臨床微生物檢測(cè)的基因同源性分析-wenkub
2023-04-19 23:08:45 本頁(yè)面
【正文】 段分開，然后通過(guò)EB染色并在紫外燈下觀察其圖譜。Endonuclease對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器要求不高。實(shí)驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)：assay)：原理：探針雜交以及序列分析等方法是目前在分子水平上分析細(xì)菌的主要手段，它在鑒定細(xì)菌感染的爆發(fā)、確定院內(nèi)交叉感染、感染病原菌之間的基因同源性等方面有著重要的作用，本文將對(duì)常用基因同源性分析方法的機(jī)理和過(guò)程做簡(jiǎn)要綜述。目前，傳統(tǒng)的細(xì)菌鑒定和同源性分析技術(shù)已不能很好地滿足醫(yī)院感染診斷和流行病學(xué)調(diào)查的需要，從型、亞型、株，甚至分子水平上去認(rèn)識(shí)細(xì)菌變得愈來(lái)愈重要了。醫(yī)院感染的流行病學(xué)研究是臨床微生物學(xué)工作者的重要課題，在醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)的研究中，一個(gè)很重要的問題就是如何確定感染途徑和傳播途徑，以采取有效預(yù)防和控制措施，從而防止醫(yī)院感染或者暴發(fā)流行，因此對(duì)微生物鑒定和菌株同源性分析提出了更高的要求。近年來(lái)分子生物學(xué)的理論和技術(shù)在細(xì)菌感染診斷中的滲透和廣泛應(yīng)用，使得細(xì)菌鑒定、耐藥基因的檢測(cè)、分子流行病學(xué)調(diào)查變得更加準(zhǔn)確、簡(jiǎn)潔和快速。質(zhì)粒是可移動(dòng)的染色體外元件，可以自發(fā)丟失或者被宿主穩(wěn)定地獲得，因此流行病學(xué)上相關(guān)的分離菌株有可能表現(xiàn)出不同的質(zhì)粒圖譜。Assay同一種的不同分離菌株的DNA序列的變異可造成限制性位點(diǎn)數(shù)目和分布的變化，所以可以導(dǎo)致其REA圖譜出現(xiàn)差異。Eelectrophoresis實(shí)驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)：核糖體操縱子包括編碼16SrRNA和25SrRNA以及一種或多種RNA的核苷酸序列。rRNA末端磷酸；b.[γ32P]制備的探針能對(duì)所有的細(xì)菌進(jìn)行分型。缺點(diǎn)：Length實(shí)驗(yàn)流程：，抽提基因組DNA、pvuII酶消化；、轉(zhuǎn)膜；針雜交、Xray缺點(diǎn)：、純度要求高。六、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(Random引物結(jié)合位點(diǎn)DNA序列的改變以及兩擴(kuò)增位點(diǎn)之間DNA堿基的缺失、插入或置換均可導(dǎo)致擴(kuò)增片段數(shù)目和長(zhǎng)度的差異，經(jīng)聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠電泳分離后通過(guò)EB染色以檢測(cè)DNA片段的多態(tài)性。普通PCR，d1.[α35S]dATP，d2.過(guò)程中需要用到同位素。Length大小不同，基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，選擇性堿基的種類、數(shù)目和順序決定了擴(kuò)增片段的特殊性，只有那些限制性位點(diǎn)側(cè)翼的核苷酸與引物的選擇性堿基相匹配的限制性片段才可被擴(kuò)增。Genetic缺點(diǎn)：pal
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