分子生物學(xué)基本技術(shù)—pcr(polymerasechainreaction)-wenkub
2023-01-20 03:23:11 本頁(yè)面
【正文】 CTGCGACCTAGC 3’ DNA 聚合酶 DNA 聚合酶 回憶： DNA 的復(fù)制 …… 變變變變變變90變95變40變60變70變75變PCR簡(jiǎn)要過(guò)程圖解 PCR詳細(xì)過(guò)程圖解 1 2 3 4 5 22 55 72 94 時(shí)間（ min） 溫度 （ ℃ ） 適溫延伸 3 高溫變性 1 低溫退火 2 重復(fù) 1~3步 25~30輪 目的 DNA片段 擴(kuò)增 100萬(wàn)倍以上 DNA雙螺旋 DNA單鏈 與引物復(fù)性 DNA變性 形成2條單鏈 子鏈延伸 DNA加倍 模板 DNA 95℃ 1 50℃ 引物 1 引物 2 DNA引物 2 引物 1 引物 2 DNA引物 72℃ Taq酶 Taq酶 3 第 1輪結(jié)束 95℃ 第 2輪開(kāi)始 4 72℃ Taq Taq Taq Taq 5 PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過(guò)程 ? PCR的特點(diǎn) 模板 DNA 第 1輪擴(kuò)增 第 2輪擴(kuò)增 第 3輪擴(kuò)增 第 4輪擴(kuò)增 第 5輪擴(kuò)增 第 6輪擴(kuò)增 三、 Primer design引物常規(guī)設(shè)計(jì)原則 1. 長(zhǎng)度： 1537 nt, 一般 20nt左右 。 ? 1988年 Saiki 等從溫泉中分離的一株水生嗜熱桿菌 (thermus aquaticus) 中提取到一種耐熱 DNA聚合酶。分子生物學(xué)基本技術(shù) — PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR(Polymerase Chain Reaction) ? 一、歷史及其發(fā)展 ? 二、 PCR的基本原理 ? 三、 Primer design引物常規(guī)設(shè)計(jì)原則 ? 四、 PCR反應(yīng)體系 ? 五、 PCR反應(yīng)條件優(yōu)化（ PCR optimization) ? 六、 PCR反應(yīng)特點(diǎn) ? 七、 PCR產(chǎn)物的分析 ? 八、 Molecular marker ? 九、 PCR技術(shù)的應(yīng)用 分子生物學(xué)技術(shù)體系 ? 基本技術(shù) ?基因及產(chǎn)物 分子檢測(cè)技術(shù) ?基因及產(chǎn)物 獲取技術(shù) ?基因 功能研究技術(shù) 基本技術(shù) 1. 瓊脂糖凝膠電泳 2. SDSPAGE 電泳 3. PCR技術(shù) 4. 細(xì)菌轉(zhuǎn)化 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) PCR(Polymerase Chain Reaction) 一、歷史及其發(fā)展： ? 1971年 ， Khorana提出：經(jīng)過(guò) DNA變性 ，與合適引物雜交 ， 用 DNA聚合酶延伸引物 ， 并不斷重復(fù)該過(guò)程便可克隆 tRNA基因 。 ? 1993年： Mullis與開(kāi)創(chuàng)了“寡核苷酸基因定點(diǎn)誘變”加拿大籍英國(guó)科學(xué)家 Michael Smith共獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng) Kary Mullis Michael Smith 穆利斯（ Kary Mullis） 美國(guó)化學(xué)家 1944～ 史密斯（ Michael Smith） 加拿大化學(xué)家 1932～ 二、 PCR的基本原理 ?PCR的基本原理： 變性、復(fù)性、半保留復(fù)制 ? PCR三步曲 Thr
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