到底給多少藥比較合適呢？或者，把靜脈的改成口服，又大概是多少呢？這些問題，許多實驗書上并沒有定論?？诜话闵锢枚瓤捎?