【正文】 解質(zhì)對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響。3．取上清液和沉淀物懸液，分別滴一滴于干凈載玻片上(分別標(biāo)記④、⑤涂片)，％詹納斯綠B染液蓋上蓋片染20分鐘。6．將①、②、③涂片用l％甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，／／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。先用低速使較大的顆粒沉淀，再用較高的轉(zhuǎn)速，將浮在上清液中的顆粒沉淀下來(lái)，從而使各種細(xì)胞結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞核、線粒體等得以分離。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞內(nèi)不同結(jié)構(gòu)的比重和大小都不相同，在同一離心場(chǎng)內(nèi)的沉降速度也不相同，根據(jù)這一原理，常用不同轉(zhuǎn)速的離心法，將細(xì)胞內(nèi)各種組分分級(jí)分離出來(lái)。分離細(xì)胞器最常用的方法是將組織制成勻漿，在均勻的懸浮介質(zhì)中用差速離心法進(jìn)行分離，其過(guò)程包括組織細(xì)胞勻漿、分級(jí)分離和分析三步，這種方法已成為研究亞細(xì)胞成分的化學(xué)組成、理化特性及其功能的主要手段。由于樣品中各種大小和密度不同的顆粒在離心開(kāi)始時(shí)均勻分布在整個(gè)離心管中，所以每級(jí)離心得到的第一次沈淀必然不是純的最重的顆粒，須經(jīng)反復(fù)懸浮和離心加以純化。3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨3～5次，用3層紗布過(guò)濾勻漿液于離心管中，然后制備一張涂片①，做好標(biāo)記，自然干燥。(二)結(jié)果分別于高倍鏡下觀察三張涂片，描述鏡下所見(jiàn)。(二)結(jié)果油鏡下觀察，顆粒狀的線粒體被詹納斯綠B染成藍(lán)綠色。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞膜在不斷變化的環(huán)境中必須保持自身的穩(wěn)定狀態(tài)才有生存。將紅細(xì)胞放在某些等滲鹽溶液中，由于紅細(xì)胞膜對(duì)各種溶質(zhì)的通透性不同，膜兩側(cè)的滲透壓平衡會(huì)發(fā)生改變，也會(huì)發(fā)生溶血現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察紅細(xì)胞溶血現(xiàn)象時(shí)間的不同來(lái)記錄滲入速度，從而測(cè)量各種物質(zhì)通透性的差別。記錄發(fā)生溶血（可以通過(guò)試管壁看清實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)上的字為標(biāo)準(zhǔn)）的時(shí)間（自加入稀釋血液到溶液變成紅色透明澄清所需的時(shí)間）。，所以將溶血時(shí)間適當(dāng)?shù)匮娱L(zhǎng)至15min，15min時(shí)仍然不溶即判斷為不溶血。實(shí)驗(yàn)三 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與幾種細(xì)胞器的觀察一,實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谄胀ü鈱W(xué)顯微鏡下識(shí)別細(xì)胞和細(xì)胞器的形態(tài)結(jié)構(gòu),實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞在形態(tài)上是多種多樣的,有球形,橢圓形,扁平形,立方形,梭形,但是它們卻有共同的基本結(jié)構(gòu)特點(diǎn),都由細(xì)胞膜(動(dòng)物),細(xì)胞壁(植物),如線粒體,高爾基體,中心體,核仁,染色體等,一般經(jīng)過(guò)一定固定染色處理后,實(shí)驗(yàn)材料洋蔥根尖切片 小白鼠肝切片 兔神經(jīng)節(jié)切片 馬蛔蟲(chóng)受精卵切片 四,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)洋蔥根尖切片細(xì)胞的觀察先用低倍鏡觀察根尖的縱切面,注意分生區(qū),伸長(zhǎng)區(qū),成熟區(qū)細(xì)胞的異同,然后再仔細(xì)觀察細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),特別要注意細(xì)胞的形狀,大小,以及細(xì)胞壁,細(xì)胞核,核仁,細(xì)胞質(zhì),液泡的形態(tài)結(jié)構(gòu).(2)兔神經(jīng)節(jié)細(xì)胞切片高爾基體的觀察先在低倍鏡下找到兔神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,然后轉(zhuǎn)用高倍鏡觀察,可看到細(xì)胞內(nèi)淡黃色的背景上有黃褐色或者透明的細(xì)胞核,核的周?chē)植贾S多深褐色的(硝酸銀鍍?nèi)?高爾基體,呈彎曲的線狀,顆粒狀,少量分散在細(xì)胞質(zhì).(3)小白鼠肝細(xì)胞切片線粒體的觀察先用低倍鏡后用高倍鏡觀察,可見(jiàn)到許多肝小葉,每小葉有許多緊密排列成索狀的多角形的肝細(xì)胞,轉(zhuǎn)用油鏡觀察,可見(jiàn)到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分布著許多被蘇木精染成深紫色的線粒體,呈顆粒狀和線狀.(4)馬蛔蟲(chóng)受精卵切片中心體的觀察取馬蛔蟲(chóng)受精卵切片,在顯微鏡下找到充滿子宮腔的受精卵,每個(gè)馬蛔蟲(chóng)受精卵外圍有一層較厚的卵膜,膜內(nèi)有寬大的圍卵腔,在細(xì)胞中央被染成藍(lán)色條狀或棒狀的結(jié)構(gòu),亦被染成藍(lán)色的小粒,圖一, 洋蔥根尖細(xì)胞圖圖二, 兔的神經(jīng)細(xì)胞中高爾基體 圖三, 小白鼠肝細(xì)胞切片示線粒體圖四, 馬蛔蟲(chóng)受精卵切片示中心體生物繪圖應(yīng)注意的問(wèn)題,先要把顯微鏡下的圖象觀察清楚,再根據(jù)繪圖的要求,安排好圖紙的布局,看到什么繪什么,不要隨意增多或減少,整齊,要用細(xì)的直線標(biāo)示在圖的右邊, ，并比較它們兩者有何不同。：每組配備：眼科鑷和眼科剪各2把，皮頭吸管1支，5ml燒杯2個(gè)，載玻片（每人一片），蓋玻片，擦鏡紙，吸水紙，擦鏡液。在無(wú)性生殖時(shí)，可在顯微鏡下看到草履蟲(chóng)胞體被染成粉紅色，細(xì)胞核染成紫紅色。（此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備）：取出根尖放在載玻片上，滴加1mol/L HCl（60℃）于根尖上，水解8 min，蒸餾水水洗3次（將酒精洗去，以利于染色）。選擇生長(zhǎng)區(qū)的細(xì)胞觀察，可見(jiàn)這一部位的細(xì)胞染色較深，緊密排列成一行行的四方形。隨著染色體不斷螺旋縮短變粗，可見(jiàn)每條線狀的染色體是由兩條姐妹染色單體組成?！緦?shí)驗(yàn)原理】 細(xì)胞融合（cell fusion）又稱(chēng)體細(xì)胞雜交，是指用人工方法使兩個(gè)或兩個(gè)以上的體細(xì)胞融合成異核體細(xì)胞，隨后，異核體同步進(jìn)入有絲分裂，核膜崩潰，來(lái)自?xún)蓚€(gè)親本細(xì)胞的基因組合在一起形成只含有一個(gè)細(xì)胞核的雜種細(xì)胞（hybrid cell）。③電場(chǎng)誘導(dǎo)的細(xì)胞融合；④激光誘導(dǎo)的細(xì)胞融合。融合的頻率和活力與所用PEG的相對(duì)分子質(zhì)量、濃度、作用時(shí)間、細(xì)胞的生理狀態(tài)與密度等有關(guān)。2）GKN液： NaCl， KCl， Na2HPO4②讓PEG冷卻至50～60℃，勿讓其凝固。7H2O 葡萄糖 CaCl2 ，溶于30～50ml的重蒸水中。6）詹納斯綠染液。最后，棄去上清液，加入2000μl的GKN溶液制成雞血細(xì)胞懸液。棄去上清液，用手指輕彈離心管底部，使沉淀的血細(xì)胞團(tuán)塊松散。棄去上清液，加Hanks液，再離心一次，棄多數(shù)上清，留少許溶液，混勻。計(jì)算細(xì)胞融合率細(xì)胞融合率是指在顯微鏡的視野內(nèi)，已發(fā)生融合的細(xì)胞其細(xì)胞核總數(shù)與視野內(nèi)所有細(xì)胞（包括已融合細(xì)胞）的細(xì)胞核總數(shù)之比，通常以百分比表示，而且要進(jìn)行多個(gè)視野測(cè)定；進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。有些抗凝劑中含有和Ca2+結(jié)合的化合物，比如Alsver液中檸檬酸鈉的酸根與血液中的Ca2+形成難解離的可溶性絡(luò)合物，導(dǎo)致血液中的Ca2+濃度降低，故起抗凝血作用，同時(shí)會(huì)造成細(xì)胞的融合率較低?！咀饔谩慨?huà)出觀察到的融合細(xì)胞，并計(jì)算融合率。（2）前處理將材料浸入蒸餾水內(nèi)，放置冰箱（0～4℃）中24小時(shí)。（4）解離將固定后的根尖用清水漂洗數(shù)次，用1摩爾/升鹽酸在60℃