微生物限度檢查法純化水驗證方案-wenkub
2022-11-06 19:11:18 本頁面
【正文】 檢查法純化水驗證方案 編號 起草人 審核人 批準人 日期 日期 日期 頒發(fā)部門 質量管理部 生效日期 制作備份 分發(fā)部門 質量保證 室、 質量控制 室 版本： 1 一 概述 本驗證是對細菌，霉菌酵母菌計數項下檢查法 2 薄膜過濾法進行細菌，霉菌及酵母菌的計數方法驗證。若試驗組的 菌回收率均不低于 70%，照該供試液制備方法和計數法測定供試品的細菌、霉菌及酵母菌；若任一次試驗中實驗組的菌回收率低于 70%，應采用其他方法消除供試品的抑菌活 性，并重新進行方法驗證。 ℃培養(yǎng) 18～ 24h，用 ％無菌氯化鈉溶液制成每 1ml 含菌數為 50～ 100cfu 的菌懸液，做活菌計數備用?！媾囵B(yǎng) 5～ 7d，加入 3～ 5ml 含 %（ ml/ml）聚山梨酯 80 的 ％無菌氯化鈉溶液，將霉菌孢子洗脫。 試驗組： 取供試液 1ml，過濾，沖洗，分別在最后一次的沖洗液中加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、入白色念珠菌和黑曲霉試驗菌懸液各 1ml，過濾，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂 培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。 培養(yǎng)和計數 以上各組中做細菌計數的平皿與 3035℃倒置 培養(yǎng) 3 天，霉菌、酵母菌與 2328℃倒置培養(yǎng) 5 天，逐日觀察菌落生長情況，點計菌落數，必要時，可適當延長培養(yǎng)時間至 5～ 7 天進行菌落計數報告。 一般營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細菌計數，玫瑰紅鈉培養(yǎng)基用于霉菌及酵母菌計數。 計算回收率： 試驗組的菌數回收率（ %）＝（實驗組的平均菌落數 — 供試品對照組的平均菌落數） /菌液組的平均菌落數 100% 稀釋劑對照組的回收率（ %）＝ (稀釋劑對照組平均菌落 /菌液組平均菌落數數 ) 100% 判斷標準： 本次試驗各試驗組的菌回收率和各稀釋劑對照組的菌回收率均應不低于 70%。 附表一 題目 微生物限度檢查法純化水驗證 報告 編號 起草人 審核人 批準人 日期 日期 日期 頒發(fā)部門 質量管理部 生效日期 制作備份 分發(fā)部門 質量保證 室、 質量控制 室 版本： 1 一 概述 本驗證是對細菌，霉菌酵母菌 計數項下檢查法 2 薄膜過濾法進行細菌，霉菌及酵母菌的計數方法驗證。若試驗組的 菌回收率均不低于 70%，照該供試液制備方法和計數法測定供試品的細菌、霉菌及酵母菌；若任一次試驗中實驗組的菌回收率低于 70%，應采用其他方法消除供試品的抑菌活性，并重新進行方法驗證。 取新鮮的白色念珠菌的培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中， 經 ℃培養(yǎng) h，用 ％無菌氯化鈉溶液 10 倍稀釋 105制成每 1ml含菌數為 50～ 100cfu 的菌懸液，做活菌計數備用。 菌液組： 分別取上述 5 種試驗菌懸 驗菌平行制備 2 個平皿，按平皿菌落計數法測定其菌數。 備注：以上各菌懸液中大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌用 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 作為細菌計數； 白色念珠菌和黑曲霉 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng) 作為霉菌酵母菌計數。若同稀釋級別兩個平板的菌落平均數不小于 15，則兩個平板的菌落數不能相差 1 倍或以上。 菌數報告規(guī)則 若濾膜上無菌落生長，以 1 報告菌數，或 1 乘以稀釋倍數的值報告菌落數。 九 結論 ： 十 再驗證周期 國家相關微生物限度檢查標準修改后需要對本方法重新進行再驗證。 七 異常情況處理 嚴格按照《微生物限度檢查法 SOP》操作，如在檢測中有不符合要求的情況出現(xiàn)，分析問題原因后，決定是否需對本方案中設定的微生物限度檢查方法進行修改，并重新進行驗證。在特殊情況下，若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌和酵母菌，玫 瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細菌，則應分別點計霉菌和酵母菌，細菌菌落數。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數。每株試驗菌平行制備 2個平皿， 按平皿菌落計數法測定其細菌數 稀釋劑對照組： 用相應的稀釋液即 無菌氯化鈉 蛋白胨緩 沖液代替供使品，加入各試驗菌 1ml，按實驗組供試液制備方法和菌落計數方法測定其菌數 。然后吸出孢子懸液（用管口帶有薄的無菌棉花或紗布能過濾菌絲的無菌毛細吸管）至無菌試管內，用含 %（ ml/ml）聚山梨酯 80的 ％無菌氯化鈉溶液 10 倍稀釋 105制成每 1ml 含菌數為 50～ 100cfu 的菌懸液，做活菌計數備用。 枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 6350金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 2600大腸埃希菌 CMCC（ B） 4410白色念珠菌 CMCC (F) 9800 黑曲霉 CMCC(F)98003。 二 目的 建立該純化水的微生物限度檢查方法 ，并對其有效性進行評價，確保試驗方法的完整性，保證檢驗結果的可靠性。 八 測試結果 細菌、霉菌 及酵母菌計數方法驗證結果見附表 1，此表三份次數分別為 3次。然后將營養(yǎng)瓊脂上的霉菌和酵母菌或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上細菌數與玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上的霉菌和酵母菌或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的細菌數進行比較，以菌落數高的培養(yǎng)基中的菌落數為計數結果。點計菌落數后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數，按菌數報告規(guī)則報告菌數。 陰性對照組：取實驗用的稀釋
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