【正文】 度、準確度、精密度檢測方法研究v 方法選擇： 查文獻/化合物理化性質/分析儀器/方法評價v 最低檢測濃度： MRL /儀器方法/前處理方法v 標準曲線：至少5個濃度v 回收率：至少2個添加濃度，5個重復v 精密度：相對標準偏差（RSD）評價標準添加濃度（mg/kg）平均回收率（70%）添加濃度（mg/kg）平均回收率（70%）170110110701101570110206012030≤50120≤35結果計算和表達v 殘留量應為農藥母體及其有毒代謝物，降解物的總和，以mg/kg表示。檢測后的樣品需保存至少半年時間，以供復檢。（測定時校正干土殘留量）不能過篩的去掉植物殘枝和石礫后保存。v 樣品縮分按照SOP中各種作物樣品制備標準操作規(guī)程縮分。田間試驗的處理和小區(qū)設計處理數量：原則上一個施藥劑量、一個施藥次數和一個采收間隔期為試驗的一個處理。土壤（水）試驗：可在種植地附近選擇一塊土質相同的空白地進行。施藥時間：以農作物的收獲期進行倒推設計。g(ai)/ha或mg/kg施藥次數：設兩個施藥次數（除草劑、土壤處理劑、種子處理劑、植物生長調節(jié)劑等可不增加次數）施藥間隔：依據推薦的施藥間隔或藥效試驗結果。試驗前了解試驗地的土壤類型、用藥歷史等。●一地：榴蓮、亞麻籽、可可、咖啡、調味品類、香草類等。4 田間試驗部分田間試驗設計是農藥殘留試驗的前提和基礎。安全間隔期：經殘留試驗確證的試驗農藥實際使用時采收距最后一次施藥的間隔天數。v 實驗室檢測部分 方法確定；樣品檢測；數據處理；記錄。v 檢測環(huán)境介質和生態(tài)系生物構成的農藥殘留種類和水平，以了解環(huán)境質量和評價生態(tài)系統的安全性。我國新農藥登記資料要求田間試驗階段：（不得銷售）v 產品化學資料（有效成分，物化參數，分析方法等）v 毒理學資料（急性毒性）v 藥效資料（室內活性測定，試驗作物、防治對象、施藥方法）v 其他資料（已有的田間藥效、殘留、環(huán)境生態(tài)試驗和登記情況）臨時登記階段（試銷，有效期1年，可續(xù)展，不得超過4年）v 產品化學資料（產品標準）v 毒理學資料（急性毒性試驗報告、眼睛皮膚刺激性試驗報告、致敏性試驗報告、亞慢性試驗報告、致突變性試驗報告等）v 藥效資料（室內活性測定報告、2年4地室外藥效報告）v 殘留資料（可在臨時登記期間進行）v 環(huán)境生態(tài)資料（魚、鳥、蜜蜂、家蠶的毒性試驗報告）v 標簽、說明書v 其他資料（在其他國家或地區(qū)的登記情況）正式登記階段（有效期5年，可續(xù)展）v 產品化學資料（2年常溫穩(wěn)定性試驗報告）v 毒理學資料（人群接觸毒性、主要雜質毒性、在動物體內的代謝、每日允許攝入量等）v 藥效資料v 殘留資料（2年2（3）地殘留試驗報告）v 環(huán)境生態(tài)資料（環(huán)境行為特征、非靶標生物毒性v 規(guī)范的標簽、說明書4 農藥安全性評價v 健康安全評價：評價登記產品在推薦施藥條件下對人的健康風險。我國農藥殘留法規(guī)與管理v 1982年4月，《農藥登記規(guī)定》。2 農藥殘留限量標準v 最大殘留限量（MRL，maximun residue limit）是指法定允許在食用農產品和動物飼料中一種化合物殘留的最大濃度（用mg/kg 來表示)。 四、農藥殘留檢測與監(jiān)控 農藥殘留超標是農產品污染的主要問題 1 農藥與食品安全問題的對策v 加快立法步驟，加強科學管理。v 農藥被植物根部吸收后轉移至食物中。v 隨大氣沉降、灌溉水和動植物殘體進入土壤。v 施用后，沉積在作物表面或土壤表面的農藥通過揮發(fā)和蒸發(fā)作用進入大氣。 1. 體表直接吸收：藻類植物、原生動物、微生物 2. 根系吸收：高等植物 3. 食物鏈：大多數動物 藻類：500 魚、貝殼：2000 水鳥：10萬 三、農藥殘留與生態(tài)、食品安全1 生態(tài)系統：是自然界一定空間的生物與環(huán)境之間相互作用、相互制約、不斷演變，達到動態(tài)平衡、相對穩(wěn)定的統一整體。v 遷移：施于土壤或植物體時，一部分農藥會通過各種途徑進入氣相或通過地表徑流和淋溶的方式沉積。2 農藥分類（按作用方式分）： v 殺蟲劑： 有機氯，有機磷，氨基甲酸酯，擬除蟲菊酯，沙蠶毒素類v 殺菌劑： 保護性殺菌劑、治療性殺菌劑、鏟除性殺菌劑v 除草劑： 輸導型、觸殺型、選擇性、滅生性3 農藥殘留 由于農藥的應用而殘存于生物體、農產品和環(huán)境中的農藥親體及其具有毒理學意義的雜質、代謝產物和反應物等所有衍生物的總稱。 可提取殘留 結合殘留：化學鍵合或物理結合 不可提取殘留 軛合殘留：酶作用4 農藥殘留毒性 因攝入或長時間重復暴露農藥殘留而對人、畜以及有益生物產生的急性中毒或慢性毒害。 v 分解：農藥在環(huán)境中可以通過多種方式降解。 農藥主要是通過生態(tài)系統中的環(huán)境介質（大氣、土壤、水）進入生態(tài)系統中，進而影響整個生態(tài)系統的物質循環(huán)和能量流動。v 農藥配制、加工生產運輸、農作物廢棄燃燒、倉庫、車船熏蒸后的通風排放、糧食保存、纖維防蛀等也可在一定時期內造成高濃度的大氣污染。農藥進入水環(huán)境的途徑v 農藥直接施入水體。v 施用農藥的同時或施用后對大氣、水體的污染造成動植物體內含有農藥殘留，間接污染食品。v 加強農業(yè)生產者的教育，合理用藥。v 每日允許攝入量（ADI，acceptable daily intake）是根據對一種化合物已有數據的評價，消費者一生之中每天攝入這種化合物不會對身體健康造成可見風險的量（用mg/kg體重來表示）。v 1982年10月，《農藥安全使用規(guī)定》?！r藥毒性試驗和農藥殘留試驗結果v 生態(tài)安全評價：評價登記產品在推薦使用條件下對環(huán)境生物的毒害風險。5 農藥殘留檢測的特點與程序v 農藥殘留分析的特點 痕量性（ ng、pg、fg）； 復雜性 多樣性v 農藥殘留分析的程序 樣品采集 樣品制備 樣品分析 質量控制與數據處理農藥殘留分析的發(fā)展和任務v 安全、環(huán)保、高效、經濟；v 樣品處理新技術——SPE,SFE,ASE,GPCv 檢測新技術——GC,HPLC,聯用技術 v 快速檢測技術——多殘留分析，快速篩選v 方法的標準化；v 監(jiān)測和管理的完善。v 試驗報告的撰寫3術語和定義農藥殘留：使用農藥后，殘存于農產品及環(huán)境中的農藥活性成份及其在性質上和數量上有毒理學意義的代謝（或降解、轉化）產物。田間樣品：按照規(guī)定的方法在田間采集的樣品。正確的田間試驗設計是整個殘留試驗成功的關鍵所在?！穸兀浩渌魑?。，做好標記。采收間隔期：以作物農產品的收獲時期作為樣品采收時期，根據防治情況和推薦采收間隔期確定試驗采收間隔。殘留消解動態(tài)試驗檢測對象：可食部分、植株。采樣間隔和次數：一般采用一次施藥多次采樣的方法進行。處理重復：每個處理設3個重復小區(qū)面積：糧食作為≥30 m2，葉菜類蔬菜≥15 m2，果樹不少于2棵。個體較小的樣品（如麥粒和小粒水果）用四分法進行縮分；谷物等樣品先粉碎，全部過20目篩，最后取100200克樣品保存待測。 v 樣品包裝和貯藏采集的每個樣品應寫好標簽，24h內運送到實驗室。田間試驗的記錄：試驗記錄應及時、清晰、詳細、準確。v 當檢測值低于LOQ時，應寫LOQ值v 應真實記載實際檢測結果，分別計算各樣品重復檢測值和平均值，不能用回收率校正。eKT C為時間T時的農藥殘留量（mg/kg） C0為施藥后原始沉積量（mg/kg） K為消解系數 T為施藥后時間（天） 半衰期: T(1/2)=ln2/k檢測記錄標準樣品購買、使用記錄試劑、玻璃器皿、氣源購買、使用記錄天平使用、維護記錄氣相、液相等儀器使用、維護記錄標準溶液配制記錄方法摸索前處理記錄樣品檢測記錄、數據處理記錄6 試驗報告的撰寫v 農藥殘留試驗報告的組成 封面 目錄 正文（前言、田間試驗、檢測方法、殘留試驗結果、結論與合理使用建議） 圖表（表格、曲線圖、譜圖）農藥殘留試驗報告的總體要求v 農藥殘留試驗報告的用途 農藥生產企業(yè)申請農藥殘留登記提交材料 制定農藥合理使用準則的依據 制定農藥殘留限量標準的依據v 農藥殘留試驗報告的基本原則——真實、明確、規(guī)范 真實——科學的試驗設計、嚴謹的試驗操作、真實的檢測數據。包括從樣品中提取殘留農藥，濃縮提取液和去除提取液中干擾性雜質的分離凈化等步驟，是將實驗室樣品處理成適合測定的檢測溶液的過程。（衍生化） 4）延長儀器的使用壽命。 常用溶劑的極性大小： 己烷（石油醚）苯乙醚氯仿二氯甲烷丙酮乙酸乙酯乙腈二甲亞砜甲醇水 2）溶解性 指農藥在水相和有機相中的溶解能力。提取原則：根據農藥理化性質按“相似相溶”原理進行。 常用提取方法有振蕩法、搗碎法、超聲波法、索氏提取法、吹掃捕集法。組織搗碎法v 組織搗碎法也是一種常用的方法。在超聲波清洗槽中裝入一定量的水，將裝有樣品和提取溶劑的玻璃瓶放入其中，提取溶劑的液面要與槽中水面齊平。吹掃捕集法v 主要用于水樣中揮發(fā)性有機物的分析。v 常用的二相溶劑對系統有：乙酸乙酯水、二氯甲烷水，石油醚水、石油醚丙酮等。2 凈化技術 凈化（cleanup）是指通過物理的或化學的方法除去提取物中對測定有干擾作用的雜質的過程。 吸附劑的基本要求：具有較大的比表面；適宜的表面孔徑和吸附活性；粒度分布范圍盡量窄，并具有一定的強度。加入5%~10%重量的水，混勻，放置過夜。v 上樣：將用溶劑稀釋的樣品溶液加在柱上，使樣品通過柱子。v 原理是利用旋轉濃縮瓶對濃縮液起攪拌作用，并在瓶壁上形成液膜，擴大蒸發(fā)面積，同時又通過減壓，使溶劑的沸點降低，從而達到高效率濃縮目的。氮氣吹干法v 氮氣吹干法是直接利用氮氣流輕緩吹拂提取液及提高水浴溫度，加速溶劑的蒸發(fā)速度來濃縮樣品，可以有效防止氧化反應但只適合于小體積濃縮。如硅膠、弗羅里硅土、氧化鋁、氨基等。如SAX，SCX等。v 洗去干擾雜質：選擇合適的淋洗溶劑將干擾雜質先淋洗出小柱，農藥保留在小柱中。 流速：樣品溶液的流速一般不超過5mL/min。v 其固相是一支覆蓋著一層高聚物固定相（聚丙烯酸酯）的熔融石英纖維。固相微萃取的影響因素v 固相涂層的性質：非極性固相涂層（聚二甲基硅氧烷）；極性固相涂層（聚丙烯酸酯）v 液膜厚度：液膜越厚，吸附量越大，但平衡時間越長。SPME的優(yōu)缺點 操作時間短(一般只需15min，是液液萃取的30%) 操作簡便 無需萃取溶劑 所需樣品量少 適用范圍廣泛 缺點：石英纖維非常脆弱，易折斷，重復性較差。是將抗體與惰性微珠（如，瓊脂糖、纖維素）共價結合，然后裝柱，將抗原溶液過免疫親和柱，非目標化合物不保留，最后用洗脫緩沖液洗脫抗原，從而得到純化的抗原。v 溶劑的選擇：所選用的溶劑應該對目標物有良好的溶解度，并對凝膠有一定的膨脹力。v 原理是選擇合適的溶劑、通過提高溫度(50~200℃)和壓力（~）來加快萃取速度，提高萃取效率。v 流程：將樣品放入萃取池； 設定程序，自動進行。v SF是介于氣液之間的一種物質，只能在物質的溫度和壓力超過臨界點事才能存在。 CO2的優(yōu)點：密度大，溶解能力強，傳質速率高，壓力適中，臨界溫度31℃，便宜易得，無毒，惰性以及極易從提取產物中分離出來等優(yōu)點，當前絕大部分超臨界流體提取都是以它為溶劑。 萃取時間：與被萃取物質在流體中的溶解度及其傳質速率呈正向相關。 ? 集提取、濃縮、凈化（分析）為一體。第四章 農藥殘留分析檢測技術第一節(jié) 氣相色譜檢測方法及應用 氣相色譜基本原理氣相色譜是一種分離技術，是利用物質的沸點、極性及吸附性質的差異來實現混合物的分離。 （儀器未穩(wěn)定造成）最小檢出量：產生3倍噪音信號時 組分的量。 tR’= tR t014. 色譜柱效參數色譜峰：色譜柱流出組分通過檢測器時所產生的響應信號曲線。半高峰寬（W1/2)：峰高的中點作平行于峰底的直線，此直線與峰兩側相交兩點之間的距離。 分離度R：兩個相鄰組分的保留值之差與其平均峰寬之比。K=Cs/Cm，是由組分和固定相的熱力學性質決定的，它是每一組分的特征值，只隨柱溫和柱壓變化。n 色譜柱越長，分離度R越高。n 所有組分開始時都集中于0號板上，而且組分的縱向擴散可忽略。塔板理論的缺點：n 快速平衡的假設是難以實現的；n 流動相的不連續(xù)流動是不符合實際的；n 忽略了因濃度差等因素引起的縱向擴散；n 流出曲線方程未能描述色譜參數如載氣流速、固定相性質等對峰展寬的影響?？梢娫谔畛渲?，填料粒度越小越有利。 薄的液膜和大的擴散系數（或在較高柱溫下）有利于傳質。n 進樣系統：進樣器和氣化室n 柱系統：色譜柱和恒溫箱n 檢測系統：檢測器、恒溫室和放大器n 記錄和數據處理系統 幾種高檔GC儀器的配置儀器型號廠商氣路系統進樣系統檢測系統控制及數據處理 Agilent6890 美國安捷倫 電子氣路控制(EPC)也可選擇手動控制可同時配置兩個進樣口