【正文】 復(fù)合物的用于預(yù)防凝血和治療血栓病的藥物。 具有改善穩(wěn)定性的新的合成的異水蛭素 本發(fā)明涉及具有改善穩(wěn)定性和在３３，５２，５３，５４與５ 5位有不同氨基酸的異水蛭毒，以及用遺傳工程制備這類異水蛭素的方法，在酵母菌或大腸桿菌中獲得表達(dá)的產(chǎn)物，經(jīng)離子交換和反相層析法得到高純度的異水蛭素。本申請還公開了上述ＦＸａ抑制劑的性質(zhì)和臨床上應(yīng)用的組合物。 由南美水蛭中提取和純化抗凝血成分 申請人已經(jīng)從水蛭 ()的唾液腺提取物中分離出抑制因子 Xa的物質(zhì)。本發(fā)明進(jìn)一步涉及到血小板失活的藥物乙酰水 楊酸和直接的凝血酶抑制劑水蛭素用于治療未經(jīng)溶栓治療的急性心肌梗塞病人的藥物組合物。該提取物生產(chǎn)方法簡單，成本低廉，保存期長，采用抗凝血酶活性分析法進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控，使質(zhì)量穩(wěn)定，產(chǎn)品的療效有保證。 蛇粉和水蛭粉組合物及制備方法 本發(fā)明公開了一種蛇粉和水蛭粉 組合物，該組合物中各成份的重量百分組成是水蛭粉 10％ 30％和蛇粉 70％ 90％。給藥后藥物在體內(nèi)壽命較短，有效血藥濃度僅能維持 1 小時左右，難以適應(yīng)大多數(shù)慢性高凝狀態(tài)疾病患者長 期抗凝治療的需 要。 水蛭溶栓軟膠囊及其制備方法 一種水蛭溶栓軟膠囊，包括囊殼和囊殼內(nèi)的水蛭提取物；其制備方法包括： (1)明膠先加水使其膨脹，將甘油及剩余的蒸餾水在煮膠鍋中加熱至 70～ 80℃ ，混 合均勻，加入膨脹的明膠攪拌溶化，加入防腐劑，保溫 1～ 2小時，靜置過濾，保溫待用； (2)將蜂蠟加熱熔融后加入植物油與水蛭提取物形成的混懸液中，攪拌 均勻呈流動的半固體狀；或在均質(zhì)機(jī)中分散均勻； (3)壓制法或滴制法制備軟膠囊；本發(fā)明能 夠克服已有劑型的缺點(diǎn)，藥物的有效成分高度分散在基質(zhì)中，且特殊 情況下不用水即可吞服。采用全人工合成的方法獲得變異的HV2 全基因，在其 5’端上 游加入一段合適前導(dǎo)序列。構(gòu)建畢赤酵母分泌型表達(dá)載體 pHV2，載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞 GS115，并整合入宿主細(xì)胞的染色體中。生物利用度高，外形美觀，能掩蓋藥物的不良嗅味，滿足該類劑型在外觀、崩解和理化穩(wěn)定性方面的標(biāo)準(zhǔn)。本專利發(fā)明的口服水蛭素緩 (控 )釋新劑型延長了水蛭素在體內(nèi)的壽命，有效血藥濃度維持可達(dá) 624，并有較好的生物利用度，具有潛在新 一代口服抗凝藥物的價(jià)值。該組合物的制備方法是先把水蛭用水洗 干凈后，用熱水泡死，蛇除去內(nèi)臟，然后進(jìn)行蒸汽滅菌、高溫干燥，把干燥后的蛇、水蛭原料按比例混合后，進(jìn)行超細(xì)粉碎，最后進(jìn)行分裝，就得到成品。該提取物適 用范圍廣泛，可用于制備治療血栓引起的心腦血管疾病的藥物。一種含有水蛭素和ＡＳＡ協(xié)同物而不含任何溶栓劑的藥物組合物在本發(fā) 明的治療和預(yù)防方法中是特別有用的。應(yīng)用二乙氨乙基纖維素和肝素－瓊脂糖色譜樹脂分離提取物，用遞增 的鹽梯度進(jìn)行洗脫。 含水蛭素衍生物的分泌物 由大腸桿菌分泌型突變株獲得水蛭素衍生物的方法包括：（１）以編碼水蛭素衍生物的基因直接定位于編碼細(xì)菌信號肽的ＤＮＡ片段下游的方式構(gòu)建重組載體， （２）用構(gòu)建的重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌分泌型突變株，（３）在培養(yǎng)基中培養(yǎng)轉(zhuǎn)化后的細(xì)菌，（４）由培養(yǎng)基中獲得水蛭素衍生物，并獲得含有一個或更多個基因構(gòu) 建的拷貝的重組載體，該構(gòu)建基因編碼由細(xì)菌信號肽組成的蛋白和水蛭素衍生物組成的蛋白，水蛭素衍生物Ｎ－末端氨基酸序列是 Ａ－Ｔｈｒ－Ｔｙｒ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ．其中Ａ為Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ或Ａｓｎ。 醫(yī)用天然水蛭素的提取方法 醫(yī)用天然水蛭素的提取方法，涉及動物有效成分的提取。 $本發(fā)明為了提 高提供一種重組水蛭素與復(fù)合物按１ ∶２０ —１ ∶ ２重量比例配成用于抗凝血和治療血栓病的藥物，及其制備本發(fā)明的藥物方法。 用親合色譜法提純水蛭素的方法 本發(fā)明公開了一種從含有水蛭素和其它物質(zhì)的溶液中提純水蛭素的方法，其特征在于該方法包括使所述溶液經(jīng)過金屬離子親合色譜法處理的步驟，其中銅離子（Ｃｕ ++）用作金屬離子，磷酸鹽緩沖劑用作洗脫液。 基于水蛭素氨基酸 序列的凝血酶抑制劑 一種凝血酶抑制劑，它包括：大體積疏水性的第一部分，該部分能與負(fù)責(zé)蛋白酶解的凝血酶催化位點(diǎn)作用；和能維持下述氨基酸的疏水性和酸性的第二部分，其中的 氨基酸是指天然水蛭素在Ｃ端非催化區(qū)Ｎ－乙酰 —水蛭素４５ —６５處的氨基酸５５ —６０。 $其優(yōu)點(diǎn)在于，水蛭素可點(diǎn)眼也可結(jié)膜下注射，使用方便，免去手術(shù)的痛苦。以上疾病一旦發(fā)生，使用水蛭素均能使視力提高從而達(dá)到治療的目的。根據(jù)對野生型水蛭素的結(jié)構(gòu)及其生化特性的分析，設(shè)計(jì)了新型雙功能水蛭素分子結(jié) 構(gòu)。 水蛭素基因 hv2－ 47k 及其合成與表達(dá) 本發(fā)明是以天然水蛭素的二十多種變異體的氨基酸序列資料為依據(jù)，以 HV2型水蛭素為原型，將其第 47位天冬酰胺 (N)替換為賴氨酸 (K)，選用甲醇酵母 Pichia pastoris 所喜好的遺傳密碼子，合成八段脫氧核苷酸片段 (引物 )，采用遞歸式 PCR(Recursive PCR)法進(jìn)行拼接，最終得到可插入 pPIC9 質(zhì)粒載體的新型水蛭素基因 hv2－ 47k。本發(fā)明還涉及馬尼拉水蛭酶的重組生產(chǎn)方法，包括 DNA和氨基酸序列以及表達(dá)載體和宿主系統(tǒng)的公開。將合成的水蛭素基因放入酵母的表達(dá)質(zhì)粒中，轉(zhuǎn)化酵母后經(jīng)分泌表達(dá)和一系列純化步驟，可以制備得到高純度、高比活性的重組水蛭素。 一種有利于減少水蛭素降解的重組畢赤酵母菌株及其構(gòu)建方法 本發(fā)明提供了 一種有利于減少水蛭素降解的重組畢赤酵母菌株，其內(nèi)含有失活的 KEX1基因，相對于未失活的 KEX1基因，失活的 KEX1基因的編碼區(qū)及非編 碼區(qū)插入了或缺失了 DNA 片段，更具體地，失活的 KEX1基因的編碼區(qū)缺失了第 289～ 1728 位堿基序列，即其編碼的蛋白酶缺失了第 97～ 576 位氨基 酸，采用該重組畢赤酵母菌株表達(dá)水蛭素的發(fā)酵過程中，完整水蛭素占總水蛭素的比例達(dá)到 60％～90％，完整水蛭素產(chǎn)量達(dá)到 。本方法采用超濾法分離蛋白，解決了水溶 性的水蛭素和蛋白的分離問題；采用冷凍干燥技術(shù)，使血樣中微量的水蛭素得以富集；采用質(zhì)譜檢測器，明顯提高了檢測的選擇性和靈敏度；整個色譜分析過程時間 為 15min以內(nèi)。本發(fā)明利用超臨界 CO2流 體包衣技術(shù)，以聚乳酸為包衣材料包覆重組雙功能水蛭素藥物顆粒，制成口服制劑，所制備的制劑顆粒規(guī)則，表面光滑，外觀均勻，無粘連，平均粒徑在 70105μm，載藥量、包封率高。該工藝干燥后的水蛭保持了營養(yǎng)成分和活性 物質(zhì)，含水率低。菲牛蛭唾液用生理鹽水提取，提取液煮沸、過濾、取濾液。濾液煮沸后迅速冷卻，冷藏過夜。該工 藝采用從整體菲牛蛭中提取水蛭素，可以工業(yè)化生產(chǎn)。再用生理鹽水洗滌水蛭素粗品，然后濃縮洗滌液，最后冷凍干燥得到產(chǎn)品。 一種重組水蛭素編碼基因與應(yīng)用 本發(fā)明公開了一種重組水蛭素編碼基因與應(yīng)用。該重組菌能高水平生產(chǎn)重組水蛭素；所生產(chǎn)的重組水蛭 素具有高抗凝比活性。本發(fā)明的天然水蛭素復(fù)方藥用保健品無需其它處理工藝，在常溫常壓下，其天然水蛭素的活性物質(zhì)能長期保持穩(wěn)定，在食用時，其活性物質(zhì)也不會受 高、低溫處理而喪失，使人體能充分吸收天然水蛭素的活性物質(zhì)，在治療、美容化妝以及保健品方面都有著很好的效果。 活血中藥三七和水蛭提取物制備的口服軟膠囊藥物制劑 本發(fā)明涉及以活血中藥材三七和水蛭提取物為原料制備的口服軟膠囊藥物制劑。 一種含有三七、瓜蔞皮、水蛭的治療心血管疾病的中藥制劑及其制備方法 本發(fā)明涉及一種含有三七、瓜蔞皮、水蛭的治療心血管疾病的中藥制劑及其制備方法，其特征在于本組方中含有三七、瓜蔞皮、水蛭三種中藥的活性成分為基本方，再根據(jù)臨床證候進(jìn)行不同中藥的活性成分配伍，組成治療心血管疾病的復(fù)方藥物。毒性極低，安全有效。本發(fā)明的水蛭蛋白酶抑素具有高效特異地抑制彈性蛋白酶活性的作用，在酸堿狀態(tài)下狀態(tài)穩(wěn)定，對于開發(fā)新的具有抑制彈性蛋白酶活性的藥物具有 重要意義。 水蛭素突變體的一種編碼基因與高效表達(dá)菌株 本發(fā)明公開了水蛭素突變體的一種編碼基因與高效表達(dá)菌株，目的是提供一種適于在大