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【正文】 了自由水的濃度,降低了親水溶質(zhì)表面水化層的厚度,降低了親水性,導(dǎo)致脫水凝聚 影響有機(jī)溶劑沉析的主要因素有哪些? ( 1)溫度:低溫有利于防止溶質(zhì)變性;有利于提高收率(溶解度下降); ( 2)攪拌速度:散熱 ( 3)溶液 pH 值:原則是避免目標(biāo)蛋白與雜質(zhì)帶有相反的電荷,防止共沉現(xiàn)象。 ( 3)無機(jī)復(fù)合鹽:磷鎢酸鹽、磷鉬酸鹽等 。 吸附過程: 待分離料液與吸附劑混合、吸附質(zhì)被吸附到吸附劑表面、料液流出、吸 附質(zhì)解吸回收等四個(gè)過程 . ?它們是如何劃分的? 吸附作用是根據(jù)其相互作用力的不同來分類的,按照范德華,分子鍵和鍵合力的特性可分為: 此外,根據(jù)吸附過程中所發(fā)生的吸附質(zhì) — 吸附劑之間的相互作用不同,分為: 附 根據(jù)實(shí)驗(yàn)中所采用的方法,分為: 1 間歇式 ? 活性炭 , 大孔網(wǎng)狀吸附劑 ?其意義何在? 固體在溶液中的吸附,是溶質(zhì)和溶劑分子爭(zhēng)奪表面的凈結(jié)果,即 在固體界面上,總是被溶質(zhì)和溶劑兩種分子占滿。 ? 吸附劑的性質(zhì):比表面積、粒度大小、極性 … 吸附質(zhì)的性質(zhì):對(duì)表面張力的影響,溶解度,極性,相對(duì)分子量 … 溫度:吸附是放熱過程,吸附質(zhì)的穩(wěn)定性 溶液 pH 值:影響吸附質(zhì)的解離 鹽濃度:影響復(fù)雜,要視具體情況而定 ?其特點(diǎn)有哪些? 在一種作為載體的固相介質(zhì)上,吧具有一定生物專一性的配基共價(jià)偶聯(lián)上去,制成具有某一特定親和力的親和吸附劑,進(jìn)行吸附操作,從混合溶液中分離出與配基有專一親和力的生物活性物質(zhì)。 2 色譜分離技術(shù)的分類 1) 按兩相所處的狀態(tài)分類 : 氣相色譜法 , 液相色譜法 (液固色譜 , 液液色譜 ) 2) 按固定相的幾何形式分類 : 柱色譜法 , 紙色譜法 , 薄層色譜法 3) 按分離原理分類 : 吸附色譜法 , 分配色譜法 , 離子交換色譜法 , 尺寸排阻色譜法 , 親和色 譜法 3 什么是色譜柱的理論塔板數(shù)以及如何計(jì)算? N理論塔板數(shù) tR保留時(shí)間 W1/2半峰寬 Wb峰底寬度 理論塔板高度: L柱長(zhǎng) 4 吸附色譜及其分類和基本原理 原理 :利用溶質(zhì)與吸附劑之間的分子吸附力 (范德華力,包括色散力、誘導(dǎo)力、定向力以及氫鍵 )的差異而實(shí)現(xiàn)分離 。而小分子物質(zhì)能夠進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中,向下移動(dòng)的速度較慢,從而使樣品中各組分按相對(duì)分子質(zhì)量從大到 小的順序先后流出層析柱,而達(dá)到分離的目的。 u 簡(jiǎn)述凝膠色譜的工作原理? 電泳 、動(dòng)電現(xiàn)象 荷電的膠體粒子在電場(chǎng)中的移動(dòng) (當(dāng)電場(chǎng)沿切線方向作用于帶電表面時(shí),雙電層的兩部分分別受到相反方向的作用力,膠粒在分散介質(zhì)中朝著某一電極遷移的現(xiàn)象 ,稱為 “電泳 ) 表面帶電的膠粒與周 圍介質(zhì)(固 液或液 液界面)在外加電場(chǎng)作用下作相對(duì)運(yùn)動(dòng)而產(chǎn)生的電場(chǎng)現(xiàn)象,主要類型有 電泳、電滲、流動(dòng)電位與沉降電位 等四種動(dòng)電現(xiàn)象。在蛋白質(zhì)溶解液中,加入 SDS 和疏基乙醇,巰基乙醇可使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵還原,使多肽分成單個(gè)亞單位。 (3)瓊脂糖 透 明無紫外吸收 ,電泳過程和結(jié)果可直接用紫外光燈監(jiān)測(cè)及定量測(cè)定。 載體兩性電解質(zhì) pH 梯度等電聚焦是在支持介質(zhì)中加入載體兩性電解質(zhì),通以直流電后在兩極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)和線性的 pH 梯度,當(dāng)帶電的蛋白質(zhì)分子進(jìn)入該體系時(shí),便會(huì)產(chǎn)生移動(dòng),并聚集于相當(dāng)于其等電點(diǎn)的位置。 凝膠濃度第一向 第二向。 結(jié)晶 ? ? ? 固體物質(zhì)以晶體狀態(tài)從蒸氣或溶液中析出的過程 ? ? ? ( 1)只有同類分子或離子才能排列成晶體,因此結(jié)晶過程有良好的選擇性。 C2微小顆粒(晶核)的溶解度 C1正常晶體的溶解度 σ 晶體與溶液間的表面張力;ρ 晶體密度 L1正常晶體的半徑; L2普通晶體半 徑 R氣體常數(shù); T絕對(duì)溫度 M溶質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量 ? ? ? SS 曲線下方為穩(wěn)定區(qū),在該區(qū)域任意一點(diǎn)溶液均是穩(wěn)定的;在 SS 曲線和 TT曲線之間的區(qū)域?yàn)閬喎€(wěn)定區(qū), ? (1)不采取一定的手段(如加入晶核),溶液可長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定; ? (2)加入晶核后,溶質(zhì)在晶核周圍聚集、排列,溶質(zhì)濃度降低,并降至 SS 線; ? 飽和溶解度曲線和過飽和溶解度曲線之間的區(qū)域,可以進(jìn)一步劃分刺激結(jié)晶區(qū)和養(yǎng)晶區(qū)。溶質(zhì)溶解度與溫度、溶質(zhì)分散度(晶體大?。?? ? ? ? 1)熱飽和溶液冷卻(等溶劑結(jié)晶) ? 適用于溶解度隨溫度升高而增加的體系;同時(shí),溶解度隨溫度變化的幅度要適中; ? 2)部分溶劑蒸發(fā)法(等溫結(jié)晶法) ? 適用于溶解度隨溫度降低變化不大的體系,或隨溫度升高溶解 度降低的體系; ? 3)真空蒸發(fā)冷卻法 ? 使溶劑在真空下迅速蒸發(fā),并結(jié)合絕熱冷卻,是結(jié)合冷卻和部分溶劑蒸發(fā) 兩種方法的一種結(jié)晶方法。 ? ? ?其具體意義何在? ? 認(rèn)為晶體生長(zhǎng)包括 2 個(gè)過程: 1)分子擴(kuò)散過程,溶質(zhì)從溶液主體相擴(kuò)散通過一層液膜,竟如晶體表面; 2)表面化學(xué)反應(yīng),固液界面上溶液中的物質(zhì)與晶體表面上的物質(zhì)結(jié)合或沉積,形成一定大小的規(guī)則晶體。 ? 3)由于推動(dòng)力是粒子在晶體表面沉積,這種沉積成為表面結(jié)合過程,即溶質(zhì)分子和晶核嵌入晶體晶格中。 ? ( 3)晶種起晶法:將溶液蒸發(fā)后冷卻至亞穩(wěn)定區(qū)的較低濃度,加入一定量和一定大小的晶種,使溶質(zhì)在晶種表面生長(zhǎng) ? ? ? ? ? ? ( 1)晶體質(zhì)量包括三個(gè)方面的內(nèi)容:晶體大小 、 形狀 、 純度 ? ( 2)影響晶體大小的因素:溫度、晶核質(zhì)量、攪拌等 ? ( 3)影響晶體形狀的因素:改變過飽和度、改變?nèi)軇w系、雜質(zhì) ? ( 4)影響晶體純度的因素:母液中的雜質(zhì)、結(jié)晶速度、晶體粒度及粒度分布 ? ? ? 利用雜質(zhì)和結(jié)晶物質(zhì)在不同溶劑和不同溫度下的溶解度不同,將晶體用合適的溶劑再次結(jié)晶,以獲得高純度的晶體的操作 干燥 ? ? ? 用熱能加熱物料,使物料中水分蒸發(fā)或者用冷凍法使水分結(jié)冰后升華而除去的單元操作;通常是生物產(chǎn)品分離的最后一步 。因此,又稱為表面汽化控制階段。 結(jié)合水的蒸氣壓恒低于同溫下純水的飽和蒸汽壓,傳質(zhì)、傳熱推動(dòng)力逐漸減小,干燥速率隨之 降低; 干燥空氣的剩余能量被用于加熱物料表面,物料表面溫度逐漸升高,局部干燥
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