12基因工程的基本操作程序z4班l(xiāng)-wenkub
2023-03-27 12:48:00 本頁(yè)面
【正文】 香酮等，目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏（趨化性）和激活農(nóng)桿菌的 Vir區(qū)（誘導(dǎo)）的基因，使 TDNA轉(zhuǎn)移并插入到染色體 DNA上。具體原理是在農(nóng)桿菌的 Ti質(zhì)粒上存在 TDNA片段，它具有可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞的 ____上的特點(diǎn)，因此只要將攜帶外源基因的 DNA片段插入到 ____(部位 )即可。 DNA獲取目的基因和切割載體時(shí)一般情況下為什么 要選用同一種限制性核酸內(nèi)切酶？經(jīng)過(guò)重組過(guò)程后會(huì)形 成幾種 DNA分子？ ？ Ca2+處理細(xì)胞。（ 3）如果基因較小且核苷酸序列已知，可以通過(guò) ____________方法。 1．有關(guān)目的基因的獲取和基因文庫(kù)的理解，不正確的是 ( ) A．目的基因可以從自然界中分離，也可以人工合成 B．目的基因主要指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 C．基因文庫(kù)就是基因組文庫(kù) D． cDNA文庫(kù)只含有某種生物的一部分基因 2．下列屬于獲取目的基因方法的是 ①利用 mRNA反轉(zhuǎn)錄形成 ②從基因文庫(kù)中獲取 ③從受體細(xì)胞中提取 ④利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增 ⑤利用 DNA轉(zhuǎn)錄 ⑥人工合成 A．①②③⑤ B．①②⑤⑥ C．①②③④ D．①②④⑥ D C (二）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 PCR技術(shù) — 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ? 原理： ? 前提： ? 條件： DNA雙鏈復(fù)制 一段已知目的基因的核苷酸序列 四種脫氧核苷酸 一對(duì)引物 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq酶） DNA的兩條鏈為模板 溫度控制 一、目的基因的獲取 復(fù)習(xí)： 目的基因？ 獲取目的基因的常用方法有哪些 ? 什么是基因文庫(kù)？種類(lèi)？ 原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)？ 怎樣從基因文庫(kù)中得到我們所需的目的基因？ 基因組文庫(kù)？ cDNA文庫(kù)？ 變性： 加熱至 90～95℃ 雙鏈 DNA解鏈成為單鏈 DNA 退火： 冷卻至 55～60℃ 部分引物與模板的單鏈 DNA的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合 延伸： 加熱至 70～75℃ 以目的基因?yàn)槟０?，合成互補(bǔ)的新 DNA鏈 退火 變性 延伸 (二）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 (三 ) 通過(guò) DNA合成儀用化學(xué)的方法直接人工合成 一、目的基因的獲取 前提：基因比較小，核苷酸序列已知。 基因工程的基本操作程序 ?目的基因的獲取 ?基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ?將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ?目的基因的檢測(cè)與鑒定 一、目的基因的獲取 目的基因主要是指 ______________________ 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 例子 ? 獲取目的基因的常用方法有哪些 ? （ 1）從 基因文庫(kù) 中獲取 （ 2）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增 （ 3）人工合成 (一 )從基因文庫(kù)中獲取目的基因 ？種類(lèi)？如何構(gòu)建？ 一、目的基因的獲取 基因組文庫(kù) cDNA文庫(kù) 含有一種生物的 全部 基因 含有一種生物的 部分基因 種類(lèi)： 基因組文庫(kù) cDNA文庫(kù) 基因組 DNA文庫(kù) cDNA文庫(kù) 基因組 DNA文庫(kù)與 cDNA文庫(kù)的比較 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 啟動(dòng)子 終止子 與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) ：編碼蛋白質(zhì) ,連續(xù)不間斷 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 原核細(xì)胞 基因結(jié)構(gòu) ①不編碼蛋白質(zhì)。 是
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