【正文】 90℃ ~95℃ ，使雙鏈 DNA模板兩條鏈 之 間的氫鍵打開(kāi)，變成單鏈 DNA，作為互補(bǔ)鏈聚 合反應(yīng)的模板。早期的基因工程操作都用 原核生物 作為受體細(xì)胞，其中以 大腸桿菌 應(yīng)用最為廣泛。檢測(cè)這種堿基序列改變必須使用的酶是 （ ） A．解旋酶 B． DNA連接酶 C．限制性內(nèi)切酶 D． RNA聚合酶 解析：檢測(cè)這種堿基序列改變需將被測(cè)基因從 DNA上切下來(lái)進(jìn)行擴(kuò)增，該過(guò)程需要限制性內(nèi)切酶。 檢測(cè)目的基因 是否翻譯成蛋白質(zhì) 方法： 抗原 —— 抗體分子雜交 步驟： （ 1）將轉(zhuǎn)基因生物的 蛋白質(zhì) 提取出來(lái)。 應(yīng)用： 單子葉植物 ，但成本較高 花粉管通道法 B、將目的基因?qū)?動(dòng)物細(xì)胞 方法： 顯微注射法 步驟： （ 1）首先將含有目的基因的表達(dá)載體 提純 。 怎樣從基因文庫(kù)中得到我們所需的目的基因 ? 根據(jù)基因的 核苷酸序列，基因的功能，基因在染色體上的位置，基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 mRNA，以及基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特殊性 來(lái)獲得目的基因。 (DNA變性） （ 2）將溫度降至 55℃ ~60℃ ，使兩種 引物 分別與 模板 DNA的一端互補(bǔ)序列 互補(bǔ)配對(duì) 。 導(dǎo)入方法： （ 1） 首先用 Ca2+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能 吸 收周?chē)h(huán)境中 DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì) 胞稱為 感受態(tài)細(xì)胞 。在擴(kuò)增后，通過(guò)熱變性即可使待測(cè)基因解旋成單鏈，與已知堿基序列的貧血病基因制成的 DNA探針進(jìn)行分子雜交，根據(jù)形成雙鏈的情況即可測(cè)知其堿基序列，此過(guò)程無(wú)需解旋酶，更不需要形成重組DNA分子所需的 DNA連接酶和基因轉(zhuǎn)錄所需的 RNA聚合酶。 （ 3）使 探針 與 mDNA雜交 ，如果顯示出 雜交帶 ， 說(shuō)明目的基因 轉(zhuǎn)錄出了 mRNA。 轉(zhuǎn)化過(guò)程 基因槍法 原理： 利用 壓縮氣體 產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面