選修課臨床檢驗9熒光定量pcr在臨床實驗室診斷中的應用-wenkub
2022-10-28 15:48:59 本頁面
【正文】 PCR技術(shù)用于遺傳性疾病的 產(chǎn)前診斷 一、等位基因的檢測 雙色熒光分別標記正常和突變基因，判斷正常、 純合子、雜合子 二、多基因遺傳病的突變檢測 三、基因表達異常所致的遺傳病 地中海貧血的基因診斷 一、 ?— 地貧的診斷： 檢測 ?株蛋白基因（ 16號染色體）的缺失 二、 ?— 地貧的診斷： 擴增出 ?株蛋白基因（ 11號染色體）的片段 反向斑點雜交 FQ— PCR技術(shù)用于性別鑒定 FQ— PCR檢測 SRY基因： 取材： 孕婦外周血（胎兒性別鑒定） 頭發(fā)等（性別鑒定） 注意事項：女性操作、陰陽性對照 臨床應用：伴性遺傳病的檢測 FQ— PCR技術(shù)檢測 21三體綜合征 孕婦外周血中有胎兒的少量細胞 通過 PCR技術(shù)檢測孕婦外周血中的胎兒細胞 Increased fetal DNA concentrations in the plasma of pregnant women carrying feruses with trisomy 21 Clin chem, 1999 Oct, 45: 10, 174951 FQ— PCR技術(shù)用于植入前診斷 移入前診斷是第三代試管嬰兒的核心技術(shù) 在胚胎分裂至 4— 8細胞階段時，取 1— 2個細胞作篩選 技術(shù)難點：細胞數(shù)少，獲取核酸困難。 ?定 量 的 實 現(xiàn) ： ? 熒光探針與擴增產(chǎn)物結(jié)合 ? Taq酶外切作用，探針裂解，熒光 被激發(fā) ? 熒光信號的檢測 ? 熒光強度與定量核酸模板相關(guān)性 ? 實時定量與終產(chǎn)物定量 ? ? ? ? ? ? 熒光定量 PCR技術(shù)的主要優(yōu)點 一、真正的樣品原始核酸模板的準確定量 二、定量范圍寬（ 0— 1010/ml)，無需梯度稀釋 三、封閉狀態(tài)檢測，避免擴增產(chǎn)物污染 四、探針使用使特異性更強 五、光譜分析技術(shù)使敏感性更高 六、儀器讀數(shù)，結(jié)果判斷客觀真實 七、無需 PCR后處理，操作更簡便、快速 八、數(shù)據(jù)電腦管理，利于醫(yī)院管理 熒光定量 PCR技術(shù)檢測的報告形式 一、報告形式： 熒光定量 PCR檢測的報告以：“拷貝數(shù)”（ copy) 二、拷貝數(shù)的意義： 表示原始標本內(nèi)可供探針結(jié)合的核酸片段數(shù)量。 三、拷貝數(shù)與病原體的關(guān)系： 拷貝數(shù)與病原體的數(shù)量成正相關(guān) 一般來說：細菌是單拷貝的，病毒是多拷貝的。需要高靈敏度 的檢測方法 發(fā)展方向：篩選疾病基因、常見病基因、腫瘤基因等 FQ— PCR雙色及多色熒光標記技術(shù)的應用 FQ— PCR用于肺部感染的診斷 一、肺 炎支原體的檢測： 二、肺炎衣原體的檢測： 意義： 快速診斷 治療方案與細菌感染的治療方案 不同 FQ— PCR技術(shù)用于幽門螺桿菌（ HP）的檢測 HP與慢性胃炎、胃潰瘍、胃癌有密切的關(guān)系 我國胃癌發(fā)病率高、發(fā)病年齡輕與 HP的感染與關(guān)系
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