質(zhì)粒提取方法ppt課件-wenkub
2023-05-18 18:24:03 本頁面
【正文】 代細(xì)胞中保持恒定的拷貝數(shù) ,并表達(dá)所攜帶的遺傳信息。 在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi) ,共價閉環(huán)質(zhì)粒以超螺旋形式存在。 實驗?zāi)康模? 學(xué)會小量制備質(zhì)粒 DNA的堿裂解方法、 煮沸法、小量一步提取法這三種質(zhì)粒 DNA的提取方法。盡管在這項的條件下共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA也會變性，但兩條互補鏈彼此互相盤繞，仍會緊密結(jié)合在一起。加熱除了破壞細(xì)胞壁外，還有助于解開DNA鏈的堿基配對，并使蛋白質(zhì)和染色體DNA變性。 小量一步提取法： 從細(xì)菌中分離質(zhì)粒 DNA的方法都包括3個基本步驟 : 培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴(kuò)增 收集和裂解細(xì)胞 分離和純化質(zhì)粒 DNA 材料、設(shè)備及試劑 一、材料 含卡那酶素的 E. coli DH5α， (又稱eppendorf管 ), 離心管架。 氨芐青霉素 (Ampicillin, Amp)母液：配成 50mg/ml水溶液 , 20℃ 保存?zhèn)溆谩?H2 O,用冰醋酸調(diào) pH至 , 加水定容至 100ml, 分裝后高壓滅菌 ,儲存于 4℃ 冰箱。 溶液 Ⅲ ： 5 mol/L KAc 60ml，冰醋酸 ， H2O ，定容至100ml, 并高壓滅菌。冷卻后用 eppendorf管分裝成小份保存于 20℃ 。Cl()緩沖液反復(fù)抽提使之飽和并使其 pH值達(dá)到 ,因為酸性條件下DNA會分配于有機(jī)相。酚和氯仿均有很強的腐蝕性，操作時應(yīng)戴手套。 1 STET： mol/L NaCl， 10mmol/L Tris 1 電泳所用試劑： （ 1） TBE 緩沖液 (5 )：稱取 Tris 54g，硼酸 ，并加入 EDTA () 20ml，定溶至 1000ml。 二、 質(zhì)粒 DNA少量快速提取 質(zhì)粒 DNA小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒 DNA十分有用。Cl()， 10 mmol/L EDTA ()， 5% Triton X100。 ? 12022g，離心 5min，棄上清液，用 70%乙醇洗滌兩次，然后將離心管倒扣在吸水紙上，使盡量干燥。 加入新
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