【正文】 或1. 61042多不可計29546377501043多不可計27160271001044多不可計多不可計313——313000104527115——2701026000——＜110＜107多不可計30512——30500104微生物檢測的第二個重要指標就是大腸菌群的測定，大腸菌群系指一群在37度能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性的無芽胞桿菌。，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例6）.~300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1例7）。（2）稀釋度的選擇~300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例1）。（1）平板菌落數(shù)的選擇 選取菌落數(shù)在30—300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準，一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌數(shù)生長時，則不宜采用，應(yīng)以無片狀菌數(shù)生長的平板柞為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2代表全皿菌落數(shù)，平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時（菌落之間無明顯界線）若僅有一條鏈，可視為一個菌落，如有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個菌落計。 ，瓶口要過火焰。，檢液加入平皿后，應(yīng)盡快傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻，可正反兩個方向旋轉(zhuǎn)，檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用時間不宜超過20min，以防止細菌有所死亡或繁殖?！嫠?nèi)保溫，溫度過高會影響菌的生長，過低瓊脂易于凝固而不能與菌液充分混勻。樣品如果有包裝，應(yīng)用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。2h。（5）稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時（從檢樣稀釋到傾注平板不超過20min）將涼至46℃左右營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿內(nèi)15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。固體檢樣最好用均質(zhì)器以800010000r/min的速度處理1min，做成1:10的均勻稀釋液?？梢姲丫淇倲?shù)就等同于細菌總數(shù)是不確切的。而菌落總數(shù)就是指食品經(jīng)過檢樣處理，在一定條件下進行培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度和時間、PH、需氧性質(zhì)等），所得1mL（g）檢樣中所含菌落的總數(shù)。四、微生物檢驗食品中的微生物檢驗項目主要有四個：菌落總數(shù)、大腸菌群、霉菌和酵母菌、致病菌。在此培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌形成呈紫黑色帶金屬光澤的小菌落。鑒別培養(yǎng)基：在普通培養(yǎng)基內(nèi)加入某種試劑或化學藥品，使得某種微生物在這個培養(yǎng)基上生長后，可以產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物，這種代謝產(chǎn)物可以與培養(yǎng)基中的特定試劑或化學藥品起反應(yīng)，產(chǎn)生某種明顯的特征性變化?；A(chǔ)培養(yǎng)基：含有一般微生物生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基。各種微生物生長的最適pH各不相同，一般來說，細菌生長的pH在中性和微堿性之間（），酵母菌和霉菌生長的pH值通常是偏酸的（）。另外細菌和酵母菌對培養(yǎng)基的要求也不同，細菌一般用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)，而酵母菌則用麥芽汁培養(yǎng)基培養(yǎng)。我們經(jīng)常用到營養(yǎng)物質(zhì)：單糖、淀粉等（碳源）；尿素、硫酸銨、蛋白胨、牛肉膏等（氮源）；硫酸鋅等（無機鹽）。這也是為什么我們不同的微生物培養(yǎng)要選擇不同的培養(yǎng)基。三、培養(yǎng)基（北京陸橋）微生物的營養(yǎng)微生物同其他生物一樣，需要不斷地從外部環(huán)境中獲取營養(yǎng)，才能夠維持生命。霉菌的菌落一般比細菌菌落大幾倍到幾十倍，同一種霉菌，在不同成分的培養(yǎng)基上形成的菌落特征可能有變化，但各種霉菌，在一定的培養(yǎng)基上形成的菌落大小、形狀、顏色等卻相對穩(wěn)定。經(jīng)常會有食品會因為發(fā)生霉變而不能食用，還有些霉菌會產(chǎn)生毒性很大的毒素，比如黃曲霉素、黃米毒素、雜色曲霉素和展青霉素等等，都可能導(dǎo)致癌癥，這類霉菌在大米和花生中最多。是食品理論、工業(yè)發(fā)酵和釀造研究的主要對象，也是導(dǎo)致食品腐敗的主要類群。它們在活細胞外具有一般化學大分子的特征，在宿主細胞內(nèi)又具有生命特征。微生物群體非常龐雜，種類繁多，包括細胞型和非細胞型兩類。凡具有細胞形態(tài)的微生物稱為細胞型微生物?？梢宰鳛榱私獾氖?，病毒可以通過細菌濾器，且對抗生素不敏感，對干擾素敏感。細菌的基本形態(tài)有球狀、桿狀和螺旋狀,分別被稱為球菌、桿菌和螺旋菌。由此，對霉菌的檢測尤為重要。菌落特征也是鑒定霉菌的重要依據(jù)之一。微生物細胞主要有水、有機物和無機鹽等化學成份組成，不同的微生物種類其細胞的化學組成也不相同，而且含量也有差異。另外，同一種微生物在不同的培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)也有差別，所以在選擇培養(yǎng)基是要注意。培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基是人工配制的合適于不同微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)，是進行微生物培養(yǎng)的基礎(chǔ)。第二，注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和配比；微生物生長所需要的營養(yǎng)物往往是在濃度合適的條件下才表現(xiàn)出良好的作用，濃度大時反而對微生物生長期抑制作用。另外由于微生物在生長和代謝過程中，由于營養(yǎng)物質(zhì)的利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累，會改變培養(yǎng)基的pH值，如果不及時控制，往往會導(dǎo)致生長停止。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是最常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基；加富培養(yǎng)基：在普通培養(yǎng)基上加入其他營養(yǎng)物質(zhì)，用以培養(yǎng)某種或某類營養(yǎng)要求苛刻的一樣微生物；選擇培養(yǎng)基：根據(jù)某種或某一類微生物的特殊營養(yǎng)需求或?qū)δ撤N化合物的敏感性不同而設(shè)計出來的一類培養(yǎng)基。根據(jù)這種特點來區(qū)分微生物。而產(chǎn)氣桿菌則形成呈棕色的大菌落。其中致病菌又主要包括沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌。更確切地說即在需氧情況下，36℃177。我們可以看看長在營養(yǎng)瓊脂平板上最常見的菌落形態(tài)，當然并不是所有的菌落都會長的這么規(guī)則，而且也不是所有的菌落都會長的這么大，像葡萄酒、水這樣的樣品長出的菌落就會很小。（2）用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液），振搖試管，混合均勻，做成1：100的稀釋液。同時，將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入不加有1ml稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。取出計算平板內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（每毫升）樣品所含菌落總數(shù)。操作應(yīng)當在超凈工作臺或經(jīng)過消毒處理的無菌室進行。如無水浴，應(yīng)以皮膚感受較熱而不燙為宜。6．為了避免食品中的微小顆粒或培基中的雜質(zhì)與細菌菌落發(fā)生混淆，不易分辨，可同時作一稀釋液與瓊脂培基混合的平板，不經(jīng)培養(yǎng)，而于4℃環(huán)境中放置，以便計數(shù)時作對照觀察。 ，順便可以鑒定一下你的器皿、培養(yǎng)基以及水是否滅好菌了。如有片狀菌落生長，該平板一般不宜采用，如片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個平板的菌落數(shù)乘2代表全平板的菌落數(shù)。，其生長的菌落數(shù)均在30~300之間，則視兩者之比如何來決定若其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)；若大于2則報告其中較小的數(shù)字（見表1中例2及例3）。（3）菌落數(shù)的報告 菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告；大于100時，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入的方法計算。該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。其原理相同，區(qū)別在于接種樣品的稀釋度和各稀釋度的管數(shù)，三管系列接種三個稀釋度、每個稀釋度三管、五管系列接種五個稀釋度、每個稀釋度五管。1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24177。1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)18—24小 時，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并作革蘭氏染色和證實試驗。另外，挑取菌落數(shù)與大腸菌群的檢出率有密切關(guān)系，只挑取一個菌落，由于機率問題，尤其當菌落不典型時，很難避免假陰性的出現(xiàn)。1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24177。接著用95%酒精脫色，在一定條件下有的細菌此色不被脫去，有的可被脫去，脫色后再用一種紅色染料如堿性番紅等進行復(fù)染，前者仍帶紫色，后者則被染上紅色。現(xiàn)在一般認為革蘭氏陽性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度底，吸附染料差，易脫色。此外，兩類菌的細胞壁等對結(jié)晶紫—碘復(fù)合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色?！　。玻┎菟徜@結(jié)晶紫染1分鐘?！　。叮┘?5%酒精數(shù)滴進行脫色，直至流出的乙醇無紫色，立即水洗，吸去水分。干燥，鏡檢。標準中還提到了糞大腸菌群的檢出，它從屬于大腸菌群，我在這里簡單地給大家提一下，用接種環(huán)將前面講述的操作中所有產(chǎn)氣的乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于EC肉湯中，177。 微生物檢驗還有兩個重要指標就是霉菌、酵母的計數(shù)及致病菌的檢驗，因為企業(yè)的出廠檢驗微生物這塊主要是菌落總數(shù)和大腸菌群，所以后兩個指標我就給大家簡單介紹一下，讓大家了解一下。檢樣完畢后選擇合適的稀釋度，取1mL稀釋液加到平板內(nèi)，加入培養(yǎng)基待凝固后倒置放入25℃～28℃的培養(yǎng)箱內(nèi)，3天后開始觀察，共培養(yǎng)觀察5天。1℃培養(yǎng)4h,取10mL加入到100mL四硫酸鈉煌綠增菌液(TTB)內(nèi)于42℃培養(yǎng)18h～24h,同時，另取10mL于100mL亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液內(nèi)于36℃177。根據(jù)沙門氏菌在每種培養(yǎng)基上菌落形態(tài)挑取典型的可疑菌落(BS上產(chǎn)硫化氫的菌落呈褐色，灰色或黑色，有時帶有金屬光澤。我們都知道微生物的檢測最主要的就是要保證無菌操作，只有這樣才能保證出具數(shù)據(jù)的真實性和可靠性。從概念中我們就能看出來我們在做微生物的試驗是要進行前期的滅菌工作，而不是簡單的消毒。高溫滅菌包括干熱滅菌法和濕熱滅菌法，在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好，這是因為一方面濕熱易于傳遞熱量，另一方面由于濕熱更易破壞保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的氫鍵結(jié)構(gòu)，從而加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡。C，恒溫1小時即可。這就是為什么器皿及蒸餾水的滅菌都要在121℃高壓滅菌15分鐘以上，而一般的培養(yǎng)基滅菌也都采用121℃高壓滅菌15分鐘。此法為法國微生物學家巴斯德首創(chuàng)，故名為巴氏消毒法。具體做法是：將待滅菌的培養(yǎng)基在80～100176。第2天再重復(fù)上述步驟，三次左右，就可達到滅菌的目的。　　常