打印生化分離工程-全文預(yù)覽
【正文】 解度時(shí)，晶體尚不能析出，只有當(dāng)溶質(zhì)濃度超過(guò)飽和溶解度后，才可能有晶體析出 ? 首先形成晶核，由 Kelvin 公式，微小的晶核具有較大的溶解度。 ? （ 2）通過(guò)結(jié)晶，溶液中大部分的雜質(zhì)會(huì)留在母液中，再通過(guò)過(guò)濾、洗滌，可以得到純度較高的晶體。 在高電場(chǎng)強(qiáng)度作用下，毛細(xì)管中的待測(cè)物質(zhì)，可按其分子質(zhì)量，電荷，淌度等因子得到 有效的分離。 采用 2 種電泳方法結(jié)合的方式，把第一向 電泳膠條轉(zhuǎn)至另一種凝膠介質(zhì)（ PH 和濃度與一向電泳不同）上進(jìn)行第二向電泳，從而有效分離復(fù)雜的混合樣品。 (4)電泳后 區(qū)帶易染色，樣品易洗脫，便于定量測(cè)定 。 SDS 可使蛋白質(zhì)的氫鍵、疏水鍵打開(kāi)，還引起蛋白質(zhì)構(gòu)象的改變。 當(dāng)電場(chǎng)沿切線方向作用于帶電表面時(shí)，雙電層的兩部分分別受到相反方向的作用力，膠粒在分散介質(zhì)中朝著某一電極遷移 動(dòng)電過(guò)程 參考教材 （ 1）自由界面電泳 （ 2）自由溶液中的區(qū)帶電泳 （ 3）在不同支持物上的區(qū)帶電泳 （ 4）在有機(jī)溶劑中的凝膠電泳 （ 5）親和電泳 （ 6）等速電泳 （ 7）等電聚焦電泳 ？ （ 1）顆粒的性質(zhì)（ 2）電場(chǎng)強(qiáng)度（ 3）溶液的性質(zhì) （ 4） 焦耳熱 （ 5） 支持物 （ 6） 擴(kuò)散 （ 7）緩沖液的性質(zhì) ？ (1) 瓊脂凝膠和瓊脂糖凝膠 (2) SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 (3)不連續(xù)凝膠電泳 (4)制備凝膠電泳 （ 1）電泳槽：是凝膠電泳系統(tǒng)的核心部分，管式電泳槽、垂直板電泳槽、水平板電泳槽 （ 2）電源 :聚丙烯酰胺凝膠電泳 200~600V，載體兩性電解質(zhì)等電聚焦電泳 1000~2020V，固相梯度等電聚焦 3000~8000V （ 3）外循環(huán)恒溫系統(tǒng) :高電壓會(huì)產(chǎn)生高 熱，需冷卻； (4）凝膠干燥器 :用于電泳和染色后的干燥 （ 5）灌膠模具：制膠，玻璃板和梳子； （ 6）電泳轉(zhuǎn)移裝置：利用低電壓，大電流的直流電場(chǎng)，使凝膠電泳的分離區(qū)帶或電泳斑點(diǎn)轉(zhuǎn)移到特定的膜上，如 PVDF 膜 （ 7）電泳洗脫儀：回收樣品 （ 8）凝膠掃描和攝錄裝置：對(duì)電泳區(qū)帶進(jìn)行掃描，從而給出定量的結(jié)果 原理： 由于聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE）是多孔介質(zhì)，不僅能防止對(duì)流，把擴(kuò)散減少到最低；而且其孔徑大小與生物大分子具有相似的數(shù)量級(jí)，能主動(dòng)參與生物分子的分離，具有分子篩效應(yīng)。 分類： (1) 聚丙烯酰胺凝膠 (2) 葡聚糖凝膠 (3) 瓊脂糖凝膠 8 離子交換及疏水作用層析的原理 離子交換劑是由基質(zhì)、電荷基團(tuán) (或功能基團(tuán) )和反離子構(gòu)成的，基質(zhì)與電荷基因以共價(jià)鍵連 接，電荷基因與反離子以離子鍵結(jié)合。 5 什么是分配色譜？ 利用溶質(zhì)各組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不同而分離的方法。 特點(diǎn)： 效率高：利用親和吸附可以從粗提液中一次性分離得到高純度的活性物質(zhì)。如果不考慮溶劑的吸附，當(dāng)固體吸附劑與溶劑中的溶質(zhì)達(dá)到平衡時(shí)，其吸附量 m 應(yīng)與溶質(zhì)的濃度和溫度有關(guān)。 金屬?gòu)?fù)合鹽：與生物分子的酸性基團(tuán)作用， Cu2＋、 Ag＋、 Zn2＋ 有機(jī)酸復(fù)合鹽：與生物分子的堿性基團(tuán)作用 無(wú)機(jī)復(fù)合鹽：磷鎢酸鹽、磷鉬酸鹽 離子型表面活性劑 ： CTAB（十六烷基三甲基季銨鹽溴化物） 主要用于沉淀酸性多糖 、十二烷基磺酸鈉（ SDS） 主要用于沉淀膜蛋白和核蛋白 。（ pI） （ 4）離子強(qiáng)度：離子強(qiáng)度低有利于沉析， （ 5）樣品濃度： % ?。喝軇┯昧看螅厥章实?，但共沉淀作用小 濃：節(jié)省溶劑用量，共沉作用強(qiáng)，分辨率低 （ 6）金屬離子的助沉析作用： Zn2+、 Ca2+ 等電點(diǎn)沉析的工作原理是什么？ 蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，當(dāng)溶液 pH 值處于等電點(diǎn)時(shí)，分子表面凈電荷為 0，雙電層和水化膜結(jié)構(gòu)被破壞，由于分子間引力，形成蛋白質(zhì)聚集體，進(jìn)而產(chǎn)生沉淀 。 溶液中高濃度的中性鹽離子有很強(qiáng)的水化能力，會(huì)奪取蛋白質(zhì)分子的水化層，使蛋白質(zhì)膠粒失水，發(fā)生凝集而沉淀析出。 ？其特點(diǎn)有哪些？ 超臨界流體：當(dāng)一種流體處于其臨界點(diǎn) 的溫度和壓力之下，則稱之為超臨界流體。 －液萃取從機(jī)理上分析可分為哪兩類？ 小分子類傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑萃取系統(tǒng)，大分子類生物質(zhì)的兩水相萃取系統(tǒng)。 將離子交換膜浸入電解質(zhì)溶液中，并在兩側(cè)同以電流時(shí)，則只有與膜上固定電荷相反的離子才能通過(guò)膜。 – 耐壓：膜孔徑小，要保持高通量就必須施加較高的壓力，一般模操作的壓力范圍在 ~，反滲透膜的壓力更高，約為 1~10MPa – 耐高溫 :高通量帶來(lái)的溫度升高和清洗的需要 – 耐酸堿：防止分離過(guò)程中，以及清洗過(guò)程中的水解； – 化學(xué)相容性：保持膜的穩(wěn)定性； – 生物相容性：防止生物大分子的變性； 微濾 超濾 納濾 反滲透 懸浮顆粒 大分子有機(jī)物 糖類等小分子有機(jī)物，二價(jià)鹽或多價(jià)鹽 單價(jià)鹽 – 成本低； 5 主要的膜組件類型。 微濾 、 超濾 、 反滲透 、 氣體分離、滲析、電滲析 、滲透蒸發(fā) 。名解： 5 3’ 填空： 15 1’ 選擇： 15 2’ 簡(jiǎn)答： 5選 4（ 4 7’）分析題： 1 12’（考實(shí)驗(yàn)中實(shí)際操作） （名解 填空 簡(jiǎn)答均出自 ppt上的問(wèn)題） 膜分離 1 膜分離技術(shù)的概念。 普遍：膜內(nèi)平均孔徑，推動(dòng)力，傳遞機(jī)制。 4 對(duì)于膜材料的基本要求。 7 超濾的基本方程 ：穿透度（單位時(shí)間、單位膜面積的處理量） 8 了解親和膜分離技術(shù) 分離膜的改性：通過(guò)化學(xué)改性，在載體表面連接上一條“手臂鏈”（大于三個(gè)碳原子）； （ 1）親和膜制備：選用合適的配基 (Ligand)，與手臂鏈相連，構(gòu)成帶有親和配基的分離介質(zhì)； （ 2）親和絡(luò)合：將混合物緩慢地通過(guò)膜，使要分 離的物質(zhì)與親和配基產(chǎn)生特異性作用，形成配基與配位物（ Ligate）的復(fù)合體； （ 3）洗脫：改變條件（洗脫液組成、 pH、離子強(qiáng)度、溫度等），使復(fù)合物解離； （ 4）親和膜再生：洗滌、再生、平衡，以備下次操作使用 9 了解電滲析的工作原理 所用選擇性滲透膜只有共價(jià)結(jié)合的陰離子或陽(yáng)離子交換基團(tuán)，在電勢(shì)的驅(qū)動(dòng)下，陰離子交換膜只能通過(guò)陰離子，陽(yáng)離子交換膜只能通過(guò)陽(yáng)離子。 11 何謂強(qiáng)制膜分離過(guò)程？ 萃取 利用在兩個(gè)互不相溶的液相中各種組分（包括目的產(chǎn)物）溶解度的不同，從而達(dá)到分離的目的 包括：物理萃取 化學(xué)萃取。 。 原理 —— 生物大分子在水溶液中的存在狀態(tài)：（ 1）兩性電解質(zhì)，由于靜電力的作用，分子間相互排斥，形成穩(wěn)定的分散系（ 2）蛋白質(zhì)周圍形成水化膜，保護(hù)了蛋白質(zhì)粒子，避免了相互碰撞 。 （ 2）由于有機(jī)溶劑的水合作用，降低
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