【正文】 90℃ ~95℃ ，使雙鏈 DNA模板兩條鏈 之 間的氫鍵打開，變成單鏈 DNA，作為互補鏈聚 合反應的模板。早期的基因工程操作都用 原核生物 作為受體細胞，其中以 大腸桿菌 應用最為廣泛。檢測這種堿基序列改變必須使用的酶是 （ ） A．解旋酶 B． DNA連接酶 C．限制性內(nèi)切酶 D． RNA聚合酶 解析：檢測這種堿基序列改變需將被測基因從 DNA上切下來進行擴增，該過程需要限制性內(nèi)切酶。 檢測目的基因 是否翻譯成蛋白質(zhì) 方法： 抗原 —— 抗體分子雜交 步驟： （ 1）將轉(zhuǎn)基因生物的 蛋白質(zhì) 提取出來。 應用： 單子葉植物 ，但成本較高 花粉管通道法 B、將目的基因?qū)?動物細胞 方法： 顯微注射法 步驟： （ 1）首先將含有目的基因的表達載體 提純 。 怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因 ? 根據(jù)基因的 核苷酸序列，基因的功能，基因在染色體上的位置，基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 mRNA，以及基因的表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特殊性 來獲得目的基因。 (DNA變性） （ 2）將溫度降至 55℃ ~60℃ ，使兩種 引物 分別與 模板 DNA的一端互補序列 互補配對 。 導入方法： （ 1） 首先用 Ca2+處理細胞，使細胞處于一種能 吸 收周圍環(huán)境中 DNA分子的生理狀態(tài)，這種細 胞稱為 感受態(tài)細胞 。在擴增后，通過熱變性即可使待測基因解旋成單鏈，與已知堿基序列的貧血病基因制成的 DNA探針進行分子雜交，根據(jù)形成雙鏈的情況即可測知其堿基序列，此過程無需解旋酶，更不需要形成重組DNA分子所需的 DNA連接酶和基因轉(zhuǎn)錄所需的 RNA聚合酶。 （ 3）使 探針 與 mDNA雜交 ，如果顯示出 雜交帶 ， 說明目的基因 轉(zhuǎn)錄出了 mRNA。 轉(zhuǎn)化過程 基因槍法 原理： 利用 壓縮氣體 產(chǎn)生的動力，將包裹在金屬顆粒表面