【正文】 ～ 的比例加入雙蒸水制成滴眼液。本發(fā)明還提供了水蛭素突變體和產(chǎn)生水蛭素突變體的 工程菌—大腸埃希氏菌 (Escherichia coli)pBH2CGMCC №0908。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：針對(duì)現(xiàn)代醫(yī) 學(xué)對(duì)腦出 血病的治療而科學(xué)地篩選藥物，其產(chǎn)品具有活血化瘀功能，促進(jìn)顱內(nèi)血腫吸收之功效；可使血腫吸收時(shí)間提前，且日均吸血量明顯高于不服本藥品者，對(duì)入 腦室的患者效果甚佳，尤其適用于腦出血急性期，且療效高，無(wú)毒副作用，藥效肯定，對(duì)神經(jīng)功能損傷小，并促進(jìn)了神經(jīng)功能的恢復(fù)，減少死亡率，治療總有效率達(dá) 95％，因此對(duì)治療腦出血有著極其重要的意義。 人工水蛭蛋白酶抑素及其編碼基因與該基因的高效表達(dá)方法 本發(fā)明公開(kāi)了一種人工水蛭蛋白酶抑素及其編碼基因與該基因的高效表達(dá)方法，本發(fā)明提供的水蛭蛋白酶抑素，是具有序列表中序列 4氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)，或 者是將序列 4 的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與序列 4的氨基酸殘基序列相同活性的由序列 4 衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明藥物制劑是由 5mg10mg的三七總皂苷 (甙 )和 50mg水蛭提取物制 成。本發(fā)明所述制劑功能為活血祛瘀，通脈止痛，用于破血逐瘀，活血散瘀，通經(jīng)，通脈止痛；冠心病、心絞痛、急性心肌梗塞；缺血性腦中 風(fēng)，如腦血栓、腦梗塞及其后遺癥，高血粘度，高血脂癥，慢性高血壓； 動(dòng)脈粥硬化，胸痹心痛、眩暈、胸悶及心痛、體胖者等屬痰瘀凝聚者；也可用于癥瘕痞塊， 跌打周?chē)懿?，彌漫性血管?nèi)凝血 (DIC)；腦出血 (CT證明出血量＜ 50ml)恢復(fù)期及后遺癥的腦內(nèi)血腫的吸收。 水蛭蛋白酶抑素在化妝品中的應(yīng)用 本發(fā)明涉及一種水蛭體內(nèi)提取的小分子蛋白質(zhì) —水蛭蛋白酶抑素在制備化妝用品制劑中應(yīng)用，特別是利用其高效而特異性的彈性蛋白酶抑制作用，使皮膚組織內(nèi)彈性 蛋白的含量增加，進(jìn)而發(fā)揮其抗皺美容的功效。 一種水蛭素凍干粉針制劑及其制備方法 本發(fā)明公開(kāi)了一種水蛭素凍干粉針制劑及其制備方法，其特征在于從鮮水蛭提取水蛭素，純化后加或不加藥用輔料，制備成水蛭素凍干粉針制劑；其特征還在于本制 備方法不采用任何有機(jī)溶劑，采用超濾、離子交換柱層析、反滲透濃縮等方法純化，得到純度較高的水蛭素，加入或不加藥用輔料制備成凍干粉針劑，藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果 表明，本發(fā)明凍干粉針劑具有很好的藥理作用。本發(fā)明還公開(kāi)了一種重組 表達(dá)載體，該重組表達(dá)載體含所述水蛭素編碼基因。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用 本工藝提取的水蛭素有很好的藥理作用。濾液煮沸、過(guò)濾除雜蛋白。 本生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)品活力高，有很強(qiáng)的溶血栓作用。合并前后的全部濾液， 加入 Lyphgel處理兩次，過(guò)濾，去濾液。目的是解決傳統(tǒng)水蛭素提取工藝難以工業(yè)化生產(chǎn)的問(wèn)題。 一種水蛭的真空冷凍干燥工藝 本發(fā)明涉及一種水蛭的真空冷凍干燥工藝，其將水蛭進(jìn)行預(yù)凍后，進(jìn)行切割，裝盤(pán)。本方法還可對(duì)游離重組雙功能水蛭素的濃度進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明有利于減少水蛭素降解的重組畢赤酵母菌株能有效減少發(fā)酵 過(guò)程中水蛭素的降解，提高水蛭素的產(chǎn)量，并有助于下游的純化， 使得生產(chǎn)成本降低。對(duì)肝素相關(guān)性血小板減少癥具有治療價(jià)值。 用于由大腸桿菌向培養(yǎng)基中分泌來(lái)制備 Leu－水蛭素的信號(hào)序列 本發(fā)明涉及一種含有一種信號(hào)序列和 Leu－水蛭素序列的水蛭素前體及其制備方法和用途，并涉及一種尋找用于在大腸桿菌中分泌表達(dá)任何目的蛋白的信號(hào)序列的方法和用于在大腸桿菌中分泌表達(dá)任何目的蛋白的方法。 來(lái)源于馬尼拉水蛭的透明質(zhì)酸酶 ,分離、純化和重組生產(chǎn)方法 本發(fā)明涉及一種來(lái)源于熱帶水蛭馬尼拉水蛭 (Hirudinariamanillensis)的新型透明質(zhì)酸酶的分離、純化和表征。工程菌經(jīng)發(fā)酵擴(kuò)增，離心收集上清液，經(jīng) 三步法純化雙功能水蛭素。將目的基因置于信號(hào)肽基因下游進(jìn)行表達(dá)，目的產(chǎn)物便可形成正確的空間構(gòu)象同時(shí) 分泌至細(xì)胞外周質(zhì) 或 /及培養(yǎng)液中，本發(fā)明對(duì)表達(dá)生物活性蛋白或多肽時(shí)保證分子內(nèi)二硫鍵的正確構(gòu)象、方便表達(dá)產(chǎn)物的下游提取與純化具有重要的意義。水蛭素通過(guò)結(jié)膜下注射方法作用于晶體使混濁的晶體蛋白從新溶解透明。該化合物實(shí)用于治療血 栓形成類(lèi)疾病。該法獲得的水蛭水解血有含中小分子量蛋白質(zhì)或肽的動(dòng)物血，還含有水蛭素、消化血液的纖維蛋白酶（原）、透明質(zhì)酸酶及其它目前難以測(cè)定 的有用的水蛭分泌物。 高分子量的脫硫水蛭素 本發(fā)明屬于凝血酶抑制劑領(lǐng)域，并且描述了經(jīng)修飾的脫硫水蛭素的制備，更具體地講是借助于遺傳工程手段制備脫硫水蛭素。用 本發(fā)明提取的水蛭素工藝方法簡(jiǎn)便，成品質(zhì)量合格，而且收率提高到千分之四，從而大大降低了產(chǎn)品成本。水蛭素或水蛭素樣多肽 優(yōu)選在大腸桿菌或昆蟲(chóng)細(xì)胞中表達(dá)。反相色譜分離得到幾 種具有抑制因子Ｘａ活性的純肽或純蛋白質(zhì)。經(jīng)炮制的水蛭無(wú)腥 味，便于服用，可制成口服粉，治療中風(fēng)、半身不遂、心腦血管疾病，還可制成保健食品。 用水蛭素和乙酰水楊酸治療未溶栓的急性心肌梗塞病人的方法 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)將水蛭素和乙酰水楊酸（ＡＳＡ）組合物給予未經(jīng)任何溶栓劑治療的病 人，抑制或預(yù)防心肌或心血管疾病。 一種水蛭提取物及其生產(chǎn)方法和用途 本發(fā)明涉及一種水蛭提取物及其生產(chǎn)方法，以及該提取物的應(yīng)用，其特征是該提取物采用菲牛蛭活體生理鹽水提取，或活體冷凍融溶后生理鹽水提取，并經(jīng)冷凍干燥 方法制備而 成的固體提取物。該制劑能有效防止胃腸蛋白酶對(duì)重組水蛭素的降解作用，適用于有血栓形成傾向患者的抗凝治療?，F(xiàn)存的國(guó)內(nèi)外水蛭素類(lèi) 藥物在劑型設(shè)計(jì)上都是胃腸道直接溶解給藥和注射給藥。 菲牛蛭的養(yǎng)殖方法及水蛭素的提取技術(shù) 本發(fā)明提供了一種菲牛蛭的養(yǎng)殖方法及水蛭素的提取方法，是通過(guò)引進(jìn)優(yōu)良種源或野外捕捉到健壯的菲牛蛭，進(jìn)行人工分級(jí)分段馴、喂養(yǎng)，進(jìn)行人工繁殖，待飼養(yǎng)到 一定程度，采用化學(xué)物質(zhì)刺激鮮活菲牛蛭使其分泌出唾液，然后對(duì)其唾液進(jìn)一步分離過(guò)濾得到水蛭素粗品，再將水蛭素粗品進(jìn)行深加工得到符合醫(yī)用的水蛭素，該菲 牛蛭含抗凝血物質(zhì)比其它品種菲牛蛭含量高，藥用效果好，提取水蛭素方法簡(jiǎn)單，提取水蛭素后將菲牛蛭放回水池養(yǎng)殖，相隔一周或 10 天又可以再提取，每條鮮活 菲牛蛭 可以反復(fù)提取 67 次，每次能提取水蛭素粗品67毫升左右，產(chǎn)品質(zhì)量好，又節(jié)約資源，提高了菲牛蛭的利用價(jià)值。水蛭養(yǎng)殖及深加工技術(shù)大全 高效表達(dá)重組水蛭素及其生產(chǎn)方法 本發(fā)明涉及一種生物工程的抗栓藥物及其生產(chǎn)方法，具體而言是涉及一種新型水蛭素及其生產(chǎn)方法。篩選高效表達(dá)菌株，經(jīng)優(yōu)化發(fā)酵 誘導(dǎo)、分離純化步驟，提高了重組基因產(chǎn)物的生產(chǎn)效率，產(chǎn)物表達(dá)水平和生物學(xué)活性，以及對(duì)抗凝、抗栓的藥效學(xué)研究表明，高于文獻(xiàn)報(bào)道，這為水蛭素 II型的大 規(guī)模生產(chǎn)和臨床 應(yīng)用的深入研究提供了物質(zhì)來(lái)源。 水蛭素口服緩 (控 )釋劑型 水蛭素是迄今為所知最強(qiáng)的凝血酶抑制劑，天然水蛭素和應(yīng)用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組水蛭素都已經(jīng)應(yīng)用于臨床上心腦血管方面疾病的治療。 重組水蛭素口服腸溶緩釋制劑 本發(fā)明涉及重組水蛭素 (hirudin)口服腸溶緩釋制劑的組分、制備和應(yīng)用范圍，經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)，該類(lèi)制劑口服給藥對(duì)家兔頸靜脈血栓形成有明顯的抑制作 用，對(duì)大鼠外周血有顯著的抗凝功能。本發(fā)明具 有增強(qiáng)人體體質(zhì)、提高人體免疫能力、改善血循環(huán)能力的功效。 水蛭素與親脂化合物的水蛭素結(jié)合物 本發(fā)明涉及由水蛭素和一種或多種親脂化合物形成的水蛭素結(jié)合物，其中，所述親脂化合物的辛醇／水分配系數(shù)大于 ，而且與水蛭素化學(xué)相連，并涉及其制備和其應(yīng)用。 無(wú)腥味水蛭粉炮制工藝 一種無(wú)腥味水蛭粉的炮制工藝，其特征是將水蛭洗凈入高溫油內(nèi)炸焦黃后晾干研磨成粉。應(yīng)用結(jié)合到Ａ ffiCel15 樹(shù)脂上的因子 Xa，使提取物進(jìn)行親和色譜分離，用含有芐脒的ＨＥＰＥＳ進(jìn)行洗脫。 水蛭素的重組體制備方法 利用重組ＤＮＡ的方法制備具有抗凝血酶活性的水蛭素或水蛭素樣多肽。本發(fā)明采用從整體水蛭中提取水蛭素，先把水蛭漿加溫后調(diào)節(jié)ｐＨ值至４．４ —４．６，又降溫再調(diào)節(jié)ｐＨ 值至６ —７，然后離心脫水，殘?jiān)蒙睇}水反復(fù)洗滌，母液透析后用９５％ 以上乙醇