多重不對稱擴增介紹(文件)
【正文】 更加 舉步維艱， 最終導(dǎo)致擴增產(chǎn)物量非常之小，以至于無法檢測。 ? 前期引物設(shè)計時減少最佳退火溫度的差異，最佳退火溫度的差異不超過 3~5176。 引物擴增效率 ? 這個因素很重要，但也很籠統(tǒng)，它也許包含了上面提到的幾個因素，但更多的 因素還 不清楚 。這對引物分別稱為非限制性引物和限制性引物。 缺點 ? 前期 1020循環(huán)相當(dāng)于對稱擴增，單鏈 DNA在此之后才會出現(xiàn)，從而導(dǎo)致 PCR擴增循環(huán)數(shù)增加，靈敏度較對稱性擴增低。 ? 不對稱 PCR設(shè)計在于控制限制性引物（低濃度引物）的絕對量，限制性引物過多或過少，均不利于SSDNA的制備。通過金納米顆粒介導(dǎo)進行的不對稱 PCR，可以獲得與普通不對稱 PCR更好的效果。 ? PP5/Oligo 6+ OMP 6（目前芯片組設(shè)計多重不對稱擴增采用的軟件） 多重不對稱 PCR步驟 引物設(shè)計（ PP5/OLIGO6) BLAST驗證引物特異性 OMP軟件驗證引物二聚體評價 每對引物進行單擴并驗證不對稱擴增引物最佳比例 將所有引物并入一貫體系進行實驗驗證 選出出現(xiàn)問題的引物進行重新設(shè)計 。
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