分子生物學(xué)基本技術(shù)—pcr(polymerasechainreaction)-閱讀頁
2025-01-11 03:23本頁面
【正文】 6～ 10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離效果比瓊脂糖好，條帶比較集中。目前可用 SYBR的新型 熒光染料 來替代 EB，從而減少了對環(huán)境的污染，并可有效保護(hù)實(shí)驗(yàn)操作者。 ? 分子雜交 分子雜交是檢測 PCR產(chǎn)物特異性的有力證據(jù)，也是檢測 PCR 產(chǎn)物堿基突變的有效方法。此法既可作特異性鑒定，又可以提高檢測 PCR產(chǎn)物的靈敏度，還可知其分子量及條帶形狀。 八、 Molecular marker 傳統(tǒng)水平 ： 形態(tài)標(biāo)記、細(xì)胞學(xué)標(biāo)記、生化標(biāo)記 分子水平： ? 第一類 ：電泳、分子雜交為核心 代表 ： RFLP ? 第二類 ：電泳、 PCR為核心 代表 ： RAPD、 SSR、 AFLP ? 第三類： DNA序列為核心 代表： 單堿基多態(tài)性（ SNP）， DNA序列的單個核苷酸的差別 應(yīng)用 ? 種質(zhì)資源研究 ? 品質(zhì)純度鑒定（包括 DNA指紋鑒定） ? 構(gòu)建遺傳連鎖圖 ? 基因定位（ QTL） ? 標(biāo)記輔助選擇 ? 比較基因組研究 ? 基因克隆（圖位克?。? ? 生物起源、進(jìn)化、醫(yī)學(xué)及法醫(yī)學(xué) （一） RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism) ? 物種的基因組 DNA在限制性內(nèi)切酶作用下，產(chǎn)生相當(dāng)多的大小不等的片段，用放射性同位素標(biāo)記的 DNA作探針，把與被標(biāo)記 DNA相關(guān)的片段檢測出來，從而構(gòu)建出多態(tài)性圖譜。 ? 優(yōu)點(diǎn) :共顯性，非常穩(wěn)定 ? 缺點(diǎn)： 檢測步驟多，周期長，費(fèi)時、費(fèi)錢； 用作探針的 DNA克隆制備、保存不方便；放射性同位素 （二） RAPD（ Random Amplified Polymorphism DNA) ? RAPD隨機(jī)多態(tài)性 DNA擴(kuò)增 常規(guī) PCR中需要兩個引物，長度 2030個核苷酸。 RAPD引物短，因此退火溫度要低，一般為3537℃ 。可找出與靶基因連鎖的 RAPD標(biāo)記，進(jìn)行基因定位。 ? 對基因組 DNA進(jìn)行酶切，連上雙鏈人工接頭，根據(jù)接頭的核苷酸序列和酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行選擇性擴(kuò)增。 九、 PCR技術(shù)的應(yīng)用 GTCC GGAC CCTG CAGG GTCC GGAC CCTG CAGG CCTG GGAC GTCC CAGG 質(zhì)粒 DNA 目的基因 限制性核酸內(nèi)切酶 1) 基因克隆 2)基因檢測 A 正常人 病 人 正常 病人 HLA系統(tǒng)基因分型 PCRRFLP法 PCRSSO法 PCRSSCP PCRSSP 3)基因配型 4）基因鑒定 法醫(yī)學(xué)分析 個體識別、親緣鑒定 方法： PCRRFLP DNA遺傳指紋 PCRASO PCRVNTR多態(tài)性 PCRSSCP 線粒體 DNA測序 THANK YOU 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAIT
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