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分子生物學(上)-wenkub

2023-04-22 03:16:27 本頁面
 

【正文】 生物體的復制單位稱為復制子。) 堿基間距/nm 螺旋直徑/nm 每輪堿基數(shù) 螺旋方向ADNA 20 11 右BDNA 6 10 右ZDNA 7 12 左186。如,在雜交分子或 DNA處于轉錄狀態(tài)時。以上可用于解釋原核生物基因組雖小,但卻可以獨立完成整個生命活動的原因(從 DNA上說) 。存在轉錄單元多順反子:原核生物 DNA序列中功能相關的 DNA和蛋白質基因,往往叢集在基因組的一個或幾個特定的部位,形成功能單位或轉錄單元,它們可能被一起轉錄為含多個 mRNA的分子,則多順反子 mRNA,其 DNA學列就是多順反子。內容:真核生物中 C值隨生物進化而增加,高等低等。(4)兩個相鄰核小體以 0~80bpDNA 連接(物種間有差異) 。核小體:200 個左右堿基對的 DNA與四種組蛋白結合而成。特征:①進化上極端保守(HH4H2A、H2BH1②無組織特異性(極少不含 H1而含 H5③肽鏈上 AA分布不對稱④修飾作用:甲基化、乙酰化、磷酸化、ADP核糖基化、HH4 作用普遍。Geics(遺傳學):由此延伸的分子遺傳學研究了基因結構/復制/表達/重組/突變。 (與通過 X射線衍射證實該結構的Wilkins共享諾貝爾生理醫(yī)學獎。2 英國科學家 Griffith證明了什么?肺炎鏈球菌感染實驗證明了 DNA是遺傳物質3 Hershy和 Chase通過噬菌體侵染細菌實驗證明了什么?分別用 15S和 32P標記噬菌體蛋白質外殼和核酸,感染未百哦機細菌,觀察子代是否有標記。證實噬菌體 DNA侵染細菌的實驗流程,證明侵染過程中發(fā)揮作用的是 DNA不是蛋白質(遺傳物質是 DNA而非蛋白質) 。6 Sanger和 Gilbert 發(fā)明了什么技術?DNA序列分析法(雙螺旋測序)7 誰發(fā)明了 “DNA 體外擴增技術”?PCR,美國科學家 Mullis8 分子生物學的三大支柱學科是什么?cytology(細胞學):生物體由細胞組成 所有組織的最基本單元——形狀相似,高度分化的細胞。Biochemistry(生物化學):分離、純化、鑒定細胞內含物質的目標。⑤H5 富含 Lys,有種特異性,與 H1無明顯血緣關系。(1)H2A、H2B、HH4 各兩個組成八聚體,為核心 DNA。10 “ C值悖理”的定義及基本含義是什么?c值通常是指一種生物單倍體基因組 DNA的總量。 實驗證明,兩棲動物哺乳動物,而且兩棲中 C值相差很大。原核生物中可存在數(shù)個多順反子及其他如操縱子()轉錄功能單位。12 DNA三種構型的異同及其主要存在方式.通常情況下 DNA二級結構分成兩大類,右手螺旋有 A-DNA 和 B—DNA,左手螺旋有Z-DNA。B-DNA 中的多聚 G-C 區(qū)易形成左手螺旋 DNA,即 Z-DNA。13 半保留復制、半不連續(xù)復制的機理,主要參與的酶與蛋白有哪些?,復制方向如何?親代雙鏈 DNA分子在 DNA聚合酶的作用下,分別以每條單鏈 DNA分子為模板,聚合與自身堿基可以互補配對的游離的 dNTP,合成出兩條與親代 DNA分子完全相同的子代 DNA分子的過程。一個復制子只含一個復制起點。參加的酶和蛋白:解旋、解鏈:TopⅠ:解負超螺旋(W 蛋白)無需能量 TopⅡ:使雙鏈同時斷裂,連接,需 ATP。引發(fā)酶:Primase,與 6種蛋白質組成引發(fā)體,與 RNA polyase引發(fā)后滯鏈的引物RNA。DNA聚合酶Ⅲ:7 種不同亞單位 9個亞基,生物活性形式為二聚體; 5’?3’聚合酶,活力較強,主要酶; 3’?5’外切酶。復制子:一般把生物體的復制單位稱為復制子,一個復制單位只含一個復制起點。 滾環(huán)型:單向復制的特殊方式,DNA 被專一切割,形成自由 5’端被從環(huán)中置換出來并被單鏈 DNA結合蛋白覆蓋,使 3’OH端繞 DNA環(huán)延伸。16 DNA Polymerase I, II, III性質的比較 P47Ⅰ Ⅱ Ⅲ4 / 123’?5’外切 + + +5’?3’外切 + - -新生鏈合成 - - +生物學活性 1 15已知結構基因 polA polB polC都需要模板指導,以 dNTP作為底物,且需要 3’-OH 的引物鏈,聚合反應方向為 5’ ?3’。17 線性 DNA 5’端的復制如何?其生物學意義如何? 線性 DNA復制中的 RNA引物被切除后,留下 5’端部分單鏈 DNA,不能為 DNA聚合酶所作用,使子鏈短于母鏈。(2)核苷酸切除:核苷酸發(fā)生損傷后,由 DNA切割酶在已損傷的核苷酸 3’、5’分別切開磷酸糖苷鍵,移去小片斷后由 DNA polyaseI合成新片斷,并由 DNA連接酶完成修復中的最后一道工序。直接修復:把被損傷的堿基回復到原來的狀態(tài),并不需要切除堿基或核苷酸,光復活作用:DNA 光解酶。轉座:一個轉座子由基因組的一個位置轉移到另一個位置的過程。5 / 12 (3)轉座時往往宿主靶位點一小段 DNA形成 IS兩端的正向重復序列。 (表明 IS序列插入到某個功能基因兩端時可能產生復合轉座子) 。(2)殘生新基因。原核:-10TATA 區(qū),-35TTGACA 區(qū),啟動區(qū)范圍較小。22 RNA聚合酶全酶與核心酶的組成成分及其作用是什么?主要區(qū)別?以 DNA為指導的 RNA聚合酶:(1)以 4種核糖核苷三磷酸 NTP作為底物,DNA 為模板,Mn 2+/Mg2+輔助因子。全酶:核心酶加上一個 σ 亞基,只有 σ 存在時,轉錄起始才進行,σ 亞基為起始亞基。σ:是酶的別構效應物,提高 RNA聚合酶對啟動子 DNA親和力,專一性識別模板上的啟動子;不同 σ 因子識別不同啟動子。mRNA:編碼特定蛋白質序列的信使 RNA。啟動子:5’確保轉錄精確而有效地起始的序列。P69酶 細胞內定位 轉錄產物 相對活性 敏感程度6 / 12DNApolyaseⅠ 核仁 rRNA 50~70% -DNApolyaseⅡ 核質 hnRNA 20~40% +DNApolyaseⅢ 核質 tRNA ≈10% 存在物種特異三種聚合酶中有兩個行對分子量超過 1105的大亞基;同種生物 3類聚合酶有“共享”小亞基的傾向。轉錄起始前,啟動子附近的 DNA雙鏈會分開形成轉錄泡,促使底物 NTP,與模板 DNA配對。在解鏈區(qū)后面,DFNA 模板鏈與原先配對的非模板鏈重新結合成雙螺旋。特點:72bp,起始位點約 200bp處。GC區(qū)同上27 原核生物與真核生物 mRNA的特征主要表現(xiàn)在什么地方?單順反子:只編碼一個蛋白質的 mRNA稱為單順反子。mRNA帽子常被甲基化;帽子結構可能使mRNA免受核酸酶破壞。原核 mRNA5’端無帽子結構,3’端無poly(A)或只有較短的 poly(A)幾乎都是單順反子,通過 RNA聚合酶Ⅱ進行轉錄。28 DNA甲基化狀態(tài)可能調節(jié) DNA復制的機理如何?P250DNA甲基化能引起染色質結構、DNA 構象、DNA 穩(wěn)定性及 DNA與蛋白質相互作用方式的改變,從而控制基因表達。研究表明,當組蛋白 H1與含 CCGG序列的甲基化或非甲基化 DNA分別形成復合體時,DNA 的構型存在著很大的差別,甲基化達到一定程度時會發(fā)生從常規(guī)的 BDNA向 ZDNA的過渡。當這一類啟動子被增強時(帶有增強子) ,既使不去甲基化也可以恢復其轉錄活性。真核生物中 5-mC 主要出現(xiàn)在 5’-CpG-3’序列中,5-mC 脫氨后生成的胸腺嘧啶,不易被識別和矯正。終止因子:協(xié)助 RNA聚合酶識別終止信號的蛋白因子。終止效率與二重對稱序列和寡聚 U的長短有關。Ⅰ型:鳥苷或鳥苷酸的 3’-OH 作為親核基團攻擊內含子 5’端磷酸二
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