分子生物學(xué)技術(shù)之dna重組技術(shù)-wenkub
2023-02-13 20:09:39 本頁面
【正文】 調(diào)了外源核酸分子在另一種不同的寄主細胞中的繁衍與性狀表達。 第五章 分子生物學(xué)技術(shù)DNA重組技術(shù)及應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)的快速發(fā)展，得益于上個世紀中葉以來研究方法、特別是基因操作和基因工程技術(shù)的進步。事實上，這種跨越物種屏障、把來自其它生物的基因置于新的寄主生物細胞之中的能力，是基因工程技術(shù)區(qū)別于其它技術(shù)的根本特征。 圖 51 幾種主要 DNA內(nèi)切酶所識別的序列及其酶切末端 。載體三要素：? 自我復(fù)制能力；? 攜帶外源基因片段大?。ň哂休^小的分子量和較高的拷貝數(shù)）；? 插入位點多少（具有若干限制酶單一識別位點）；易于鑒定識別（具有抗菌素抗性基因）大腸桿菌質(zhì)粒載體 : pSC101質(zhì)粒載體? 低拷貝數(shù)嚴緊型復(fù)制控制的大腸桿菌質(zhì)粒載體，平均每個寄主細胞僅有 1~2個拷貝。是第一個真核基因克隆載體。? 而松弛型質(zhì)粒 DNA卻繼續(xù)復(fù)制數(shù)小時，使每個寄主細胞中 ColE1質(zhì)粒的拷貝數(shù)達到1000~3000個，占細胞總 DNA的 50% 左右。具有兩種抗生素抗性基因以用作轉(zhuǎn)化子的選擇記號。在 pBR322基礎(chǔ)上構(gòu)建 pUC質(zhì)粒載體時，僅保留下其中的氨芐青霉素抗性基因及復(fù)制起點，其分子小了許多， pUC8為 2750bp， pUC18為 2686bp。因此，可用 Xgal顯色法實現(xiàn)對重組體轉(zhuǎn)化子的鑒定。 含有兩個噬菌體啟動子（ T7和 SP6），為RNA聚合酶的附著作用提供了特異性的識別位點。 pBluescript噬菌粒載體 pBluescript是指由 Stratagene公司發(fā)展的一類從 pUC載體派生而來的噬菌粒載體，簡稱為pBS（ +/），如今則更多地叫作 pBluescript KS（ +/
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