重組dna技術(shù)1-wenkub
2022-11-28 23:21:28 本頁(yè)面
【正文】 ?延伸 ： 以目的基因?yàn)槟０?，合成互補(bǔ)的新 DNA鏈 ? 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （ PCR） ?每一輪聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可使目的基因片段增加一倍 ?30輪循環(huán)可獲得 —— 230（ 109)個(gè)基因片段 PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ) ? PCR技術(shù)的發(fā)明 ? PCR的發(fā)明是 DNA操作技術(shù)的革命 ? 美國(guó) Mullis教授 開(kāi)汽車(chē)時(shí)的聯(lián)想 逶迤崎嶇的山路 —— DNA雙螺旋 行駛的汽車(chē) —— 一小段 DNA引物 …… 1988年發(fā)明了 PCR技術(shù) 1993年獲得諾貝爾獎(jiǎng) ? 基因重組和克隆操作最重要的工具是： 和 主菌 ? 微量的目的基因必須經(jīng)過(guò)基因克隆獲得大量的拷貝后 ， 才能實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步的重組 、 轉(zhuǎn)化和表達(dá)等操作 。 ? 基因組 DNA文庫(kù)的構(gòu)建 將總 DNA經(jīng)過(guò)酶解 ， 經(jīng)蔗糖梯度離心或瓊脂糖凝膠電泳分離不同長(zhǎng)短的 DNA片段 。 ?基因工程可使另一種生物獲得新的遺傳性狀或表達(dá)所需要的產(chǎn)物 。11 重組 DNA技術(shù) 重組 DNA技術(shù)是基因工程的核心技術(shù) 獲得需要的目的基因 （ 外源基因 ） 構(gòu)建重組質(zhì)粒和基因克隆 轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞和轉(zhuǎn)化子的篩選 轉(zhuǎn)化子的分析 —— Southern雜交 重組 DNA技術(shù) ， 又稱(chēng)為 基因克隆 或 分子克隆技術(shù) ， ? 克隆 (clone)無(wú)性繁殖 ? 分子克隆 – DNA的無(wú)性繁殖技術(shù) ? 重組 DNA技術(shù) 包括了一系列的分子生物學(xué)操作步驟 。 ? 重組 DNA操作 一般步驟： （ 1）獲得目的基因； （ 2）與克隆載體連接，形成新的重組 DNA分子； （ 3）用重組 DNA分子轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞，并能在受體細(xì)胞中復(fù)制和遺傳； （ 4）對(duì)轉(zhuǎn)化子篩選和鑒定； （ 5）對(duì)獲得外源基因的細(xì)胞或生物體通過(guò)培養(yǎng)，獲得所需的遺傳性狀或表達(dá)出所需要的產(chǎn)物。 包含的基因組片段分別克隆在質(zhì)?；蚴删w載體上 ， 轉(zhuǎn)染細(xì)菌或體外包裝到噬菌體顆粒上便構(gòu)成了該生物的基因組文庫(kù) 。 構(gòu)建重組質(zhì)粒 DNA和基因克隆 ? 限制性內(nèi)切酶 ? 限制性內(nèi)切酶 是從細(xì)菌中分離提純的 核酸內(nèi)切酶 ，可以識(shí)別并切開(kāi)核酸序列特定位點(diǎn) —— 分子手術(shù)刀 ? Arber、 Smith和 Nathans因?yàn)樵诎l(fā)現(xiàn)限制性內(nèi)切酶方面開(kāi)創(chuàng)性工作而共同獲得了 1978年的諾貝爾獎(jiǎng) 。 質(zhì)粒 質(zhì)粒載體 的一般結(jié)構(gòu) DNA克隆常用載體 ? 基因克隆獲得大量目的基因后 ， 就要使其在合適的宿主細(xì)胞 中表達(dá) ， 產(chǎn)生需要的基因表達(dá)產(chǎn)物或使宿主生物具備所需的性狀 ， 同時(shí)目的基因還能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳 。 ? 通過(guò) DNA體外重組技術(shù)構(gòu)建的重組質(zhì)粒還可以直接用以轉(zhuǎn)化藍(lán)藻
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1