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基因工程的基本操作程序-wenkub

2023-01-26 17:54:33 本頁面
 

【正文】 RNA,以及基因的表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特殊性 來獲得目的基因。 目的基因的獲取 基因表達載體的構(gòu)建 將目的基因?qū)胧荏w細胞 目的基因的檢測與鑒定 概念: 一、目的基因的獲取 目的基因 : 主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因, 例如,與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因,與生物藥物和保健品相關(guān)的基因,以及與工業(yè)所需酶相關(guān)的基因,也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。 獲取目的基因的方法 : 人工合成 從基因文庫中獲得目的基因 PCR技術(shù)擴增 從 基因文庫 中獲得目的基因 概念 : 將含有某種生物不同基因的許多 DNA片段,導(dǎo)入受體菌 的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因,稱為 基因庫 。 利用 PCR技術(shù)擴增 目的基因 定義: PCR是 多聚酶鏈式反應(yīng) 的縮寫,是一項在 生物體外 復(fù)制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù),通過這一技術(shù),可以在短時間內(nèi)大量擴增目的基因。 (DNA變性) ( 2)將溫度降至 55℃ ~60℃ ,使兩種 引物 分別與 模板 DNA的一端互補序列 互補配對 。 終止子: 也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 DNA片段,位于基因的末端,使 轉(zhuǎn)錄在這里終止。 注意 三、 將 目的基因 導(dǎo)入 受體 A、將目的基 因?qū)?植物細胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)換法 (最常用) 基因槍法 花粉管通道法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)換法 農(nóng)桿菌: 是一種在土壤中生活的微生物,能在自然界感染 雙子葉植物和裸子植物 ,而對大多數(shù)單子葉植物 沒有感染能力。 ( 2)從雌性體內(nèi)取出受精卵,采用 顯微注 射儀 進行顯微注射。 導(dǎo)入方法: ( 1) 首先用 Ca2+處理細胞,使細胞處于一種能 吸 收周圍環(huán)境中 DNA分子的生理狀態(tài),這種細 胞稱為 感受態(tài)細胞 。 檢測目的基因是否 翻譯成蛋白質(zhì) 。 目的基因是否 轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 方法: 分子雜交技術(shù) 步驟: ( 1)將轉(zhuǎn)基因生物
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