打印生化分離工程-wenkub
2022-11-14 00:55:03 本頁面
【正文】 萃取劑（ L）解出混合，靜止后分成兩層。 沉析法純化蛋白質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)有哪些？ 沉析的一般操作步驟是什么？ 1 加入沉析劑 2 沉析物陳化 xyk /?])()(e xp[ RT lhxyk ?? ?? ???3 離心或過濾，收集沉析物 何謂鹽析？其原理是什么？ 在高濃度的中性鹽存在下，蛋白質(zhì)（酶）等生物大分子物質(zhì)在水溶液中的溶解度降低，產(chǎn)生沉淀的過程。 鹽析操作時(shí)常用的鹽是什么？ 酸硫銨：溶解度大（ 767g/L） 硫酸鈉 磷酸鹽 檸檬酸鹽 影響鹽析的主要因素有哪些？ （ 1）溶質(zhì)種類的影響： Ks 和 β 值 （ 2）溶質(zhì)濃度的影響：蛋白質(zhì)濃度大，鹽的用量小，但共沉作用明顯，分辨率低； （ 3）蛋白質(zhì)濃度小，鹽的用量大，分辨率高； （ 4） pH 值：影響蛋白質(zhì)表面凈電荷的數(shù)量，通常調(diào)整體系 pH 值，使其在 pI 附近； （ 5）鹽析溫度：大多數(shù)情況下，高鹽濃度下，溫度升高 ，其溶解度反而下降； 有機(jī)溶劑沉析法的原理是什么？ （ 1）降低了溶質(zhì)的介電常數(shù)，使溶質(zhì)之間的靜電引力增加，從而出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，導(dǎo)致沉淀。 常用的此 類沉淀劑是 PEG，相對(duì)分子量一般為 6000； 成鹽類復(fù)合物沉析劑 ： （ 1）高價(jià)金屬鹽： Cu2+， Ag2+， Zn2+， Ca2+與酸性基團(tuán)結(jié)合； （ 2）苦味酸鹽、單寧酸鹽、鞣質(zhì)等，與堿性基 團(tuán)結(jié)合 。如組氨酸－氯化汞，精氨酸－苯甲醛，亮氨酸－鄰二甲基苯磺酸等 分離核酸用沉析劑 ： 酚、氯仿、 SDS 分離粘多糖用沉析劑 ： 乙醇、 CTAB 選擇性變性沉淀法 ： 加入變性劑 、 選擇性熱變性 、 選擇性酸堿變性 吸附與離子交換 ？ 吸附： 利用吸附劑對(duì)液體或氣體中某一組分具有選擇性吸附的能力，使其富集在吸附劑表面的過程。 吸附等溫線表示平衡吸附量，并可用來推斷吸附劑結(jié)構(gòu)，吸附熱，和其他理化特性。 ？其主要的理化性質(zhì)有哪些？ 強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂 ， 弱酸性陽離子交換樹脂 ， 強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂 ， 弱堿性陰離子交換樹脂 ， 大孔離子交換樹脂 ， 兩性樹脂 ， 螯合樹脂 ， 多糖基離子交換樹脂 （ 離子交換纖維素 ， 葡聚糖凝膠離子交換樹脂 ） 理化性質(zhì)： 外觀：球形、淺色為宜，粒度大小為 16~60 目 90%； 機(jī)械強(qiáng)度： 90%； 含水量： ~； 交換容量：重量交換容量、體積交換容量、工作交換容量或稱表觀交換容量（在某一條件下）； 穩(wěn)定性：化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性； 膨脹度：交聯(lián)度、活性基團(tuán)的性質(zhì)與數(shù)量、活性離子的性質(zhì)、介質(zhì)的性質(zhì)和濃度、骨架結(jié)構(gòu)； 濕真密度：?jiǎn)挝惑w積濕樹脂的重量； 孔度、孔徑、比表面積 ？ A+自溶液中擴(kuò)散到樹脂表面 A+從樹脂表面進(jìn)入樹脂內(nèi)部的活性中心 A+與 RB 在活性中心上發(fā)生復(fù)分解反應(yīng) 解吸附離子 B+自樹脂內(nèi)部擴(kuò)散至樹脂表面 B+離子從樹脂表面擴(kuò)散到溶液中 交換速度的控制步驟是擴(kuò)散速度，不同的分離體系可能 由內(nèi)部擴(kuò)散或外部擴(kuò)散控制 ？其選擇性受哪些因素影響？ 水合離子半徑：半徑越小，親和力越大； 離子化合價(jià)：高價(jià)離子易于被吸附； 溶液 pH：影響交換基團(tuán)和交換離子的解離程度，但不影響交換容量； 離子強(qiáng)度：越低越好； 有機(jī)溶劑：不利于吸附； 交聯(lián)度、膨脹度、分子篩：交聯(lián)度大，膨脹度小，篩分能力增大；交聯(lián)度小，膨脹度大，吸附量減少； 樹脂與粒子間的輔助力：除靜電力以外，還有氫鍵和范德華力等輔助力； 離子交換的選擇性 — 離子交換常數(shù)：交換勢(shì)或交換系數(shù) [RA]、 [RB]表示結(jié) 合在樹脂上的 A 離子和 B 離子濃度 [A]S、 [B]S 表示溶液中 A 離子和 B 離子 越大 B 越易被交換 ？ 1） 樹脂預(yù)處理 —— 物理處理：水洗、過篩，去雜，以獲得粒度均勻的樹脂顆粒； 化學(xué)處理：轉(zhuǎn)型（氫型或鈉型） 陽離子樹脂 酸 —堿 —酸 陰離子樹脂 堿 —酸 —堿 最后以去離子水或緩沖液平衡 2） 離子交換吸附 3） 洗脫 —— （ 1）改變?nèi)芤?pH 值（ 2） 改變?nèi)芤弘x子強(qiáng)度 4） 樹脂再生 ： 是指使離子交換樹脂重新具有交換能力的過程 酸性陽離子樹脂 酸 堿 酸 緩沖溶液淋洗 堿性陰離子樹脂 堿 酸 堿 緩沖溶液淋洗 方式有：順流再生和逆流再生 ？ 平衡 、 上樣吸附 、 洗脫 、 再生 ？ 顆粒大?。河≡娇? 交聯(lián)度：交聯(lián)度小，交換速度快 溫度：越高越快 離子化合價(jià)：化合價(jià)與高，交換越快 離子大小：越小越快 攪拌速度：在一定程度上，越大越快 溶液濃度：當(dāng)交換速度為外擴(kuò)散控制時(shí)， 濃度越大，交換速度越快 ，主要有哪幾類 要求：良好的親水性、具有較大的均勻網(wǎng)格結(jié)構(gòu)、粒度越小分辨率越高 種類：多糖類 離子交換纖維素 交聯(lián)葡聚糖 交聯(lián)瓊脂糖 聚乙烯醇類 Mono 系列 Amersham Pharmacia 色譜分離技術(shù) ssBA BAR ABRK ]][[ ]][[ ???ssBA AB ARBRK ]/[][ ]/[][ ???BAK1 什么是色譜分離技術(shù)？ 利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì) (分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、 分子親和力、分配系數(shù)等 )的不同，使各組分以不同程度分布在 固定相 （多孔介質(zhì)）和 流動(dòng)相 中，當(dāng)流動(dòng)相流過固定相時(shí)，根據(jù)物質(zhì)在兩相間的分配行為不同，各組分以不同的速度移動(dòng)，經(jīng)過多次分配（吸附 解吸 吸附 解吸 … ），而達(dá)到分離的技術(shù)。 陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂 (分別包括強(qiáng)、中、弱三種電荷基團(tuán) )， 螯合離子交換樹脂 (對(duì)金屬離子有較強(qiáng)的選擇性 ) 應(yīng)用：分離氨基酸 7 凝膠色譜的分離原理及分類 原理： 當(dāng)含有各種組分的樣品流經(jīng)凝膠層析柱時(shí)，大分子物質(zhì)由于分子直徑大，不易進(jìn)入凝膠顆粒的微孔，沿凝膠顆粒的間隙以較快的速度流過凝膠柱。 22/1 )( WtN R? 2)(16bRWtN?NLH?9 高效液相色譜的分離原理及應(yīng)用 10 蛋白質(zhì)分離的常用色譜方法有哪些？ 免疫親和層析 、 疏水層析 、 離子交換色譜 （ 最常用的蛋白質(zhì)分離手段 ）、 u 課后習(xí)題 1 P281 u 色譜方法共分幾類？常用
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